Controle de Qualidade de Fitoterápicos I

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Controle de Qualidade 
de Fitoterápicos: Sistema de 
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência 
Profa. Dra. Luzia Kalyne A. M. Leal 
 
 Fitoterápicos: Controle de Qualidade 
•Materiais 
 estranhos 
•Cinzas 
•Microbiologia 
• Macro e 
 Microcospia 
 da planta 
• Perfil 
 fitoquímico 
• Identificar e Quantificar 
 Marcadore(s) 
Autenticidade 
 
Pureza 
e Integ. 
Análise 
marcador 
Laudo 
técnico 
Análise Interdisciplinar 
Controle de Qualidade (CQ) de 
plantas e produtos derivados: 
Como fazer? 
• Monografias Farmacopéicas 
 
• Publicações oficiais 
 
• Desenvolver e validar método 
Portaria nº 116/SVS, 1996; RE 899, 2003 
Controle de Qualidade Físico-
químico: métodos analíticos 
• Gravimetria 
• Espectrofotometria 
• Cromatografia - Cromatografia Líquida Alta 
eficiência (CLAE). Tipos de Cromatografia: 
 - Adsorção 
 - Partição 
 - Troca Iônica 
 Ânions (-SO3-) ou cátions (-N(CH3) 3+ 
 - Exclusão molecular 
 
• Outros 
 
Cromatografia de Adsorção 
FASE MÓVEL 
FASE ESTACIONÁRIA 
O soluto é ADSORVIDO na superfície da partícula sólida 
FASE ESTACIONÁRIA 
Cromatografia de Adsorção 
em Coluna 
Sistema CLAE 
Fase móvel 
Bomba 
Injetor 
Coluna 
Detector 
Sistema CLAE 
Sistema CLAE 
CLAE ou 
 High Performance Liquid Chromatographic (HPLC) 
Fase móvel 
Bomba 
Injetor 
Coluna 
Detector 
Sistema CLAE 
CLAE: FASE MÓVEL 
• Fase Móvel 
 - Exemplo: MeOH, ACN, tampão etc 
 
• O que é a Eluição? 
 
• Eluição 
 - Isocrático 
 - Gradiente 
• Fase Móvel 
CLAE: condições 
- Solventes grau CLAE 
- Água ultrapura (sistema de purificação) 
- Membranas para filtração 
Fase móvel 
Bomba 
Injetor 
Coluna 
Detector 
Sistema CLAE 
CLAE: injetor 
• Injeção da amostra no sistema 
 Volume de injeção (1-500 μL) 
 
Fase móvel 
Bomba 
Injetor 
Coluna 
Detector 
Sistema CLAE 
CLAE: fase estacionária 
• Partículas microporosas de sílica (µm) 
 - Permeáveis ao solvente 
 - Área superficial: centenas de m2/g 
 
• Sílica: grupos silanol (Si-OH) 
Partícula 
de sílica 
Si- OH 
SíÍica 
Fase Normal 
CLAE: fase estacionária 
Partícula 
de sílica Si- O – Si - R 
CH3 
CH3 
Fase estacionária ligada 
R=(CH2)17CH3 Octadecil 
R=(CH2)7CH3 Octil 
Exemplos de Fases Reversas: 
SíÍica 
Fase Reversa 
• Fase estacionária 
CLAE: condições 
Critério para a Seleção da Coluna 
 - Colunas (tamanho, enchimento, etc) 
Fase móvel 
Bomba 
Injetor 
Coluna 
Detector 
Sistema CLAE 
CLAE: exemplo de 
detectores 
• Espectrofotométrico 
• Fluorescência 
• outros 
 
Espectrofotometria 
 Método analítico que utiliza a luz para 
medir a concentração de espécies 
químicas 
Propriedades da Luz 
 
λ = Comprimento de onda é a distância entre dois máxi-
mos vizinhos. 
λ 
y 
x 
Campo elétrico 
Campo magnético z 
Espectrofotometria 
Faixa de comprimento de onda de 
energia eletromagnética de interesse: 
ultravioleta 200 – 380 nm 
visível 380 – 780 nm 
infravermelho 3 – 15 μm 
Região Faixa 
Espectrofotometria 
FONTE 
DE LUZ 
SELETOR DE 
COMPRIMENTO 
DE ONDA 
AMOSTRA 
DETECTOR 
Io 
I 
Transmitância (T): é 
a fração da luz que 
passa pela amostra 
Absorvância ? 
Análise espectrofotométrica 
quantitativa 
Absorvância (A): quantidade de Luz 
absorvida. 
A: kbc 
c= concentração da amostra 
b= distância percorrida pela luz 
 na solução (espessura) 
k= constante de proporcionali- 
 dade, característica do analito 
• Lei de Beer-Lambert*: “A” é diretamente 
proporcional à concentração da amostra 
 
Farm. Bras. IV Ed., Parte I, 1988 
* Atenção: essa lei pode por vezes ser desobedecida 
A análises Espectrofotométrica 
quantitativa tem como princípio 
a relação proporcional existente 
entre a quantidade de luz 
absorvida e a concentração do 
analito em solução 
Fase móvel 
Bomba 
Injetor 
Coluna 
Detector 
Sistema CLAE 
CLAE: processo de eluição e detecção 
O sinal gerado pelo 
detector é utilizado 
para construir o 
cromatograma 
Tempo (min) 
Tempo de retenção 
Área do pico 
Curva de Calibração 
DADOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS UTILIZADOS 
PARA A CONSTRUÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO 
 Proteína (μg) Absorvância (nm) 
 5,0 0,185 0,187 0,188 
 10,0 0,282 0,272 0,272 
 15,0 0,345 0,347 0,392 
 20,0 0,425 0,425 0,430 
 25,0 0,483 0,488 0,496 
 ...... 
Considerações finais 
BIBLIOGRAFIA 
Farmacopéia Brasileira. IV Ed. Parte I. São Paulo: 
Atheneu Editora LTDA, 1988. 
 
GIL, E.S. Controle físico-químico de qualidade de 
medicamentos. II Ed. São Paulo: Pharmabooks, 2007 
 
HARRIS, D.C. Análise química quantitativa. VI Ed. 
Rio de Janeiro: Livros técnicos e científicos Editora S.A. 
2005