Estrutura dos Cromossomos e Ciclo Celular

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ESTRUTURA DOS CROMOSSOMOS E CICLO CELULAR 
Coloração Convencional - Cultivo de Linfócitos Humanos 
A técnica mais usada para estudo de cariótipo humano é o cultivo de linfócitos de sangue circulante periférico. Essa técnica tem a vantagem de oferecer grande número de metáfases em apenas três dias e de eliminar a necessidade de biópsias, como no cultivo de fibroblasto. No cultivo de linfócito emprega-se um agente mitogênico, a fitohemaglutinina, que estimula a atividade mitótica. Para evitar contaminação do material, todo o processo, desde a obtenção até o tratamento com colchicina, deve ser feito sob a mais completa condição de assepsia. Toda a manipulação com o meio de cultura, o soro bovino fetal e o sangue deve ser feita em fluxo laminar.
PROCEDIMENTO
Com uma seringa previamente umedecida de heparina, colete 5 ml de sangue;
Em cada tubo de cultura (tubo cônico) coloca-se 4 ml de meio de cultura (RPMI 1640 da Sigma), 2 ml de soro bovino fetal, 0,5ml de sangue total e 0,2 ml de fitohemaglutinina;
Os tubos serão colocados em estufa de CO2 a 37ºC por 72 horas;
Após 71 horas de cultivo, adicionar 3 gotas de colchicina 0,0016% e deixar por 1 hora;
 Utilizar seringa de insulina para aplicar as gotas de colchicina.
Os tubos são devolvidos a estufa onde permanecem por mais uma hora;
Retirados da estufa, os tubos são centrifugados por 6 minutos com 1800 rpm;
O sobrenadante é retirado, e jateia-se aproximadamente 8 ml de KCl, sendo efetuado desta forma o choque hipotônico;
 Inicialmente, coloca-se 4 ml de KCl, homogeneizar, completar para 8 ml.
Os tubos são colocados em banho-maria a 37ºC por 15 minutos;
Após sair do banho-maria, os tubos devem ser novamente centrifugados, sempre pelo tempo e velocidade previamente descritos;
Retira-se o sobrenadante e goteja-se aos poucos a solução fixador (3:1 Metanol:Ácido acético) ate completar 8 ml. Deixa por 20 minutos a temperatura ambiente;
Após este tempo, mais uma vez o material é centrifugado. O sobrenadante é retirado, os tubos são então unidos de acordo com o pelet e mais fixador é acrescentado até 8 ml. Caso não seja feita lâmina teste no mesmo dia, os tubos podem ser armazenados em geladeira;
Para a confecção de lâminas teste, será realizada tantas centrifugações e trocas de fixador quanto o necessário para que o conteúdo da cultura esteja transparente;
Ressuspenda o sedimento em 0,5 a 1ml de fixador fresco e pingue duas gotas em lâmina limpa, conservada na geladeira. Passe a lâmina rapidamente na chama para evaporar o fixador ou deixe secar à temperatura ambiente.
Identifique cada lâmina;
Core o material com uma solução de Giemsa a 5 %, durante 5 minutos. Lave em água corrente. 
1. Use a metáfase mitótica em anexo para fazer a montagem do cariograma: