relatorio de MIC

Prévia do material em texto

Docente: Denise Colito 
13/06/2014 
Análises 
Microbiológicas 
Introdução geral 
Microorganismos 
Os microorganismos são grupos de diversos organismos microscópicos unicelulares ou 
pluricelulares, tais como: 
• Bactérias 
• Fungos 
• Vírus 
• Protozoários 
 
Para que seja analisado esses microorganismos, macroscopicamente e 
microscopicamente faz -se meios de culturas com nutrientes necessários para 
reprodução e crescimento . 
 
A analise macroscópica faz-se através da contagem directa, mas na análise 
microscópica usa-se o microscópio óptico para o estudo da morfologia. 
Meios de culturas 
Os meios de culturas são preparações químicas que possuem nutriente necessários 
para que os microorganismos possam se multiplicar. 
 
Entre os principais componentes de um meio de cultura estão: 
• fontes de carbono 
• energia (como os açúcares) 
• fontes de nitrogénio 
• fósforo 
• sais minerais 
Os meios de cultura são classificados quanto ao estado físico em: 
• Os sólidos, quando contém agentes solidificantes, principalmente ágar (cerca de 1 
a 2,0 %). 
• Os semi-sólidos, quando a quantidade de ágar e ou gelatina é de 0,075 a 0,5 %. 
• Os líquidos, sem agentes solidificantes 
Preparação de meio de cultura Agar Macconkey 
Os demais meios de cultura são: 
 
• Meios definidos ou sintéticos – todos os seus componentes são conhecidos 
 
• Meios complexos – contêm determinados ingredientes de composição química 
desconhecida 
 
• Meios selectivos – favorecem o crescimento de microorganismos particulares 
 
• Meios diferenciais – distinguem entre diferentes grupos de bactérias 
 
• Gelose de sangue - Indispensável para a cultura de Streptococcus pyogenes 
 
• Gelose de chocolate - Produz-se por aquecimento da gelose de sangue a 70/80 °C 
 
• Culturas puras -Uma população celular proveniente de uma célula única 
 
• Objectivo: preparação de meio de cultura solido Agar Macconkey. 
 
 
 
 
 
• Resume: fez-se a preparação de um meio de cultura sólido, colocado no autoclave a 
121ºC para a esterilização. 
Procedimentos 
• Aquecer uma certa quantidade de água. 
 
• Adicionar 7.5g de Macconkey na agua que 
esta sob aquecimento e agitar a mistura 
• Acertar o volume 
 
• Colocar na autoclave para esterilização a 
121ºC durante 20 min. 
Procedimentos : Matéria
s: 
 
 
 
Reagentes: 
• 150 ml de água 
• 7,5 g de Macconkey 
Resultado: 
Ao fim da experiência denotou-se um liquido de cor vermelho que torna 
cada vez mais puro. 
 
Discussão: 
Durante uma semana observamos que o liquido tornou solido a temperatura 
ambiente o que comprova que não houve grande erros de medição sabendo que o 
Agar Macconkey é um meio solido, selectivo para bactérias gran negativos e 
diferenciável para bactéria com lactose e sem lactose. 
Introdução 
 
Os microrganismos são os menores seres vivos existentes, tem a capacidade de 
estar ao mesmo tempo em diversos lugares. 
 
A ubiquidade dos microorganismos é baseada em três características principais: 
 
• tamanho reduzido, que permite uma grande capacidade de dispersão; 
 
• variabilidade e flexibilidade metabólica, que permite se adaptar e tolerar 
rapidamente às condições ambientais desfavoráveis; 
 
• e sua grande capacidade de transferência horizontal de genes, que lhes permite 
recombinar e colectar caracteres positivos e persistir durante um longo tempo 
adaptando-se às condições ambientais instáveis. 
Ubiquidade Microbiana 
Meios de culturas utilizados para analise ubiquidade microbiológica 
 
Meio TSA (trypticase soy agar) 
• É um meio não selectivo onde crescem diversas bactérias. 
• O meio é rico em triptona e peptona, fonte de carbohidratos, proteínas e lipídios 
para o desenvolvimento dos microorganismos verificados. 
 
