Aula - Protozoários emergentes (Muito boa!)

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Protozoários emergentes
Profa. Dra. Irene Soares
Disciplina Parasitologia Clínica, FCF/USP
1°semestre/2005
Parasitoses emergentes:
Definição: Doenças parasitárias surgidas
recentemente ou que apresentam aumento
crescente de incidência
Fatores: alteração do meio ambiente, avanços nas
técnicas de diagnóstico e aumento da incidência
de AIDS
Outros fatores: uso de imunossupressores
(transplantes) e quimioterapia
Agentes etiológicos
Protozoários coccídios intestinais:
• Isospora belli→ Isosporose *
• Cryptosporium parvum→ Criptosporidiose *
• Cyclospora cayetanensis→ Ciclosporose *
• Sarcocystis hominis→ Sarcocistose
Outros protozoários intestinais:
• Microsporídios →Microsporidiose
� Todos são parasitas intracelulares obrigatórios
Isosporose/Isosporíase
•• Agente etiolAgente etiolóógicogico: Isospora belli (Woodcook, 1915)
•• Taxonomia:Taxonomia:
Filo: Apicomplexa
Classe: Sporozoea
Ordem: Eucoccidiida
Família: Eimeriidae
Gênero: Isospora
Coccídio que apresenta um oocisto elíptico com dimensões de 
30x12 µm, contendo em seu interior dois esporocistos com 
quatro esporozoítas (oocisto maduro)
MorfologiaMorfologia
Esporoblasto Esporozoítas
Esporocistos
Ingestão de oocistos esporulados junto com 
água ou alimentos contaminados
CicloCiclo biolbiolóógicogico
Esporozoítas (intestino delgado)
merozoítas
Gametócitos (masc. e fem.)
Oocistos eliminados nas fezes
(tornam-se infectantes após 4-6 dias)
Reprodução assexuada esquizogonia
Reprodução sexuada
Trofozoítas→ esquizontes
Patogenia e SintomatologiaPatogenia e Sintomatologia
• Imunocompetentes: geralmente assintomática ou com 
diarréia autolimitada
• Imunocomprometidos: quadro diarréico grave (>10 
evacuações/dia), acompanhado de febre, cólicas 
intestinais, vômitos, má absorção e emagrecimento
� Pode apresentar quadros de disseminação extra-
intestinal (linfonodos, fígado e baço)
EpidemiologiaEpidemiologia
• A isosporose tem distribuição mundial
• Mais frequente em áreas tropicais e subtropicais,
sendo endêmica na América do Sul, África e
Sudoeste Asiático
• O aumento da incidência está relacionado ao
surgimento da AIDS: prevalência de 15% em
indivíduos infectados e com diarréia
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
�Diagnóstico parasitológico:
�• Pesquisa de oocistos elípticos de I. belli nas fezes:
- Método de concentração de Ritchie → microscopia óptica (com lugol)
ou contraste de fase
- Método de Hoffmann
�
� Os oocistos encontrados nas fezes são imaturos (contendo
1 ou 2 esporoblastos)
Autofluorescência: oocistos fluorescem sob luz ultravioleta (UV)
Filtro: 330-380 nm → oocistos de coloração azul
� 
Oocistos imaturos de Isospora belli
1 esporoblasto
2 esporoblastos
Oocistos de I. belli
(autofluorescência)
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
�Diagnóstico parasitológico:
� Técnicas de coloração:
Kinyoun (a frio) ou Ziehl-Neelsen modificado � oocistos de
coloração vermelha
Auramina-rodamina� cor amarelo-esverdeada em microscopia
de fluorescência
• Pesquisa de oocistos em aspirados duodenais
� • Biópsia de tecido (duodeno)
 
Oocistos de I. belli
Método de Kynioun
Fluorescência
(Auramina-rodamina)
Oocistos de I. belli (biópsia de duodeno)
Criptosporidiose
•• Agente etiolAgente etiolóógicogico: Cryptosporidium parvum
(Tyzzer, 1907) 
•• Taxonomia:Taxonomia:
Filo: Apicomplexa
Classe: Sporozoea
Ordem: Eucoccidiida
Família: Cryptosporididae
Gênero: Cryptosporidium
Oocisto mede 4 µm
e contem 4 esporozoítas
MorfologiaMorfologia
Oocisto
Espororozoítas
Semelhante ao
de Isospora
� Os oocistos são 
imediatamente 
infectantes quando 
eliminados com as fezes
Pode ocorrer
transmissão direta
pessoa a pessoa, auto-
reinfecção (fecal-oral) e
por inalação
CicloCiclo biolbiolóógicogico
Oocisto esporulado
Contaminação de água e 
alimentos com oocistos
Oocisto
Patogenia e SintomatologiaPatogenia e Sintomatologia
• Imunocompetentes:
Assintomáticos
Sintomáticos: 
Diarréia: Autolimitada→ cura espontânea
Intensa (≅ 20 evacuações/dia)
Outros sintomas: dor abdominal, náuseas e vômitos,
perda de peso, desidratação
Patogenia e SintomatologiaPatogenia e Sintomatologia
