Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original
14/03/2025 1 Meios de cultura e isolamento dos principais microrganismos PROF.ª RAISA MELO LIMA QUESTÃO ENADE 14/03/2025 2 MEIOS DE CULTURA Meios de cultura artificiais preparações que fornece condições aos microrganismos para crescimento e/ou isolamento Algumas bactérias crescem bem em qualquer meio, outras precisam de algumas substâncias especiais para crescimento bactérias exigentes Algumas bactérias podem não ser cultiváveis apenas em organismos vivos Treponema pallidum Mycobacterium leprae Critérios para o crescimento de microrganismos em cultura Nutrientes adequados e proporcionais Macronutrientes proteínas, carboidratos e lipídeos Micronutrientes sais mineirais, vitaminas Temperatura e pH ideal Geralmente varia entre TA (+-25 °C a 36 °C) e pH entre 6 a 8 Presença ou não de oxigênio Anaerobiose Aerobiose Esterilidade meios autoclavados ou filtrados 14/03/2025 3 Classificação dos meios de cultura Sólidos contêm substância gelificante (ágar observamos as colônias) tubos ou placas Semi-sólidos pouca quantidade de ágar (0,5 a 0,8%) Tubos usados para avaliar a motilidade bacteriana Líquidos (caldos) não tem substância gelificante (não tem como observar colônias) Tubos usados para aumentar a população de bactérias ou fungos mais rapidamente e provas bioquímicas Classificação dos meios de cultura Naturais complexos Sem composição química definida Contêm hidrolisado de carne, sangue, açúcares, vitaminas, extrato de leveduras Para organismos menos exigentes Ex.: Ágar sangue, chocolate, MacConkey, Fava-Netto Artificiais quimicamente definidos A composição química, bem como a quantidade, são conhecidas. Ex.: caldo tetrationato, Ágar sangue Caldo tetrationato 14/03/2025 4 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Transporte e conservação (manutenção) não contém nutrientes e sim apenas “conservantes” Stuart diversas amostras Semissólido Transporta e conserva microrganismos viáveis Haemophillus spp, Salmonella spp, Shigella spp, Pneumococcus spp. Não há fonte de nitrogênio não há proliferação Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Transporte e conservação (manutenção) não contém nutrientes e sim apenas “conservantes” Ágar Cary Blair (Stuart modificado) amostra fecal e retal (Salmonella e Shigella) Semissólido A carência de nitrogênio impede a proliferação também 14/03/2025 5 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Transporte e conservação (manutenção) não contém nutrientes e sim apenas “conservantes” Salina tamponada NaCl tamponado Líquido Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar nutrientemeio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado em Microbiologia como um cultivo preliminar Uso mais freqüente é para a conservação e manutenção de culturas em temperatura ambiente método opcional para os laboratórios que não dispõem freezer à - 80ºC 14/03/2025 6 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Crescimento e isolamento fornece nutrientes para proliferação microbiológica Enriquecidos meio rico que permite crescimento mais rápido de microrganismos em baixa quantidade na amostra. Ex.: chocolate, BHI, sangue Diferenciais permite a distinção entre 2 ou mais tipos de microrganismo Ex.: sangue (cocos GRAM+ hemólise) , MacConkey (não fermentadoras de lactose muda a cor do meio para amarelo), Cled (fermentadoras de lactose muda a cor do meio), EMB (colônias com cores diferentes dependendo da fermentação da lactose ou não) Seletivos seleciona o crescimento de 1 tipo de bactéria Ex.: ágar sabouraud (inibe bactérias baixo pH) ágar MacConkey (inibe Gram+ cristal violeta e sais biliares), EMB (inibe Gram+) Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar sangue diferencial e não seletivo Sangue de carneiro Nesse ágar os eritrócitos estão íntegros favorece a visualização da hemólise Produção ou não de hemolisina Beta-hemólise total Streptococcus pyogenes ou Staphylococcus aureus Alfa-hemólise parcial Streptococcus viridans ou Streptococcus pneumoniae Gama-hemolíticas esbranquiçada Enterococcus faecalis ou Staphylococcus epidermidis 14/03/2025 7 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar chocolate meio enriquecido Para microrganismos exigentes Sangue de cavalo, carneiro ou coelho na preparação alta temperatura lisa as hemácias e liberam hemina e hematina Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp., Brahamella catarrhalis e Moraxella spp Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar Thayer-Martin chocolate meio seletivo e enriquecido Antibióticos inibem algumas bactérias e fungos Colistina Vancomicina Nistatina Crescem apenas espécies patogênicas de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis IMPORTANTE: é um meio de escolha quando a amostra vem de um sítio não estéril (que pode ter contaminação ou infecção por outros microrganismos) 14/03/2025 8 ◦ Ágar MacConkey: seletivo, diferencial ◦ GRAM + não se desenvolvem (Streptococcus, Staphylococcus) ◦ Sais biliares ◦ Cristal violeta ◦ Peptonas utilizada pelas bactérias não fermentadoras de lactose (aumenta o pH) ◦ Lactose utilizada pelas bactérias fermentadoras de lactose (reduz pH) ◦ Vermelho neutro indicador de pH ◦ Fermentadoras lactose: rosa e avermelhadas (E. coli) ◦ Não fermentadoras: meio amarelado 14/03/2025 Seletividade para GRAM - Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo 14/03/2025 9 ÁGAR CLED: fácil, barato, diferencial e não seletivo ◦ Estabilidade muito boa (em geladeira dura até 2 meses) ◦ Peptonas utilizada pelas bactérias não fermentadoras de lactose (aumenta o pH) ◦ Lactose utilizada pelas bactérias fermentadoras de lactose (alteração de pH : reduz) ◦ Azul de bromotimol marcador de pH ◦ Colônias amarelas fermentadores de lactose Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo 14/03/2025 14/03/2025 10 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar Salmonella-Shigella (SS) meio seletivo e diferencial Crescem apenas Gram negativos Sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio inibem Gram positivos. Indicador de pH : vermelho neutro Fermentadoras de lactose colônias de cor rosa (E.coli e Klebsiella) Não fermentadoras colônias transparentes (Salmonella e Shigella) Tiossulfato de sódio e o citrato férrico detecção de H²S evidenciado por formação de colônias de cor negra no centro. Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar EMB meio seletivo e diferencial Crescem apenas Gram negativos Diferencia as fermentadoras de lactose (E.coli e Klebsiella) de não fermentadoras (Salmonella e Shigella) 14/03/2025 11 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Caldo selenitomeio seletivo e enriquecido Os caldos de enriquecimento seletivo são utilizados para diminuir a quantidade de bactérias da microbiota intestinal (Streptococcus e E. coli) normal no espécime fecal, inibindo de alguma forma seu metabolismo e propiciando o desenvolvimento franco dos verdadeiros enteropatógenos Usado para crescimento e isolamento de (Salmonella e Shigella) Inibe E. coli e Streptococcus spp. Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Caldo tetrationatomeio seletivo e enriquecido Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adição da solução de iodo inibe a microbiota normal de espécies fecais. Usado para crescimento e isolamento de Salmonella Estes caldos devem ser sempre utilizados como uma etapa prévia, uma vez que a semeadura direta das fezes em meios sólidos geralmente leva a um supercrescimento da microbiota normal, em detrimento às poucas colônias que podem ser formadas pelos verdadeiros patógenos 14/03/2025 12 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo BHI meio enriquecido Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos. Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar LÖWENSTEIN JENSEN meio enriquecido de isolamento de M. tuberculosis A base do meio é constituída por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactérias Capacidade de produção de niacina positivo para M. tuberculosis (colônias amarelas) Colônias brancas Nocardia spp. Cor original verde claro 14/03/2025 13 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar Sabouraud Dextrose meio para fungos (leveduras e filamentos Características macroscópicas Colônias algodonosas filamentos Colônias cremosas e pastosas leveduras Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar CHROMagarmeio seletivo para Candida Isolamento e identificação para Candida albicans (verde), C. tropicalis (azul) e C. krusei (rosa) de amostras clínicas. Possui uma ação inibidora para as bactérias 14/03/2025 14 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar batata dextrose meio para fungos (leveduras e filamentos) Rico em carboidratos simples de batata amido Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Ágar mycoselmeio seletivo para fungos (leveduras e filamentos) A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatófitos Microsporum, Trichophyton e Epidermophyton O cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias e alguns fungos filamentosos. 14/03/2025 15 Classificação dos meios de cultura quanto ao objetivo Meio para testes de sensibilidade (antibiograma) Ágar Muiller Hintonmétodo de disco-difusão ou e-test Diversas Bactérias Gram + e – Ágar Muiller Hinton Sangue antibiograma Streptococcus 14/03/2025 16 MAPA MENTAL -> folha sem linha ou PowerPoint 1) Escolher um dos grupos de bactérias abaixo Cocos GRAM+ ou Bacilos GRAM- ou Micobactérias ou Espiroquetas 2) Através de uma mapa mental , mostrar o passo a passo desde a coleta do material suspeito, o meio usado para o transporte (se necessário), os exames diretos, colorações e culturas até o isolamento da bactéria 3) Em cada uma das etapas, apresentar as características (mudança de cor, aspecto da cultura, aspecto microscópico, teste de motilidade...) 4) Ao final identificar o gênero e se possível a espécie “isolada”.