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GABARITO AD1 – 2008/1 
Disciplina: Biologia Celular I 
 
1) (VALOR 4 PONTOS) Usando um anticorpo primário produzido contra a 
parte extracelular de uma proteína transmembrana da superfície de um 
protozoário e dispondo de vários anticorpos secundários que o 
reconhecem e que estão acoplados ou a fluoresceina ou a ouro coloidal 
ou a peroxidase, que métodos você usaria para responder as seguintes 
perguntas: 
a) Que porcentagem de uma população dos protozoários expõem esta 
proteína? 
R – A melhor resposta seria incubar protozoários fixados mas não 
permeabilizados com o anticorpo primário seguido do secundário acoplado a 
fluoresceina. A contagem por citometria de fluxo permitiria avaliar melhor que 
porcentagem dos protozoários expõe a proteína porque esta técnica conta 
grande número de células. Reparem que a pergunta é sobre protozoários que 
expõem a proteína, ou seja, além de expressá-la ela é levada até a membrana 
plasmática. Por isso, é preciso fazer um controle por microscopia de 
fluorescência para saber se os anticorpos não entraram nos protozoários, 
ficando ligados apenas à parte da proteína exposta na superfície. 
b) Ela está presente apenas na membrana plasmática? 
R – A imunofluorescência de protozoários fixados e permeabilizados responde 
esta pergunta, porque se os anticorpos entram na célula mas mesmo assim só 
se ligam à membrana plasmática, é porque a proteína está apenas lá. 
c) Você tratou os protozoários com uma droga que bloqueia o tráfego 
intracelular. Será que a proteína ficou acumulada no retículo 
endoplasmático? 
R - Para isto é preciso fazer imunofluorescência de protozoários fixados e 
permeabilizados, mostrando co-localização com algum marcador de retículo 
endoplasmático. Também estaria correto fazer o isolamento do reticulo por 
fracionamento celular e comparar a quantidade de proteínas desta fração 
isolada com a quantidade de proteína numa fração de membrana plasmática. 
Para isso, faz-se eletroforese das proteínas das frações, transfere-se para 
nitrocelulose e incuba-se com o anticorpo primário e depois o secundário 
acoplado a peroxidase (western blot). 
d) Você tratou os protozoários durante duas horas com uma droga que 
bloqueia a síntese protéica. Será que os protozoários ainda apresentam a 
mesma quantidade da proteína? 
R – Pode-se avaliar se a proteína está sendo expressa depois do tratamento 
comparando-se os protozoários tratados e não tratados por western blot. 
 
 
2) (VALOR 2 PONTOS) Por que as amostras processadas para microscopia 
eletrônica de transmissão precisam ser desidratadas? 
R – Porque as amostras serão submetidas ao vácuo na coluna do microscópio 
eletrônico e também precisam ter pouca espessura para serem atravessadas 
pelo feixe de elétrons. Para isso, devem ser microtomadas (cortadas em fatias 
finas) depois de incluídas numa resina. As resinas adequadas para 
microscopia eletrônica não misturam com a água. 
 
3) (VALOR 4 PONTOS) Como o colesterol atua no controle da fluidez da 
membrana plasmática? 
R – O colesterol atua diferencialmente conforme a temperatura: na temperatura 
fisiológica, quanto mais colesterol menos fluida é a membrana; em baixa 
temperatura, a presença do colesterol retarda a cristalização dos fosfolipídios 
mantendo a membrana fluida.