Prova da coagulase

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Prova da coagulase 
 
 
PRINCÍPIO 
Verificar a capacidade de microrganismos reagirem com o plasma e formarem um coágulo, uma 
vez que a coagulase é uma proteína com atividade similar à protrombina, capaz de converter o 
fibrinogênio em fibrina, que resulta na formação de um coágulo visível. Pode ser encontrada em 
duas formas que possuem diferentes propriedades: coagulase conjugada e coagulase livre. 
 
A coagulase conjugada (prova em lâmina), é também conhecida como fator de aglutinação, 
encontra-se unida à parede celular bacteriana e não está presente em filtrados de cultivos. 
Quando as células bacterianas são suspensas em plasma (fibrinogênio), formam-se cordões de 
fibrina entre elas, o que causa agrupamento sob a forma de grumos visíveis. 
 
A coagulase livre (prova em tubo) é uma substância similar à trombina e está presente em 
filtrados de cultivos. É secretada extracelularmente e reage com uma substância presente no 
plasma denominado Fator de Reação com a Coagulase – CRF, para formar um complexo que, 
por sua vez, reage com fibrinogênio, formando fibrina (coágulos). Quando uma suspensão em 
plasma do microrganismo produtor de coagulase é preparada em tubo de ensaio, forma-se um 
coágulo visível após o período de incubação. 
 
UTILIDADE 
Separar as espécies de Staphylococcus de importância clínica, S. aureus – coagulase positiva, 
das demais espécies – coagulase negativa. 
 
INOCULAÇÃO 
Coagulase conjugada: 
 Traçar dois círculos com lápis de cera em uma lâmina de vidro; 
 Colocar duas gotas de água destilada ou solução fisiológica estéreis dentro de cada círculo; 
 Com auxílio de um fio bacteriológico agregar a colônia em estudo, homogeneizando 
delicadamente em cada círculo; 
 Colocar uma gota de plasma para a prova de coagulase em um dos círculos; 
 No outro círculo, adicionar outra gota de água destilada ou solução fisiológica estéreis, como 
controle; 
 Homogeneizar com palito de madeira; 
 Inclinar a lâmina delicadamente, para frente e para trás; 
 Observar presença de aglutinação. 
 
Coagulase livre: 
 Com auxílio do fio bacteriológico, suspender colônias em estudo em caldo BHI e colocar em 
estufa à 37ºC até que turve; 
 Se necessário, acertar a turbidez até 0,5 da escala de MacFarland; 
 Em um tubo de ensaio estéril, colocar 0,5 ml de plasma reconstituído e 0,5 ml do caldo BHI 
com crescimento bacteriano recém turvado; 
 Incubar em estufa à 35ºC 4 horas; 
 Verificar se há presença de coágulo; 
 Se não houver presença de coágulo, incubar o tubo em temperatura ambiente e repetir as 
leituras com 18 e 24 horas de incubação. 
 
 
INTERPRETAÇÃO 
Coagulase conjugada: 
+ Positiva: formação de precipitado branco e aglutinação dos microrganismos da suspensão, 
após 15 segundos, no círculo que contém o plasma. 
- Negativa: ausência de aglutinação no círculo que contém o plasma. 
***A presença de precipitado ou aglutinação, torna a prova inespecífica, devendo ser repetida a 
prova em tubo. 
 
Coagulase livre: 
+ Positiva: presença de qualquer grau de coágulo. 
- Negativa: ausência de coágulo.