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Biofísica de Membranas Daniel de Castro Medeiros dacamemg@yahoo.com.br • Estrutura e Composição de Membranas Biológicas • Mecanismos de transporte • Equilíbrio eletroquímico • Potencial de repouso • Potencial de ação • Auto excitabilidade • Potenciais sinápticos e geradores Robert Hooke (1635 - 1703) Triacilglicerol Ácido Graxo Fosfolípede Micelas Lipossomos Glicoproteínas: estrutural, lubrificante e agente protetor, transportador, etc. Modulam propriedades como solubilidade, viscosidade, conformação, desnaturação e locais de ligação. Afetam a inserção nas membranas (adesão), a migração intracelular e a secreção. Proteínas periféricas: compreendem aquelas que não chegam a interagir fortemente com os hidrocarbonetos, prendendo-se apenas à parte polar. Qualquer alteração simples do meio, como mudança de Ph, pode desprendê-las. Proteínas integrais: são aquelas inseridas de tal modo na membrana que interagem não só com a parte polar, mas também com a apolar. Elas servem de conexão entre o meio intra e extra celular. Mas para formar o canal, as proteínas tem que atravessar a membrana várias vezes e ficar presas umas à outras (geralmente 20 aminoácidos são suficientes para atravessar a bicamada). Glicolipídio: a parte de carboidrato faz protrusão para a superfície externa agindo como receptores ou antígenos. Colesterol: substância lipossolúvel (esteroide) que tem ação de diminuir a fluidez da membrana plasmática. Algumas proteínas não se movimentam livremente pela membrana, permanecendo presas em regiões específicas. Endocitose: processo que permite algum material penetrar na célula sem passar através da membrana plasmática. A capacitação de partículas é denominada fagocitose. Endocitose: processo que permite algum material penetrar na célula sem passar através da membrana plasmática. A capacitação de partículas é denominada fagocitose. Endocitose mediada por receptores: presença de depressões na membrana celular revestidas externamente por clatrina (proteína). Ex: colesterol. Exocitose: reverso da endocitose. Difusão: movimento térmico aleatório de átomos e moléculas denominado movimento browniano. • Coeficiente de Difusão (velocidade): proporcional a velocidade na qual a molécula se move no meio circundante dado pela fórmula (Stokes-Eistein): D = kT/6πrƞ K = Constante de Boltzmann T = Temperatura absoluta r = Raio da molécula Ƞ = Viscosidade do meio Entropia Difusão: movimento térmico aleatório de átomos e moléculas denominado movimento browniano. • Coeficiente de Difusão (velocidade): proporcional a velocidade na qual a molécula se move no meio circundante dado pela fórmula (Stokes-Eistein): Magnitude de Difusão Através da Membrana Lei de Fick J = -DA(ΔC/ΔX) J = magnitude do fluxo D = coeficiente de difusão A = área da membrana C = diferença de concentração X = espessura da membrana J = -DA(ΔC/ΔX) J = magnitude do fluxo D = coeficiente de difusão A = área da membrana C = diferença de concentração X = espessura da membrana Substâncias lipossolúveis atravessam a membrana livremente, seguindo apenas leis da difusão simples: • Gases • Etanol • Lipídios Difusão Simples Coeficiente de partição água-óleo B = Coeficiente de partição [X]L = Concentração na parte lipídica [X]Aq = Concentração na parte aquosa Lei de Fick e Coeficiente de Partição Permeabilidade J = -DBA(ΔC/ΔX) J = magnitude do fluxo D = coeficiente de difusão B = coeficiente de partição A = área da membrana C = diferença de concentração X = espessura da membrana Seletividade dos Canais Transportadores mediados por proteína • Depende de mudança