AULA DE ANAÉROBIOS

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ANAÉROBIOS 
Professora : Eulália Azevedo Ximenes
 Definição
Anaeróbios estritos
	Grupo de bactérias que produz infecções em humanos e animais e não tem capacidade de multiplicar-se em presença de oxigênio atmosférico.
 Fisiologia dos anaérobios 
 Oxigênio seria um elemento tóxico para a bactéria anaeróbia;
 Isso ocorre possivelmente por reações mediadas por flavoproteínas que resultam na produção de radical superóxido (O2- ),peróxido de hidrogênio (H2O2) e outros produtos tóxicos oriundos da redução do oxigênio;
 O ânion superóxido (O2- ) e o (H2O2) podem produzir radicais hidroxilas livres (OH) que são poderosos agentes oxidantes.
Pele, trato gastrointestinal, boca, laringe e trato genitourinário.
 Habitat normal
1000:1
 Localizações comuns de infecções por anaeróbios
 Endógena
 Infecção causada pela própria microbiota do paciente;
 Resulta da utilização de agentes imunossupressores e de doenças que levam ao comprometimento do sistema imunológico do hospedeiro;
 Exógena
 Infecção causada por micro-organismos presentes no meio ambiente, alimentos , solo 
 
 São as mais comuns e mais bem conhecidas;
Principais infecções endógenas:
 abscessos;
 diarreia e colite (antibioticoterapia);
 endocardite;
 infecções dentárias;
 sinusite.
Principais infecções exógenas:
 diarreia- 
 botulismo causado por alimento;
 gastroenterite por C. perfringens;
 mionecrose (gangrena gasosa);
 tétano.
 Mista
 Está associada a bactérias anaeróbias e anaeróbias facultativas= Gangrena de Meleney ( bacilos anaeróbios facultativos + bacteroides causam uma necrose gangrenosa cutânea 
INFECÇÃO POR ANAEROBIOS 
 Aspectos clínicos característicos da infecção
 Secreção fétida;
 Tecido necrótico;
 Presença de gás em tecidos ou secreções;
 Coloração negra em secreção com sangue;
 Infecção decorrente de mordida humana ou de animal;
 Gangrena gasosa
 Fatores predisponentes
 Diminuição do fluxo sanguíneo por isquemias ou doenças crônico degenerativas;
 Presença de áreas necróticas pela presença de obstruções em vísceras por doença maligna ou corpo estranho. 
 Acúmulo de sais endógenos (por exemplo, pontos de calcificação);
 Infecção por bactérias aeróbias ou anaeróbias facultativas;
 Manipulações cirúrgicas e contaminações pela microbiota ;
 Esterilização intestinal pré-operatória;
 Principais bactérias de interesse médico
 Bacilos Gram positivos esporulados
 Bacilos Gram negativos
Clostridium 
Bacteroides; Prevotella 
 Bacilos Gram positivos não esporulados
Propionobacterium; Actinomyces 
 Cocos Gram negativos
 gênero Veillonella 
Fusobacterium e Porphyromonas 
Lactobacillus e Bifidobacterium 
 Cocos Gram positivos 
 gênero Pepstreptococcus, Peptococcus 
 Prevalência das espécies anaeróbicas nas infecções em humanos
Grupo Bacteroides fragilis 
Grupo Bacterioides melaninogenicus
Fusobacterium spp.
Peptostreptococcus spp.
Clostridium spp.
Proprionibacterium acnes 
* Amostras adequadas à cultura de anaeróbios 
Sangue
Medula óssea 
Pus coletado por aspiração 
Fluidos corporais estéreis 
Aspirados de pulmões
Urina obtida por aspiração suprapúbica 
 Aspectos laboratoriais 
 Ocorrência de formas pleomórficas na coloração de Gram;
 Observação no material, de bacilos Gram positivos esporulados (sugestivo de Clostridium);
 Presença de bactérias na coloração de Gram mas que não crescem nos meios mantidos em atmosferas de aerobiose;
 Crescimento de bactérias somente na parte inferior de tubos com meios de cultura líquido ou semi-sólido.
 Coleta do material
 As amostras devem ser colhidas de forma que não entrem em contato com oxigênio e não se contaminem com bactérias anaeróbias da microbiota normal;
 Por este motivo devem ser aspiradas com seringa, da qual é eliminado o ar imediatamente após a obtenção da amostra;
 O material não pode ser colhido com swab;
Swabs só os revestidos com hemoglobina e glicerol para facilitar a sobrevida dos microrganismos 
 Transporte do material
 O transporte pode ser feito com a mesma seringa com que foi colhido o material;
 Encaminhado imediatamente ao laboratório;
 Podem ser utilizados tubos contendo tioglicolato de sódio e os meios semi-sólidos de Cary –Blair , Stuart, Amies
EXAME DIRETO
	Coloração de Gram 
Clostridium perfringens 
	Gram positivo, forma de tijolo, esporulado, esfregaço com pouco polimorfonucleares 
Bacteroides e Fusobacterium 
	Gram negativo, coloração bipolar nos bacteroides e morfologia pleomorfica no caso de fusobacterias. 
