Aula 17 -Purificação

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Purificação 
Prof. Dr. Marcelo Fossa da Paz 
Etapas genéricas da Purificação 
(Down Stream) 
UP Stream Produtos Intracelulares 
Produtos extraídos 
Extração 
Inativação celular 
Restos de células 
(Debris celulares) 
Purificação 
Separação 
Inativação celular 
Com a função de inviabilizar células patogênicas ou geneticamente modificadas, 
conferindo segurança ao operador e ao meio ambiente. 
 
Realizada por: 
 
1. Calor (temperaturas em torno de 50-60°C); 
 
2. Sonicação (usado para separar moléculas associadas à célula ao mesmo 
tempo que as inativa); 
 
3. Química (com ou sem precipitação). 
 
Separação celular 
• Realizada sempre por centrifugação apesar de poder der realizada por 
precipitação ou por filtração. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Centrífugas; 
2. Filtros 
2.1 Simples (fluxo único); 
2.2 Tangenciais (fluxo duplo). 
 
Rompimento celular 
• Realizado para a extração de material intracelular. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Betoneira com pérolas de vidro ou areia 
2. Cutter 
3. Mixer (Tipo slicer) 
4. Homogeneizador (Gaulin); 
 
Rompimento celular 
• Realizado para a extração de material intracelular. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Betoneira com pérolas de vidro ou areia 
2. Cutter 
3. Mixer (Tipo slicer) 
4. Homogeneizador (Gaulin); 
 
Rompimento celular 
• Realizado para a extração de material intracelular. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Betoneira com pérolas de vidro ou areia 
2. Cutter 
3. Mixer (Tipo slicer) 
4. Homogeneizador (Gaulin); 
 
Rompimento celular 
• Realizado para a extração de material intracelular. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Betoneira com pérolas de vidro ou areia 
2. Cutter 
3. Mixer (Tipo slicer) 
4. Homogeneizador (Gaulin); 
 
Separação 
• Realizado para retirar os debris (restos/escombros) celulares do sobrenadante. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Centrífuga; 
2. Microfiltros 
 
Purificação 
• Realizado para separar as moléculas de interesse. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Ultra-centrífugas (Clarificação, Centrifugação em gradiente, “saltig in”/”salting out”, 
precipitação isoelétrica). 
2. Ultrafiltros tangenciais; 
3. Colunas de cromatografia. 
 
Purificação 
• Realizado para separar as moléculas de interesse. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Ultra-centrífugas; 
2. Ultrafiltros tangenciais (diafiltração); 
3. Colunas de cromatografia. 
 
Purificação 
• Realizado para separar as moléculas de interesse. 
 
 
• Equipamentos envolvidos: 
1. Ultra-centrífugas; 
2. Ultrafiltros tangenciais; 
3. Colunas de cromatografia (gel filtração, troca iônica, etc).