 
 
Meio Agar Sabouraud 
• Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos levedura, e 
coliformes filamentosos. 
 
 
 
 
Bactéria 
 
 
As bactérias são microorganismos de tamanho variável 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Quanto a parede celular as bactérias é classificadas em dois grandes grupos: 
• Gran positivo e gran negativo 
 
 
 
 
Coloração de gram 
 A técnica de coloração de gram foi inventada por Hans Christian Joachim Gram 
em 1884 
 
 
Essa técnica ajuda na taxonomia e identificação das bactérias. 
 
 
A coloração roxa: gram positiva 
 
 
 
A coloração rosa/vermelha: gram negativa 
 
• Cor rosa 
• Mais peptdoglicanos e menos lipídeos 
• Menos susceptível a dissolução 
• Ácido tecoíco 
Gram positiva 
gram negativo 
• Cor rosa/ vermelho 
• Mais lipídeos (LPS, Lipoproteínas e fosfolipídeos) 
• Lipídeos dissolvidos com o álcool 
 Objectivo geral: comprovar a ubiquidade Microbiana 
O objectivo especifico: analise microscópica e macroscópica dos microrganismos. 
 
 
Resume: colocou o meios cultura TSA na cantina e meio agar sabouraud em casa 
de banho para comprovar se os microorganismos estão presente no meio. 
 
 
 
Procedimento: 
Colar o meio de cultura TSA na cantina aberta ao ar. 
Colocar o meio de cultura agar sabouraud em casa de banho aberta ao ar. 
Meio TSA Meio Agar Sabouraud 
Analise dos resultados placa 1 TSA( 1ª semana) 
 
 
Bactérias Fungos 
Cor 
Números 
Formas 
Elevação 
Margem 
6 bactérias 19 fungos 
Todos amarelos frente 
e trás 
Frente:16 creme e 2 preta 
Verso: branca e preta 
Todos circulares 
18 Fungos circular 
1 Fungo filamentosa 
1 Convexa 
1 Obliquada 
4 Rasas 
1 achatado, 11rasas 
1 umbilicado 
5 convexas 
 
5 inteira 
1 ondulada 
1 lobulada 
18 inteira 
 
 
Bactérias Fungos 
Cor 
Números 
Formas 
Elevação 
Margem 
Analise dos resultados placa 2 agar sabouraud (1ª semana) 
6 bactérias 
Amarelo Claro 
Achatadas 
Inteiro 
Puntiforme 
Resultado de 1º semana 
TSA (placa 1) TSA (placa 1) 
Agar sabouraud (placa 2) 
2º semana 
3º Semana 
TSA (placa 1) 
Agar sabouraud (placa 2) 
4º Semana 
Agar sabouraud (placa 2) 
TSA (placa 1) 
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
sem. 2 sem.3 sem.4 sem.5
meio TSA
meio agar sabouraud
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
sem.6 sem.7 sem.8 sem.9
meio TSA
meio agar sabouraud
Discussão do resultado 
Análise macroscópica 
o De acordo com o crescimento de bactérias e fungos nas duas placas consegue-se fazer 
uma estatística de que os microorganismos estão presentes em todos os lugares. 
 
 
o Na placa com meio TSA houve nas primeiras semanas maior números de 
microorganismos que no meio agar sabouraud, isso é porque os microrganismos 
presentes do meio adaptaram mais rapidamente ao meio TSA, mas já na terceira semana 
denotou que houve um crescimento exponencial de colónias de fungos no meio agar 
sabouraud o que indica que estavam na fase de crescimento. 
 