conformacional • Substância transportada rapidamente • Especificidade química • Substâncias análogas competem pelo sítio • Pode haver inibição do transporte • O transporte apresenta saturação Transportadores mediados por proteína • Depende de mudança conformacional • Substância transportada rapidamente • Especificidade química • Substâncias análogas competem pelo sítio • Pode haver inibição do transporte • O transporte apresenta saturação Transportadores Facilitados • Difusão facilitada • Segue o gradiente de concentração • Não há gasto de energia • Transportadores de carboidratos • Insulina – Neurônio – Músculo Simples X Facilitada Transportadores Ativos • Contra gradiente de concentração • Gasto energético • Sítios de ligação de maior (E1) e menor afinidade (E2) • Inibidos por substâncias que interfiram na produção de ATP (cianeto) Transportadores Ativos • Cálcio ATPase (Exemplo) • Hidrogênio-Potássio ATPase • Sódio-Potássio ATPase • Transporte ativo SECUNDÁRIO Transportadores Ativos • Cálcio ATPase • Hidrogênio-Potássio ATPase • Sódio-Potássio ATPase • Transporte ativo SECUNDÁRIO Transporte Ativo + Seletividade Transporte ativo primário Transporte ativo primário Potencial químico (J/mol) R · T · ln (Ce/Ci) R = constante de gas (8,31 J mol-1 K-1) T = temperatura absoluto (K) C = concentração [A] C0 = concentração [B] Potencial elétrico (J/mol) z · F · (V-V0) z = valencia da especie química F = constante de Faraday (96.485 C mol-1) V = potencial elétrico (V) V0 = potencial padrão (geralmente 0 V) Potencial Eletroquímico Potencial químico (J/mol) R · T · ln (Ce/Ci) R = 8 T = 310 Ce = 1 Ci = 10 2,3(8 x 310 x log 0,1) = 5704 J/mol Potencial elétrico (J/mol) z · F · (V-V0) V = 0 V0 = 0 z = 1 F = 96.000 1x96000x0 = 0 J/mol Potencial químico (J/mol) R · T · ln (Ce/Ci) Potencial elétrico (J/mol) z · F · (V-V0) = 2.3 R T log(Ce/Ci) = z F ΔV ΔV= 2,3 R T log(Ce/Ci) / z F ΔV= 2,3 R T log(Ce/Ci) / z F ΔV= 2,3 R T / F . log(Ce/Ci) / z ΔV= 2,3 x 8,3 x 310 / 96000 x log(Ce/Ci) / z ΔV= 0,061V x log(Ce/Ci) / z Bioeletrogênese - Potenciais de difusão Potencial de equilíbrio de um íon X Ex = (61 mV / z) • log ( [X]E /[X]I ) (Consideramos que T = 37oC = 310 K) Ion X [X] (mM) EX (mV) LEC LIC Na+ 150 15 ? K+ 5 150 ? Cl- 150 15 ? Ca2+ 1 0.0001 ? Potencial de Membrana Equação de Nernst - K Eion = 61 log [ion]e/[ion]in Ek = 61 log 1/30 = 61. (-1,47) = -90mV Potencial de Membrana Equação de Nernst - Na Eion = 61 log [140]e/[14]in ENa = 61 log ? = 61. ? = ? Bioeletrogênese - Potenciais de difusão Potencial de equilíbrio de um íon X Ex = R T / z F ln ( [X]E / [X]I ) [Eq. de Nernst] Ion X [X] (mM) EX (mV) LEC LIC Na+ 150 15 +61 K+ 5 150 -90 Cl- 150 15 -61 Ca2+ 1 0.0001 +122 (Consideramos que T = 37oC = 310 K) Potencial de Membrana Formação do Gradiente + Seletividade de Canais Passivos Potencial de Membrana Apesar da grande força empurrando o Sódio, sua condutância é baixa. Logo o potencial de membrana se aproxima mais do Ek Potencial de Membrana Lei de Ohm V=RI > I=V/R R=1/g Em = (gk/∑g) Ek + (gNa/∑g) ENa + (gCl/∑g) ECl Média ponderada dos potenciais de equilíbrio de todos os íons para os quais a membrana é permeável Potencial de Membrana Em = (0.80) -90+ (0.15) 61 + (0.05) +(-60) Em = -72 + 9 - 3 Em = -60mv Média ponderada dos potenciais de equilíbrio de todos os íons para os quais a membrana é permeável Em = (gk/∑g) Ek + (gNa/∑g) ENa + (gCl/∑g)+Ecl Em = (gk/∑g) Ek + (gNa/∑g) ENa + (gCl/∑g)Ecl • Anestésico • Analgésico • Cloreto de Potássio Em = (gk/∑g) Ek + (gNa/∑g) ENa + (gCl/∑g)Ecl • Anestésico • Analgésico • Cloreto de Potássio
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