TESTES imunoprecipitados

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TESTES IMUNOLÓGICOS
Seus princípios e suas aplicações
Profa. Alessandra Danziger Silvério
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Reações de Ag-Ac aplicadas ao diagnóstico Imunológico
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO
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Curva de Precipitação
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Técnicas manuais de precipitação – meio gelificado
Facilita leitura, volumes necessários para interação
Requerem períodos de horas – dias para migração molecular e formação imunocomplexo
 
Métodos Turbidimetria e Nefelometria são mais sensíveis !
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Imunodifusão
O que é ?
Fatores que interferem na qualidade das técnicas de imunodifusão:
qualidade, grau de pureza e homogeneidade do meio gelificado
Temperatura e umidade do ambiente
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Imunodifusão
Concentração ideal de cada um dos componentes
Especificidade e avidez dos soros imunes
Escolha dos extratos antigênicos
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Imunodifusão
Existem 4 combinações dessa técnica:
SIMPLES
DUPLA
LINEAR OU UNIDIMENSIONAL
RADIAL
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Imunodifusão simples Linear ou 
Método de Oudin
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Imunodifusão Simples Radial ou Método de Mancini
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Imunodifusão Simples Radial ou Método de Mancini
Quando é utilizada ?
O tempo de difusão depende do coeficiente de difusão da molécula antigênica :
Moléculas maiores como IgM, alfa-2-macroglobulina necessitam de até 96 horas para completar a migração
Moléculas pequenas podem completar a difusão em 24 horas
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Imunodifusão Simples Radial ou Método de Mancini
Pode-se utilizar o diâmetro elevado ao quadrado ( D2 ) em substituição ao cálculo da área
Leitura deve ser feita com régua própria para medir diâmetro, similar ao paquímetro, é capaz de determinar décimos de milímetro
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Imunodifusão Dupla Radial ou Método de Ouchterlony
Permite comparação simultânea de vários sistemas antigênicos
x
		Mesmo sistema de Ac de 	especificidade e reatividade 			conhecidos
	Interação Ag x Ac = zona de equivalência, quantidade suficiente para formar TURVAÇÃO
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Imunodifusão Dupla Radial
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Padrões de arcos
 de Precipitação
 obtidos por
 Imunodifusão
Dupla radial
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Reação de identidade
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Reação de não - identidade
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Reação de identidade parcial
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Imunodifusão Dupla Radial ou Método de Ouchterlony
Semi-quantitativo
Uso de extratos antigênicos de concentração elevada e soros policlonais de elevada avidez
Tem sido utilizada para caracterização inicial de extratos brutos de Ag ou de soros hiperimunes obtidos experimentalmente
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Imunodifusão Dupla Radial ou Método de Ouchterlony
Baixa sensibilidade 
Substituída por técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida para identificar peptídeos de Ag e
 “ Immunoblot” para caracterizar por especificidade imunológica Ag/Ac
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IMUNOELETROFORESE
Combina eletroforese + difusão dupla em meio gelificado – alto poder resolutivo
Método qualitativo
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IMUNOELETROFORESE
Quando é utilizada?
Detectar substâncias solúveis imunogênicas utilizando Acs específicos
Auxiliar no diagnóstico de gamopatias monoclonais como MM ou Macroglobulinemia de Waldenstron
Permite diferenciação de gamopatias monoclonais de policlonais, condição secundária causada por doença hepática, desordens do colágeno e infecção crônica caracterizada pelo elevação de duas ou mais Ig !
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Fatores que devem ser criteriosamente controlados:
Ponto isoelétrico
Variações de pH
Carga
Tamanho
Forma
Concentração
Caráter e intensidade do campo elétrico
Força iônica
Temperatura
Viscosidade do meio
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IMUNO
ELETROFORESE
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ELETROIMUNODIFUSÃO
Princípio ?
ELETROIMUNODIFUSÃO SIMPLES LINEAR (LAURELL OU FOGUETE)
ELETROIMUNODIFUSÃO DUPLA LINEAR ( CONTRA-IMUNOELETROFORESE)
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ELETROIMUNODIFUSÃO SIMPLES
 LINEAR (LAURELL OU FOGUETE)
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ELETROIMUNODIFUSÃO DUPLA LINEAR 
( CONTRA-IMUNOELETROFORESE)
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ELETROIMUNODIFUSÃO DUPLA LINEAR 
( CONTRA-IMUNOELETROFORESE)
É semiquantitativa
Cerca de 10 vezes mais sensível que imunodifusão dupla
Um dos 1o. métodos empregados para detecção do Ag de superfície do vírus da hepatite B ( Hbs ag) e de seus Ac anti-HbsAg
Atualmente é empregado: detecção rápida de Ags bacterianos associados a meningite, pneumonia, septicemia, artrite séptica
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IMUNOFIXAÇÃO
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IMUNOFIXAÇÃO
È utilizada para ?
Detecção precoce de gamopatias monoclonais
Identificação de gamopatias biclonais
Diagnóstico de doença de cadeias pesadas
Auxilia no diagnóstico e monitorização de outras doenças linfoproliferativas
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“ Ainda que as palavras possam lhe dizer como DEUS é 
e o que ELE pode querer de você, 
É impossível fazer isso sozinho.
A vida esta NELE e em mais ninguém “