 
o A partir da quarta semana tanto a placa de sabouraud como a de TSA não houve nenhuma 
mudança significativa, os microorganismos estavam na fase estacionária devido à 
escassez de nutrientes uma vez que o número de microrganismo aumentou ou é a 
libertação de matérias tóxicos havendo um descontrole de PH. 
 
 
o Na placa do meio agar sabouraud havia crescimento de algumas bactérias que já não 
estavam visível ao olho nu supõe-se que desapareceram devido ao crescimento de novos 
fungos, ou seja, a reaproximação, ou pela libertação de esporos uma estrutura deresistência das bactérias. 
Objectivo : coloração de gram para a análise microscópica das bactérias 
 
 
 
 
 
Resume: fez-se a coloração de gram para poder visualizar tipo de bactéria 
presente no meio, e para melhor visualização usa-se o olho de imersão. 
 
 
Análise microscópica 
Procedimento 
Esterilizar a an 
Colocar uma gota de água na lamina 
Fazer a coloração 
Colocar olho de imersão 
Visualizar no microscópico 
Procedimento para visualizar o 
microrganismo 
 
 
• Esterilizar a ança 
 
• Colocar uma gota de água na 
lamina 
• Fixar a microorganismo na lamina 
que possui gota de água. 
 
• Fazer a coloração gram 
 
• Colocar olho de imersão. 
 
• Visualizar no microscópico. 
Procedimento para coloração 
de gram: 
 
• Colocar na lamina cristal 
violeta (1 min) 
 
• Lugol (1 min) 
 
• Lavar com álcool e cetona 
 
• Lavar com água 
 
• Colocar tusina (30 segundos) 
 
• Lavar com água e secar 
Morfologia de bactéria utilizada para analise microbiológica 
Reagentes: Materiais: 
Resultado: presença de uma bactéria gram negativa em forma de 
cocos e aglomeradas(estafilococos). 
 
 
 
 
 
 
 
 
Discussão: Na analise microscópica observou uma bactéria gram 
negativa , porque tinha uma coloração rosa, isto esta na capacidade da 
membrana das bactérias de reter o corante. Como as bactérias gram 
negativas têm mais lipídeos assim que entra em contacto com o álcool 
acaba dissolvendo muito fácil a coloração do cristal violeta, 
adquirindo então a rosa da segunda coloração. 
Introdução 
A quantificação de microrganismos de interesse sanitário como os coliformes é de 
grande importância para a saúde pública, uma vez que sua presença indica 
contaminação por material fecal. 
 
Coliformes são grupos de bactérias indicadoras de contaminação e são formados pelos 
géneros Escherichia, Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella. 
 
• Habitam no intestino do mamíferos (homens). 
 
• Servem de parâmetros microbiológico básicos as leis de consumo. 
 
 
 
Analise microbiológica da água 
Tipos de coliformes 
Coliformes Totais – grupos de bacteriais gram negativo, podem ser aeróbico e 
anaeróbica, não formam esporos e são associadas à decomposição de matéria 
orgânica em geral. 
 
Coliformes Fecais ou termotolerantes - toleram temperaturas acima de 40ºC e 
reproduzem-se nessa temperatura em menos de 24 horas. Estão presentes nas fezes 
de animais de sangue quente. 
• Ex de animais – gato, boi, porcos, humanos. 
 
• Quando procuramos por coliformes fecais, estamos à procura da Escherichia coli, 
,cuja presença indica contaminação da água ou dos alimentos por fezes. 
 
• Ele designa-se a como Escherichia coli uma bactéria bacilar Gram-negativa 
 
 
 
Objectivo: fazer a análise microbiológica da água, e as características 
físico-químicas da água. 
 
 
 
 
 
 Resumo: fez-se a recolha de 100 ml da água da casa de banho da 
universidade de Cabo Verde para ser analisada através da técnica de tubos 
múltiplos, teste presuntivo, para verificar o contágio da água, teste 
confirmativo para verificar se os coliformes são aerotolerantes e teste 
complementar para ver se são bactérias Escherichia coli. 
 
Procedimentos: 
 
• Fazer a recolha de 100 ml de agua 
usado em casa de banho (para analisar 
quantas bactérias tem nessa quantidade 
de agua) 
 
• Preparar um meio de cultura liquida 
(contem lactose) 
 
• Utilizar a técnica de tubos múltiplos 
para fazer a análise: 
- 1ª Série:10 ml de LST em três tubos 
- 2ª Série:1 ml de LST em três tubos 
- 3ª Série: 0.1 ml de LST em três tubos 
 
• Colocar o tubo de duram dentro de tubo 
de ensaio de cabeça para baixo (para 
visualização de possível criação de gás). 
Apos a obtenção dos resultados do 
teste presuntivo faz um outro 
procedimento com intuito de fazer 
uns testes confirmativos tais como: 
 
 
• Colocar o meio de cultura líquido 
VBB em 6 tubos onde cada série 
possui 2 tubos. 
 
• Colocar o tubo de duran dentro 
dos tubos de ensaio. 
• Agitar os tubos positivos obtidos 
do primeiro experimento 
 
• Colocar 1 ml em cada tubo do 
meio VBB. 
 procedimento para teste complementar: 
 
 
Materiais: 
Resultado: teste presuntivo 
 
 
Resultado: teste confirmativo 
Série 
Crescimento 
Gás 
+ + + + + + + + + 
+ + + + + + + - + 
1 2 3 
 
 Série 
Crescimento 
Gás 
+ + + + + + 
+ + + + + + 
1 2 3 
Resultado do teste complementar: 
 
• Presença da bactéria Escherichia coli 
 
• Dentre as três placas em que se fez a 
técnica de riscado em meio EMB dois 
tinha um reflexo de cor esverdeado e 
com um brilho metálico. 
3 3 3 
2 2 2 
554 UFC 
3 2 2 
3 2 2 
1600 UFC 
OBS: Análise na tabela de acordo com o 
resultado da experiencia para saber o 
numero de bactéria em 100 ml de H2O 
Resultado do teste complementar: 
Placa 1 
Placa 2 
Placa 3 
Discussão: 
• Com a técnica de tubos múltiplos para a análise de água, obtém-se o resultado do 
teste presuntivo. 
 
 
• Os noves tubos utilizados sendo três com 10ml de LST, três com 1ml de LST e três 
com 0.1ml apenas um dos tubo que continha um resultado negativo, isto indica que 
teve 99% de resultado positivo, então a água utilizada esta contaminada com os 
coliformes totais. 
 
 
• No teste confirmativo, foi confirmado que a água estava contaminada por coliformes 
fecais porque todos os tubos de ensaios em meio VBB tinham gases e bolhas. E de 
acordo com a tabela de contagem foi comprovado que tinha a presença de 1600 UFC 
em 100 ml de água que foi examinada. 
 
 
• No teste complementar em três placas de Petri com meio EMB apenas duas deu 
indicação de que a bactéria presente é Escherichia coli, a terceira placa supõe que 
não se pude visualizar claramente a presença de Escherichia coli porque o meio foi 
danificado, isto é fez-se riscado de forma inadequada, na placa 2 teve a presença de 
mucos. 
 
 
Análise microbiológica do leite 
• O leite de cabra é bastante similar ao leite humano . Além de contribuir com a 
formação dos ossos e na prevenção da osteoporose devido ao alto teor de 
cálcio, e também é rico em ferro. 
 
• A contaminação do leite inicia-se durante ou após a ordenha, devido a 
ineficiência de higienização dos utensílios e do homem, além de doenças do 
rebanho. 
 