Actinomyces: 
	Coloração de Ziehl-Neelsen, bacilos ramificados e filamentosos 
Exame direto 
	Imunoflorescência 
Anticorpos marcados para Prevotella melaninogenicus e Bacterioides fragilis
	Esta técnica é equivalente a cultura 
Exame direto 
	cromatografia gasosa 
Detecção de produtos do metabolismo das bactérias geralmente produtos voláteis 
 Meio de cultura para isolamento
 Ágar sangue enriquecido para anaeróbios:
 Sangue de carneiro ou de coelho (5%);
 L-cistina;
 Hemina (fator V);
 Vitamina K;
 Extrato de levedura;
 Aminoglicosídeo (amicacina)
Fatores de crescimentos adicionais
Redutor de oxigênio
Devido a resistência dos anaeróbios
 Ágar sangue para anaeróbios:
 Semeio de 2 placas 
Incubação por 48 horas 
Incubação por 24 horas 
Anaerobiose 
Aerobiose 
 Meio de cultura para isolamento
 Caldo carne-picada glicose- Meio de ROBERTSON 
 Carne bovina moída
 Glicose
 L-cistina
Redutor de oxigênio
Fonte de carbono
Fonte de aminoácidos e proteínas
ENRIQUECIMENTO 
 Meio de cultura para crescimento/ isolamento
 Tioglicolato enriquecido:
 Extrato de carne
 Hidrolisado de fígado
 Caseína
 Glicose
 Hemina (fator V)
 Vitamina K
 Tioglicolato de sódio
 L-cisteína
Fontes de carbono e nitrogênio
Redutores de oxigênio
Indicadores de O2
 Resazurina sódica;
 Azul de metileno
Fatores de crescimentos adicionais
Os meios de isolamento poderão ser meios comumente utilizados com suplementação dos fatores de crescimento, antibióticos e agentes redutores. 
	Agar Columbia 
	Agar Brucela
	BHI 
Enriquecimento 
Tween 80 – estimulante do crescimento de cocos anaeróbios 
Hemina, Vitamina K etc. 
Neomicina 75 µg/mL para isolamento de bacteroides
Vancomicina 75 µg/mL para isolamento de fusobacterias 
Neomicina 75 µg/mL para o isolamento de clostrídios e cocos anaeróbios 
Acido nalídixico 10 µg/mL com Tween 80 pra o isolamento de Peptoestreptococcus 
Meios 
 Produção de anaerobiose
 Câmaras anaeróbias (glove box)- Nitrogênio, gás carbônico, hidrogênio 
 Sistema das jarras de anaerobiose com geradores químicos. – Çatalisador paládio 
2H2
O2
+
2H2O
CATALISADOR
Identificação de anaeróbios 
Crescimento em ágar sangue com demandas variadas de oxigênio= Estudar o comportamento da cultura 
A placa destinada a cultura em anaerobiose deverá conter um disco de metronidazol 
Morfologia das colônias 
Prevotella melaninogenicus = em meio a base de sangue forma colônias escuras 
C. perfringens = formam em ágar sangue um duplo halo de hemólise ( hemolisina alfa e theta )
Prevotella melaninogenicus e C. dificille =sob luz UV aparece com coloração vermelho tijolo
Fusobacterium necrophorum = em meio a base de cisteína e sob UV aparece com colônias vedes ;
C. dificille = em meio a base de cisteína e sob UV aparece com colônias florescentes amarelas . 
 Coloração de Gram 
Localização e forma dos esporos – Clostrídios – terminal , subterminal ; oval, profuso
Tolerância a corantes :
Bacteroides spp= sensíveis a violeta de genciana ( 1:100.000) em meio a base de extrato de levedura enriquecido. 
Fusobactérias + resistentes 
Tolerância à bile 
Resistentes + Grupo Bacteroides fragilis – resistentes à penicilina 
Presença de lipases, lecitinase, hialuronidase etc. + Clostrídios, fusobactérias, bacteroides 
Toxina e antitoxina = Teste de Nagler
identificação de Clostridium perfringens 
Actinomyces
Clostridium
Bacteroides
Fusobacterium 
Clostridium 
Triptose sulfito cicloserina 
Peptostreptococcus