Histocompatibilidade - Aula 9

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Histocompatibilidade, SSP, SSOP 
Profa. Dra. Mariana Melo 
Faculdade Maurício de Nassau 
Testes de histocompatibilidade 
• Tipagem de antígenos 
– (relação entre antígenos e anticorpos) 
 
• Geralmente, usa-se a tipagem de HLA (antígenos 
leucocitário humanos): 
– Alvos primários da resposta imune 
– Indicativos de suscetibilidade a doenças autoimune 
– Grande diversidade na população humana (mais de 
1000 alelos conhecidos) 
 
Genética do HLA 
• Genes de HLA localizados no MHC (complexo 
principal de histocompatibilidade) 
• Braço curto do cromossomo 6 
• Nas regiões do MHC, encontram-se loci para 
HLA em: 
– Região de classe I: HLA-A, HLA-B, HLA-C 
– Região de classe II: HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP 
Métodos de tipagem molecular de HLA 
• Amplificação gênica 
– Amplificação seletiva dos segmentos de DNA onde 
localizam-se os genes HLA 
 
– Utilização de primers específicos para o segmento a 
ser analisado 
 
– Pode ser: 
• Locus-específia 
• Grupo-específica 
• Alelo-específica 
 
 
SSP – Sequence-Specific Priming 
• Amplificação seletiva dos segmentos de genes HLA 
 
• Utilização de primers* desenvolvidos para amplificar 
cada sequência polimórfica a ser detectada 
 
• Controle positivo: primers específicos de outras 
sequências de DNA que não as de HLA 
 
• Separação dos segmentos amplificados por 
eletroforese (geralmente em gel de agarose) para 
verificar: 
– Presença ou ausência dos produtos de amplificação dos 
genes HLA 
– Que alelos de HLA foram amplificados 
 
SSOP – Sequence-Specific 
Oligonucleotide Probe 
• Amplificação seletiva dos segmentos de genes HLA 
 
• Utilização de sondas* (marcadas radioativamente) de 
nucleotídeos com sequências complementares às 
sequências dos alelos dos genes HLA 
 
• Dot blot ou Slot blot: DNA amplificado ligado a um 
suporte sólido e exposto às sondas (em solução) 
 
• Dot(Slot) blot inverso: sondas ligadas a um suporte sólido 
e expostas ao DNA amplificado