• Dessa forma, para que seja mantida a qualidade do leite é preciso produzi-lo, 
pasteurizá-lo, armazena-lo e comercializá-lo de maneira correta. 
Introdução 
 
 
• Os mesófilos incluem um grupo de microrganismos capazes de se multiplicarem 
numa faixa de temperatura entre 20 e 45°C. É considerado um bom indicador de 
qualidade microbiológica. 
• As bactérias termófilas são definidas como aquelas que sobrevivem a uma 
temperatura óptima de crescimento de 55 a 65°C. O leite cru, contem poucas 
bactérias termófilas. 
Objectivo geral: 
Fez-se a análise do leite de cabra para determinar os microrganismos presentes nos 
leites, usando a técnica de espalhamento em meio de cultura EMB (para 
entereobáctérias) 
Análise microbiológica do leite de cabra. 
Resume: 
Procedimentos: 
Materiais: 
Reagentes: 
• Leite de cabra 
• 9ml de água pepetuano 
• Meio de cultura EMB 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Resultado: 
10-1 
10-2 
Discussão: 
• Na placa de diluição 10-1 encontrou-se 3,7 *10-1UFC/ml, enquanto que na 
placa de diluição 10-3 encontrou-se 0.5*10-3, já a placa de diluição 10-2não 
se fez a contagem de número de colonias porque estavam contaminadas 
com colonia de fungos, que suspeita que a contaminação é do meio onde 
fazia a analise, isto é, durante o processo de esterilização ocorreu falhas. 
 
 
 
• A 10-1 e10-2 tem presença de Escherichia coli, e entereobactéria. 
• Todas as placas estavam contaminadas, levando em conta a diluição foi 
possível comprovar que quanto maior é a concentração o numero de 
contaminação era maior. 
• O leite analisado estava cheio de microorganismos que possivelmente é um 
leite muito utilizado, principalmente por pessoas de exterior. 
 
Análise microscópica de colónia de fungos 
Introdução: 
• Fungos são seres eucariontes, pertencente ao reino fungi 
 
• São heterotróficos 
 
• Habitam em lugares húmidos e ricos em matéria orgânica, e têm como substância 
de reserva o glicogénio 
 
• Reproduzem assexuadamente através de fragmentação do micélio e sexualmente 
em condições ambientais desfavoráveis 
 
• São conhecidos popularmente como: leveduras (fermento), bolores, mofos, 
cogumelos, orelha-de-pau. 
Objectivo: analisar a morfologia de um fungo, e classificar quanto a sua 
estrutura, utilizando objectiva de 4vezes, 10vezes e 40 vezes. 
 
 
 
 
 
 
 
Resume : fez-se a técnica de fixação, para analisar uma colonia de fungo de 
cor cinzenta. 
 
 
 
 
 
Reagente : 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Matérias 
Procedimento: 
Colonia de fungo que foi analisado microscopicamente 
Resultado: foi observado um fungo constituído por hifa e esporos . 
Discussão: 
• Macroscopicamente o fungo analisado apresentava característica de um bolor , 
com a analise microscópica observou um fugo multicelular constituída por 
micélios e também se observou esporos. 
 
 
• Os micélios formada por hifas asseptadas, isto é, não possuem septos. 
 
 
• Devido a observação dos esporos que são estruturas de dispersão dos fungos, é 
de se ver que o meio sabouraud, colocado na cantina ainda estava sob fase de 
crescimento, porque tinha a libertação de vários esporos. 
Conclusão geral 
Conclui-se 
• Que realmente os microorganismos estão presente quase em todos os lugares, são 
umbigos. 
 
• Que alguns microorganismo tem um crescimento acelerado num meio 
favorável(meio com nutrientes) 
 
• no caso dos fungos de bactérias tem um ciclo de vida como todos os seres vivos, 
nascem, reproduzem e morem. 
 
• E lutem pela sobrevivência criando estruturas de virulência, adaptação e 
resistência. 
 
• Uma forma de defender os patogénicos, é higienizar tudo que nos rodeia, desde a 
saúde publica. 
 
Obrigado pela atenção!! 
Senhor vos abençoe