contagem_celulas

Prévia do material em texto

BMM 5777 – Culturas celulares e suas aplicações 
 em Microbiologia 
 
 
 
P3a - Contagem de células em câmara de Neubauer 
 
1. Colocar a lamínula sobre a área de marcada na câmara de contagem. Usar lamínulas 
especiais que fornecem a profundidade correta da câmara de contagem. Não usar 
lamínulas comuns. 
 
2. Homogeneizar bem a suspensão celular e transferir com esterilidade 0,1 ml para um 
pequeno tubo de ensaio. 
 
3. Adicionar 0,3 ml de corante azul de tripano 0,2% ao tubo, obtendo assim uma diluição 
1/4. 
 
4. Misturar os conteúdos e retirar uma alíquota de 0,5 ml com a pipeta. 
 
5. Encostando a ponta da pipeta na borda da lamínula, preencher cuidadosamente a 
câmara de contagem. O líquido deve preencher apenas um lado da câmara e não 
deve chegar aos canais de cada lado da área de contagem (Fig. 1). 
 
6. Deixar as células sedimentarem por 2 min. 
 
7. Focalizar a área demarcada da câmara de contagem com a objetiva de menor 
aumento (Fig.2). Nas áreas 1, 2, 3 e 4, o volume com a lamínula colocada 
corresponde a 0,1 mm3. 
 
8. Contar as células nas 4 áreas de um lado da câmara de contagem, seguindo o 
esquema da Fig. 2 e dividir o valor por 4 para obter a média. 
 
9. Como a suspensão foi inicialmente diluída a 1/4, o número de células contadas será 
igual à média multiplicada pelo fator de diluição, no caso 4. 
 
10. Para obter o número de células/ml, multiplicar corrigir o valor obtido por 10.000, pois: 
1 ml = 1 cc 
1 cc = 10 x 10 x 10 mm = 1.000 mm3
.Na câmara de Neubauer obtemos o número de celular por 0,1 mm3, então 
devemos multiplicar por 10, portanto 10 x 1.000 = 10.000 
11. Assim temos: 
 no total de células 
 no de células/ml = x fator de diluição x 10.000 
 no de quadrantes contados 
 
 Critérios para a contagem (Fig. 3): 
• enumerar células com núcleo bem visível; 
• contar células isoladas como 1 célula (a); 
• contar grumos constituídos por células facilmente distinguíveis por seus núcleos e 
citoplasmas como grupos de células isoladas e contar cada célula (b); 
• grumos, cujas células são difíceis de serem distinguidas umas das outras, devem ser 
contados como um único grupo (c). 
 
 
 
 
 
 Fig. 1 Fig. 2 
1 2 
3 4 
 
 
 
 Sentido da contagem Grumos de células 
 
 Fig. 3 Fig. 4 
 
 
Cálculo do no de células desejadas 
 
 
no de células/ml da suspensão original 
 x volume original = volume final 
concentração de células desejada/ml 
 
	 
	 
	 
	 
	 
	P3a - Contagem de células em câmara de Neubauer