• Imunocomprometidos:
Apresentam diarréia crônica e intermitente acompanhada 
de cólicas abdominais, perda de peso acentuada, febre alta e
vômitos
� A intensidade e duração da diarréia está diretamente
relacionada ao número de células T CD4+
� Manifestações extra-intestinais podem ocorrer em pacientes
com AIDS (hepatite, pancreatite e criptosporidiose
respiratória)
EpidemiologiaEpidemiologia
• A infecção humana foi relatada pela primeira vez em 1976
• A partir de 1982 adquiriu importância como oportunista em 
pacientes com AIDS
• A prevalência é de 5-10% em pacientes com AIDS e de 5-20% 
em crianças imunocompetentes (creches)
• São comuns infecções duplas com Cryptosporidium e 
microsporídios
• Surtos de criptosporidiose têm sido relatados em diversos 
países
• Dose baixa de oocisto já é suficiente para adquirir a infecção
(≅ 9 oocistos)
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
Diagnóstico parasitológico:
• Pesquisa de oocistos maduros nas fezes (método de Ritchie)
ou outros líquidos orgânicos (aspirado duodenal e jejunal) →
microscopia óptica ou contraste de fase
� Há necessidade de examinar múltiplas amostras de fezes
Técnicas de coloração:
Kinyoun (a frio) ou Ziehl-Neelsen modificado
(oocistos de coloração vermelha)
Safranina-azul-de-metileno
Acridina-orange (corante fluorescente)
Auramina-carbolfuccina (corante fluorescente) 
� Diagnóstico diferencial com leveduras
Oocistos de Cryptosporidium parvum
Exame direto Exame direto(contraste de fase)
Oocistos de C. parvum
(Método de Kinyoun)
Oocistos de C. parvum
(Microscopia do contraste diferencial de interferência - Nomarski)
Oocistos
esporulados
(esporozoítas
vísiveis)
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
Diagnóstico imunológico:
• Detecção de antígenos em amostras fecais utilizando-se
anticorpos monoclonais
Ensaios imunoenzimáticos: ELISA e imunocromatográficos
Imunofluorescência
• Detecção de anticorpos por ELISA
C. parvum: Testes de detecção de antígenos fecais (ELISA)
C. parvum: Testes de detecção de antígenos fecais
(imunocromatográficos)
Oocisto de C. parvum
(Imunofluorescência direta)
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
Outros métodos:
• Biópsia de jejuno
• PCR
Ciclosporose/Ciclosporíase
•• Agente etiolAgente etiolóógicogico: Cyclospora cayetamensis
(Ashford, 1979)
•• Taxonomia:Taxonomia:
Filo: Apicomplexa
Classe: Sporozoea
Ordem: Eucoccidiida
Família: Eimeriidae
Gênero: Cyclospora
• Oocisto semelhante ao de Cryptosporidium
• Apresenta 8-10 µm de diâmetro (2x maiores
do que os oocistos de Cryptosporidium)
• Os oocistos maduros apresentam dois
esporocistos com 2 esporozoítas cada
MorfologiaMorfologia
Semelhante aos
dos demais
coccídios intestinais
� Os oocistos eliminados 
nas fezes são imaturos, 
levando 5 dias para 
desenvolver os 
esporozoítas
CicloCiclo biolbiolóógicogico
Oocisto
esporulado
Contaminação
de água e 
alimentos com 
oocistos
Meio ambiente
Oocisto não
esporulado
Oocisto não
esporulado
Sexuada Assexuada
Zigoto Meronte I e II
Desencistamento
Patogenia e SintomatologiaPatogenia e Sintomatologia
�
• Assintomáticos
• Sintomáticos: 
Diarréia: autolimitada que dura 3 a 4 dias; podem ocorrer
recaídas frequentes durante um período de 2 a 3 
semanas
Outros sintomas: dor abdominal, náuseas e vômitos,
perda de peso, fadiga, febrebaixa
� Em indivíduos imunocomprometidos o quadro 
diarréico é crônico e intermitente
EpidemiologiaEpidemiologia
• O primeiro caso de infecção humana por Cyclospora
foi descrito em 1979
• Cyclospora é amplamente distribuído no mundo, no 
entanto, a prevalência exata não é conhecida
• Tem sido observados surtos relacionados ao consumo 
de framboesas e manjericão nos EUA e Canadá
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
Diagnóstico parasitológico:
• Pesquisa de oocistos (imaturos) nas fezes → método de 
concentração de Ritchie (o número de oocistos eliminados nas
fezes é muito baixo)
Microscopia por contraste de fase ou luz UV: autofluorescência
Filtro: 330-365 nm (oocistos de coloração azul )
450-490 nm (oocistos de coloração verde)
Técnicas de coloração:
Kinyoun (oocistos de coloração vermelha) → oocisto ácido-
