Roteiro Aula Prática 1_Coloração de Gram

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AULA PRÁTICA 1 
 
MORFOLOGIA E COLORAÇÃO DA CÉLULA BACTERIANA PELO MÉTODO DE GRAM 
 
I – Objetivos: 
 
Nesta aula, será feita a observação de bactérias ao microscópio. Uma das lâminas será 
corada pelos alunos, conforme roteiro abaixo. As demais já foram coradas e estão prontas 
para a observação. Na observação das lâminas coradas pelo método de Gram, as bactérias 
deverão ser classificadas quanto à coloração (como Gram positiva ou negativa), o arranjo 
(agrupamento) e a morfologia (coco ou bacilo), bem como as características macroscópicas 
das colônias. 
 
II – Materiais e Reagentes: 
 
 Bico de Bunsen 
 Lâminas coradas contendo o esfregaço de bactérias 
 Bateria de Gram: violeta genciana (ou cristal violeta), lugol, álcool 95%, fucsina 
 Alça bacteriológica de platina 
 Solução salina 
 Cultura positiva de bactéria. 
 
III – Procedimento experimental: 
 
a) Limpar uma lâmina de microscopia (passar algodão embebido em álcool). 
b) Com o auxílio da alça de platina, juntar uma alçada da colônia bacteriana e adicionar 
solução salina sobre a lâmina, espalhando-a por meio de movimentos circulares, a fim 
de se obter um esfregaço homogêneo. 
c) Secar o esfregaço distante da chama amarela do bico de Bunsen. 
d) Fixar o esfregaço passando a lâmina 3 vezes na chama azul do bico de Bunsen. 
e) Cobrir o esfregaço com a solução de violeta genciana. Esperar 1 minuto. 
f) Escorrer a violeta genciana e cobrir o esfregaço com lugol. Esperar 1 minuto. 
g) Escorrer o lugol e descorar o esfregaço pelo álcool. Para isto, deixe o álcool cair, gota 
a gota, sobre a lâmina, mantendo-a inclinada. Considerar o esfregaço suficientemente 
descorado quando o álcool não mais retirar o corante do mesmo. 
h) Lavar a lâmina em água corrente. 
i) Cobrir o esfregaço com a solução de fucsina, esperar, no máximo, 30 segundos. 
j) Lavar a lâmina em água corrente. Secar com auxílio de papel de filtro. 
k) Observar ao microscópio e desenhar / fotografar. 
 
IV – Resultados: 
 
a) Descrever as características macroscópicas da colônia. 
 
 Característica do meio utilizado (consistência, função e componentes presentes) 
 Morfologia das colônias (FIGURA 1). 
 
b) Observar e desenhar as características microscópicas. 
c) Identificação da bactéria. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 1 – Critérios para caracterização morfológica das colônias. 
Fonte: Neder, 1992 apud Maitan. Disponível em: 
http://professor.pucgoias.edu.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/7456/material/Aula%20n%C2%BA%20%209
%20identifica%C3%A7%C3%A3o%20bact%C3%A9rias.pdf. Acesso em 22/03/2023. 
 
V – Discussão: 
 
1. Justifique a utilização de um agente mordente nesta coloração. 
2. Explique a diferença da coloração adquirida pelas bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas (relacione os corantes e características biológicas dessas bactérias). 
 
 
 
 
http://professor.pucgoias.edu.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/7456/material/Aula%20n%C2%BA%20%209%20identifica%C3%A7%C3%A3o%20bact%C3%A9rias.pdf
http://professor.pucgoias.edu.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/7456/material/Aula%20n%C2%BA%20%209%20identifica%C3%A7%C3%A3o%20bact%C3%A9rias.pdf