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CONGELAMENTO DE SÊMEN BOVINO Cálculo de doses: Volume = 7ml Motilidde = 70% [ ] = 800.000 sptz/mm3 Dose inseminante bovinos: 10milhões sptz viáveis pós congelação Já que 1cm3=1ml; 800.000 mm3 x 1000 = 800.000.000 sptz/ml. Volume: 800 x 106 x 7 = 5600 x 106 sptz ejaculado. Motilidade: 5600 x 106 x 0,7 = 3920 x 106 Perda de metade dos sptz no congelamento: 392 x 107 x 0,5 = 196 x 107sptz viáveis após congelação. Dividir por dose inseminante: 196 x 107 / 107 = 196 doses *se fosse sêmen fresco seria 196 x 2 = 392 doses Para o congelamento preciso de 2 diluidores: A: citrato gema de ovo. B: glicerol (crioprotetor – desidrata o sptz). * A+B são tóxicos à temperatura ambiente. 1 Etapa: Diluição Com o ejaculado no tubo em banho-maria, (37°C) adicionar o meio A tb na msm temperatura do banho-maria, na proporção mínima de 2:1; voltar o tubo para o banho-maria por 15-20min. Após esse tempo colocar o tubo na geladeira à 5°C dentro do béquer com água na temperatura do banho maria, isso evita o choque térmico nos sptz, tb colocar o diluidor B separado na geladeira nesse momento. Deixar por 1hr ou 1,5hr. Promover a mistura do diluidor B dentro da geladeira, de forma que seja igual ao volume contido no tubo (volume do ejaculado 7ml + diluidor 14ml = 21ml ), ou seja 21ml de diluidor B. Adicionar lentamente, geralmente em 3 etapas, (1/3 = 7ml, 1/3 = 7ml e 1/3 = 7ml); para evitar a morte por choque osmótico dos sptz. Sempre adicionando de B para A. 2 etapa: Glicerolização Período de glicerolização: ação promovendo a desidratação dos sptz, duração de 4hrs na geladeira (5°C); 3 Etapa: Congelamento com N Preparar as palhetas, identifica-las com o nome do touro, raça, RGD e a data da congelação ou comprar identificadas e colocar na geladeira. Após o período de glicerolização, ou um pouco antes, pode começar o processo de envase do sêmen na palheta, dentro da geladeira (5°C), o sêmen tem que encostar no algodão na parte superior da palheta. Puxar a sêmen para dentro da paleta (0,5ml ou 0,25ml), sempre deixar um pouco de ar na paleta, para evitar a explosão da paleta ao ser congelada, e promover a vedação com álcool polivinílico do outro lado. Nas centrais é vendado com laser. Colocar as palhetas no vapor de N, com distância de 5cm do N, dentro do isopor, elas estarão em uma T de -120°C, por 15 a 20 min. Elas estarão congeladas, pois ficam opacas. Após esse tempo, derrubar as paletas no N, e elas estarão congeladas. *Sempre após o processo descongelar de 1 a 2 paletas e conferir se o processo foi bem feito. Cálculo dos volumes dos diluidores: VFA = VFB 1 dose --------- 0,5 ml 196 doses ---- x x = 98ml FA + FB = 98ml FA = FB = 49ml FA = Vejac + Dil 49 = 7ml + Dil Dil B = 42ml FB = 49 FB = 12% FA + Dil A 49 = 6ml + Dil A Dil A = 43ml
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