resistente-variável
Safranina-azul-de-metileno→ oocisto de coloração uniforme
� Diagnóstico diferencial com C. parvum→ tamanho do oocisto /
ácido-resistência-variável / necessidade de esporulação
Oocistos de Cyclospora cayetanensis
(Exame direto)
Oocistos de C. Cayetanensis
Autofluorescência
Oocistos de C. cayetanensis
Safranina-azul-de-metilenoMétodo de Kynioun
DiagnDiagnóósticostico laboratoriallaboratorial
• Ensaio de esporulação → dicromato de potássio 2,5%
Outros métodos:
• Biópsia de jejuno 
• PCR
2 esporocistos com 
4 esporozoítas cada
30 x 12Oocisto não
esporulado
Isospora belli
4 esporozoítas4-5Oocisto
esporulado
Cryptosporidium 
parvum
2 esporocistos com 
2 esporozoítas cada
Estrutura do oocisto
8-10
Tamanho
(µm)
Oocisto não
esporulado
Cyclospora
cayetanensis
Forma encontrada
nas fezes
Espécie
Coccídios intestinais
Coccídios intestinais
I. belli C. parvum C. cayetanensis
Roteiro para diagnóstico de coccídios intestinais
Microscopia de
fluorescência
Concentração das fezes (método de Ritchie)
Fixação em formalina tamponada
Isospora
Cyclospora
Presença de 
autofluorescência
Kynioun
Presença de oocistos álcool-ácido resistentes
Cyclospora, Cryptosporidium, Isospora
Fluorescência 
pela Auramina
Sugestivo de oocistos
de coccídios
Microsporidiose
Agentes etiológicos: parasitas pertencentes ao 
Filo Microspora (= Microsporidia)
• 143 gêneros, 1200 espécies
• Eucariotos primitivos: aspectos moleculares e
citológicos de procariotos
• Análises de genes de β-tubulina: fungos (?)
• Parasitas intracelulares obrigatórios
Microsporídios
•• Somente 7 gêneros tem sido descritos como 
patógenos humanos::
Enterocytozoon: E. bieneusi (espécie + encontrada em todo o mundo)
Encephalitozoon: E. intestinalis, E. hellem
Pleistophora
Trachipleistophora: T. hominis, T. anthrpophthera
Vittaforna: V. cornea
Brachiola: B. vesicularum
Nosema: N. connori, N. oculorum
* Microsporidium
MorfologiaMorfologia
• Os esporos são ovais ou
piriformes
• Medem de 2 a 7 µm por
1,5 a 5,0 µm (os estágios
proliferativos podem ser 
arredondados e um pouco
maiores)
Ingestão ou inalação de esporos
Germinação dos esporos
(intestino delgado, trato respiratório,
placenta, olhos, músculos)
Disseminação
(rins, fígado, cérebro, olhos)
Profileração
Esporogonia
CicloCiclo biolbiolóógicogico
Liberação de esporos
Patogenia e SintomatologiaPatogenia e Sintomatologia
• Infecção do trato gastrointestinal (E. bieneusi e E. intestinalis) 
• Hepatite e Peritonite
• Infecção ocular (ceratoconjuntivite)
• Sinusite
• Infecções pulmonares (traqueobronquite, pneumonia)
• Infecções do trato urinário (cistite, nefrite)
• Miosite
• Infecções cerebrais
• Infecções sistêmicas
� Em imunocompetentes: pouca ou nenhuma sintomatologia
EpidemiologiaEpidemiologia
• O primeiro caso humano de infecção por Encephalitozoon sp
foi relatado em 1959
• Em 1985 uma nova espécie foi encontrada em um paciente
infectado pelo HIV: Enterocytozoon bieneusi
• Atualmente os microsporídios são reconhecidos como agentes
etiológicos de infecções oportunistas em pacientes com AIDS
• Pacientes não infectados pelo HIV e pacientes transplantados
também têm sido encontrados infectados por microsporídios
DiagnDiagnóóstico Laboratorialstico Laboratorial
• Microscopia eletrônica
• Métodos de coloração
Tricrômio
Gram-Chromotrope
Substâncias quimioluminescentes: Calcofluor
Fungi-Fluor
Uvitex 2B
• Imunofluorescência
• PCR
Material: fezes, urina, aspirado duodenal, bile,
esfregaços conjuntivais e fluidos nasofaringeanos
Esporos maduros de Encephalitozoon intestinalis
(Microscopia eletrônica de transmissão)
Vacúolo
parasitóforo
Esporos 
maduros
Esporos de microsporídios am amostras de fezes (A)
e tecido intestinal (B)
(Tricrômio modificado, Ryan-Blue)
Esporos de E. bieneusi em fluido
broncoalveolar de um paciente com AIDS
(Coloração de GRAM)
Encephalitozoon intestinalis
(Cultura de células in vitro)
Encephalitozoon spp. 
(Imunofluorescência direta)
Sulfametoxazol + trimetropimCiclosporidiose
Sulfametoxazol + trimetropimIsosporose
Não há tratamento específico
(Sintomático)
Criptosporidiose
Não há tratamento específico
Metronidazol? Albendazol ?
Microsporidiose
Drogas utilizadasParasitose
Tratamento