QAII_Cromatografia_Fundamentos

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16/03/2012 
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Técnicas 
Cromatográficas 
Prof. Cleiton Nunes 
DCA/UFLA 
Bibliografia 
16/03/2012 
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Método físico-químico de separação dos componentes 
de uma mistura através da distribuição desses 
componentes entre duas fases: uma permanece 
estacionária, e a outra se move através dela. 
 
 
 
Runge (1850): espalhamento de tintas sobre um papel 
de filtro através da passagem de solventes. 
 
Botânico russo Mikhael Tswett (1906): Separação de 
misturas de pigmentos vegetais em colunas recheadas 
com adsorventes sólidos e solventes variados. 
 
Kuhn e Lederer (1930): início da cromatografia 
moderna. Separação de xantofilas da gema do ovo 
usando coluna recheada com CaCO3 e éter como fase 
móvel. 
Cromatografia 
 
chrom [cor] + graphe [escrever] 
 
(grego) 
 _____________ 
Eluente  F. estacionária  Eluato 
Eluição 
Processo 
cromatográfico 
fase móvel 
+ 
amostra 
fase móvel 
+ 
analito 
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Fase estacionária 
Fase móvel 
Técnica 
Cromatografia 
Planar 
Líquido 
Liquido Sólido 
Coluna 
Líquido 
Liquido Sólido 
Gás 
Liquido Sólido 
Aplicações da cromatografia 
Preparativa 
purificação 
de 
substâncias 
isolamento 
de 
substâncias 
Analítica 
identificação 
de 
substâncias 
quantificação 
de 
substâncias 
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O processo cromatográfico 
Princípios de separação 
Adsorção 
 
Principio de separação: competição de adsorção AN-FE por sítios na FE (polar) 
 
FE: sólido adsorvente 
Alumina – Al2O3 
 
sílica – SiO2 
 
FM: 
Hexano 
Metil-tercbutil-eter 
CHCl3 
CH2Cl2 
 
Aplicações: separação e purificação de reagentes e materiais sintetizados ou 
extraídos de produtos naturais, etc. 
S L 
G 
F.E F.M. 
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F.E F.M. 
L L 
G 
Partição 
Princípio de separação: diferença de solubilidade AN entre FM/FE 
 
FE: FE líquida ligada à superfície do suporte (SiO2) 
 
 
 
 
 
 FE polar FE apolar 
 
 
 
 
 
 
FM: MTBE, CHCl3, CH2Cl2, hexano FM: acetonitrila, MeOH, tetrahidrofurano, H2O 
 
Aplicações: aplicável a uma série de tipos de amostras 
Princípios de separação 
Mais usado 
 
 
Troca iônica 
 
Princípio de separação: atração entre íons do NA por sítios catiônicos/aniônicos na FE 
 
FE: matriz de polímero ou sílica com grupos catiônicos/aniônicos ligados 
 
 FE troca catiônica: SO3
-, COO- 
 FE troca aniônica: NR3
+ 
 
 
 
 
 
FM: soluções tampão 
 
Aplicações: separação de espécies iônicas orgânicas ou inorgânicas. 
Princípios de separação 
F.E F.M. 
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Princípios de separação 
poros 
F.E F.M. 
Exclusão molecular 
 
Princípio de separação: diferença de tamanho das moléculas de AN. Maiores eluem 1º 
 
FE: polímeros porosos. (PVA, poliacrilamida, S-DVB) 
 
 
FM: solvente orgânico - permeação em gel 
 aquosa - filtração em gel 
 
 
 
 
Aplicações: purificação de macromoléculas estimativa da massa molecular de 
macromoléculas. 
Afinidade 
 
Princípio de separação: interações específicas entre um tipo de molécula na 
amostra e uma segunda molécula quimicamente ligada à FE. 
 
Após a purificação, o analito é eluído pela mudança no pH, força iônica, 
temperatura ou reagente específico 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aplicações: purificação de moléculas biologicamente ativas. 
 
Princípios de separação 
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Processos de eluição em cromatografia líquida 
FASE NORMAL 
 
FE – polar FM – apolar 
apolar  polar FM mais usadas: 
Metil-tercbutil-eter 
Clorofórmio 
Diclorometano 
Hexano 
FASE REVERSA 
 
FE – apolar FM – polar 
polar  apolar 
FM mais usadas: 
Acetonitrila 
Metanol 
Tetrahidrofurano 
Água 
Processos de eluição em em cromatografia líquida