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CONGELAMENTO DE SÊMEN BOVINO

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CONGELAMENTO DE SÊMEN BOVINO
Cálculo de doses:
Volume = 7ml
Motilidde = 70%
[ ] = 800.000 sptz/mm3
Dose inseminante bovinos: 10milhões sptz viáveis pós congelação
Já que 1cm3=1ml; 800.000 mm3 x 1000 = 800.000.000 sptz/ml.
Volume: 800 x 106 x 7 = 5600 x 106 sptz ejaculado.
Motilidade: 5600 x 106 x 0,7 = 3920 x 106
Perda de metade dos sptz no congelamento: 392 x 107 x 0,5 = 196 x 107sptz viáveis após congelação. 
Dividir por dose inseminante: 196 x 107 / 107 = 196 doses
*se fosse sêmen fresco seria 196 x 2 = 392 doses
Para o congelamento preciso de 2 diluidores:
A: citrato gema de ovo.
B: glicerol (crioprotetor – desidrata o sptz).
* A+B são tóxicos à temperatura ambiente.
1 Etapa: Diluição
Com o ejaculado no tubo em banho-maria, (37°C) adicionar o meio A tb na msm temperatura do banho-maria, na proporção mínima de 2:1; voltar o tubo para o banho-maria por 15-20min. 
Após esse tempo colocar o tubo na geladeira à 5°C dentro do béquer com água na temperatura do banho maria, isso evita o choque térmico nos sptz, tb colocar o diluidor B separado na geladeira nesse momento. Deixar por 1hr ou 1,5hr. 
Promover a mistura do diluidor B dentro da geladeira, de forma que seja igual ao volume contido no tubo (volume do ejaculado 7ml + diluidor 14ml = 21ml ), ou seja 21ml de diluidor B.
Adicionar lentamente, geralmente em 3 etapas, (1/3 = 7ml, 1/3 = 7ml e 1/3 = 7ml); para evitar a morte por choque osmótico dos sptz. Sempre adicionando de B para A.
2 etapa: Glicerolização
Período de glicerolização: ação promovendo a desidratação dos sptz, duração de 4hrs na geladeira (5°C);
3 Etapa: Congelamento com N
Preparar as palhetas, identifica-las com o nome do touro, raça, RGD e a data da congelação ou comprar identificadas e colocar na geladeira.
Após o período de glicerolização, ou um pouco antes, pode começar o processo de envase do sêmen na palheta, dentro da geladeira (5°C), o sêmen tem que encostar no algodão na parte superior da palheta.
Puxar a sêmen para dentro da paleta (0,5ml ou 0,25ml), sempre deixar um pouco de ar na paleta, para evitar a explosão da paleta ao ser congelada, e promover a vedação com álcool polivinílico do outro lado. Nas centrais é vendado com laser.
Colocar as palhetas no vapor de N, com distância de 5cm do N, dentro do isopor, elas estarão em uma T de -120°C, por 15 a 20 min. Elas estarão congeladas, pois ficam opacas.
Após esse tempo, derrubar as paletas no N, e elas estarão congeladas.
*Sempre após o processo descongelar de 1 a 2 paletas e conferir se o processo foi bem feito.
Cálculo dos volumes dos diluidores:
VFA = VFB
1 dose --------- 0,5 ml
196 doses ---- x
x = 98ml
FA + FB = 98ml
FA = FB = 49ml
FA = Vejac + Dil
49 = 7ml + Dil
Dil B = 42ml
FB = 49
FB = 12% FA + Dil A
49 = 6ml + Dil A
Dil A = 43ml

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