Tópico 3 - unidade 3

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Biologia molecular
Doenças detectadas por métodos moleculares
Profª Dra. Maria Carolina Stipp
docente
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MÉTODOS MOLECULARES
Doenças que afetam o DNA mitocondrial, até as que alteram o DNA cromossomal
Atualmente, diversas doenças podem ser diagnosticadas através de métodos de biologia molecular. Desde doenças que afetam o DNA mitocondrial, até as que alteram o DNA cromossomal. Vamos destacar as doenças mais comuns e o uso do diagnóstico molecular.
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Intolerância à lactose
Intolerância congênita – rara, grave, com ausência total do gene da lactase;
Intolerância Primária – MCM6
Intolerância Secundária – doenças que afetam o TGI (doença celíaca, de Crohn, enterites).
MCM6 por qPCR (sangue, raspado da mucosa oral).
 
 
Diagnóstico
A intolerância à lactose pode ocorrer por via a congênita, a primária e a secundária. A congênita é a mais grave, e mais rara, representando a ausência total do gene da lactase. Isso pode levar ao óbito de recém nascidos devido a quadros de desidratação severa. 
A intolerância primária pode ocorrer por modulação na expressão genica pelo gene MCM6, que reduz a atividade da enzima lactase, no início da faze adulta, sendo uma condição normal relacionada a evolução humana. 
Já na condição secundária, a atividade é prejudicada de modo temporário, por condições do trato gastrointestinal, como doença celíaca, de Crohn, enterites. 
O diagnóstico pode ser realizado pela avaliação da presença de alterações no gene MCM6, em amostras de sangue, raspado da mucosa oral, qPCR.
 
 
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PCR multiplex 
Polimorfismos do tipo STR (microssatélites), herdados do pai ou da mãe. 
Eletroforese ou fluorescência
TESTE DE DNA
O teste de DNA ou paternidade são realizados por PCR multiplex. Diversos fragmentos são amplificados simultaneamente, realizados em amostras de DNA dos indivíduos envolvidos na confirmação da paternidade, e são seguidas de sequenciamento. 
Diversos marcadores de DNA são avaliados, como marcas únicas de DNA. Os mais usados no teste de paternidade são os polimorfismos do tipo STR ou microssatélites (1 a 8 nucleotídeos repetidos em sequencia em um número variável de vezes). Desta forma, de acordo com a herança genética dos pais, espera-se que o padrão de repetição em cada um dos cromossomos homólogos seja herdado ou da mãe, ou do pai. 
Existem kits de PCR multiplex, que marcam diferentes STRs com uma fluorescência diferente. Além disso, o material pode ser submetido a eletroforese, onde os STR são separados pelo seu tamanho.
 
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Doenças virais
PCR quantitativo 
Vírus HIV, Influenza, Vírus sincicial respiratório,
adenovírus, coronavírus
Mutações virais que levam a 
resistência farmacológica
A biologia molecular pode ainda ser utilizada no diagnóstico de doenças virais, por meio da técnica de PCR quantitativo, que detecta vírus como HIV, influenza, parainfluenza, rhinovírus, vírus sincicial respiratório, adenovírus, coronavírus. Podemos ainda realizar a identificação de genes responsáveis por mutações virais que levam a resistência farmacológica. 
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Análises complexas
Análise cromossômica por microarranjo;
Análise metagenômica do microbioma endometrial;
Sequenciamento do exoma
Outros métodos de análise, como análise cromossômica por microarranjo, análise metagenômica do microbioma endometrial e sequenciamento do exoma, são muito uteis. 
 
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Outros usos
Perfil genético do individuo, investigando o desempenho esportivo, ou melhora desse desempenho, 
Investigação do perfil genético relacionado ao metabolismo nutricional de um paciente para perda ou ganho de peso, por exemplo. 
Farmacogenômica.
Os métodos podem ainda indicar o perfil genético do individuo, investigando o desempenho esportivo, ou melhora desse desempenho, investigação do perfil genético relacionado ao metabolismo nutricional de um paciente para perda ou ganho de peso, por exemplo. Além disso, tem-se investigado o uso de genes específicos para facilitar a terapia de diferentes doenças, através da farmacogenômica.
Podemos ainda verificar o microbioma intestinal, que está diretamente ligado ao desempenho de funções fisiológicas complexas.
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Bons estudos
FONTE:
 
8
Obrigada!
“
seuemail@uniasselvi.com.br
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