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PROVA 1 - BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL – QBQ 316N – 2014 
Nome: ________________________________________________ 
O Dr. Ray Palmer, do laboratório S.T.A.R., está procurando um antídoto para uma toxina 
produzida pela Dra. Pamela Isley. Seus contatos em Themyscira sugeriram que um extrato de 
uma planta da região, a Femina mirabilis, poderia anular os efeitos desta toxina. De fato, o 
extrato desta planta é capaz de converter a toxina, que tem uma coloração esverdeada, em 
uma substância incolor. 
0) O Dr. Palmer acredita que a reação entre o extrato da planta e a toxina é catalisada por 
enzimas. Sugira um experimento para comprovar isso (0.5 pontos extras). 
1) Inicialmente, o Dr. Palmer extraiu proteínas de órgãos diferentes de F. mirabilis para tentar 
isolar a enzima. Ele quer determinar a quantidade de proteínas totais que ele obteve 
utilizando o reagente de Bradford. Desenhe no gráfico abaixo a curva-padrão da 
absorbância 550 nm pela massa de proteína e calcule a equação da reta utilizando os 
dados da Tabela 1 (1,0 ponto). 
 
Tabela 1 – Dados da curva-padrão para o ensaio de Bradford. 
 Albumina 
0.2 µg/µl (µl) 
Água 
(µl) 
Reagente de 
Bradford (µl) 
Massa de 
proteína (µg) 
Abs550 nm 
A 5 95 900 0.139 
B 10 90 900 0.175 
C 20 80 900 0.268 
D 30 70 900 0.516 
E 45 55 900 0.419 
F 60 40 900 0.478 
G 80 20 900 0.515 
H 100 0 900 0.519 
Branco 0 100 900 0.157 
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2) Como você explicaria a absorbância obtida na amostra D (dado sublinhado)? (0,5 pontos) 
3) Para qual intervalo de massas esta curva-padrão pode ser utilizada? (0,5 pontos) 
O Dr. Palmer prosseguiu o experimento e, utilizando-se o reagente de Bradford com amostras 
de proteínas extraídas de suas plantas, obteve as seguintes absorbâncias a 550 nm: 
Tabela 2 – Dados da curva-padrão para o ensaio de Bradford. 
 Lisado 
(µl) 
Água 
(µl) 
Reagente de 
Bradford (µl) 
10x 
Abs550 nm 
20x 
Abs550 nm 
50x 
Abs550 nm 
100x 
Abs550 nm 
Flores 20 80 900 0.591 0.535 0.479 0.314 
Caule 20 80 900 0.554 0.522 0.353 0.245 
Folhas 20 80 900 0.559 0.439 0.263 0.161 
Raíz 20 80 900 0.518 0.372 0.23 0.175 
Branco 0 100 900 0.166 
 
4) Determine a concentração de proteínas no lisado de cada órgão (1.5 pontos). 
Em seguida, o Dr. Palmer fez os seguintes ensaios enzimáticos (o tampão contém 20 mM 
toxina) para tentar estabelecer qual órgão deve ser utilizado para isolar: 
Tabela 3 – Ensaio enzimático para a degradação de toxina. 
 Lisado 
(µl) 
Tampão 
(µl) 
5 min 
toxina 
(nmoles) 
10 min 
toxina 
(nmoles) 
15 min 
toxina 
(nmoles) 
20 min 
toxina 
(nmoles) 
Flores 50 150 2800 2720 2600 2530 
Caule 50 150 2750 2500 2110 1650 
Folhas 50 150 2850 2530 2380 2100 
Raíz 50 150 2650 2200 1850 1400 
 
5) Calcule as atividades enzimáticas em cada lisado. Defina 1 U como a quantidade de 
enzima necessária para degradar 1 µmoles de toxina em 1 min (1.0 pontos). 
6) Utilizando os dados abaixo, e os dados já calculados, decida qual dos órgãos resulta na 
maior quantidade de enzima por grama de tecido com uma atividade específica acima de 
100 mU/mg (2.5 pontos). 
 
7) Tabela 4 – Dados da curva-padrão para o ensaio de Bradford. 
 Massa de 
tecido (g) 
Volume 
do lisado 
(ml) 
Flores 5 2 
Caule 10 5 
Folhas 20 3 
Raíz 15 4 
 
3 
 
 
Por fim, o Dr. Palmer pegou amostras de enzimas purificadas obtidas em cada amostra, e 
resolveu fazer uma eletroforese em gel de poliacrilamida na presença e na ausência de SDS. 
Ambos géis foram feitos em condições não redutoras. 
 
8) Qual a função do SDS no SDS-PAGE? (1,0 ponto) 
 
9) O que podemos concluir sobre o resultado obtido no SDS-PAGE? (1,0 ponto) 
 
10) Considerando-se que utilizou-se no gel de poliacrilamida sem SDS o mesmo tampão 
utilizado nos ensaios enzimáticos (sem a toxina), se colocarmos a toxina no gel, o que 
esperaríamos observar? Considere que a toxina deixe o gel bastante esverdeado. (1,0 
ponto) 
Por fim, o Dr. Palmer conseguiu produzir um grande lote d antídoto para a toxina da Dra. Isley, 
que foi imediatamente comprado por um contato seu, que trabalha nas indústrias Wayne.