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TEMA X-2: Dogma central e Replicação do DNA Conteúdo: - Dogma central da Biologia molecular - O processo de replicação do DNA - Tipos de replicação - Replicação conservativa - Replicação semi-conservativa - Replicação dispersiva ou não conservativa - Replicação contínua ou descontínua - Replicação do DNA circular - Transcrição, - Tradução e - Código Genético 1 Dogma Central da Biologia Molecular O dogma central é um conceito que ilustra os mecanismos de transmissão e expressão da herança genética. O dogma central da Biologia molecular foi descrito em 1958 por Francis Crick, quando procuravam entender a relação entre: - DNA, - RNA e as - Proteínas. DNA pode se replicar e dar origem a novas moléculas de DNA DNA pode ser transcrito em RNA RNA pode traduzir o código genético em proteínas 5 6 O Processo de Replicação do DNA (Watson e Crick) • Replicação do DNA é o processo de duplicação da dupla hélice de DNA • Devido a natureza das bases nitrogenadas, cada fita da dupla hélice de DNA serve de molde para a síntese de outra fita complementar. 1. Á medida que a molécula de DNA paterna se desenrola na dupla hélice, as fitas resultantes servem de molde para o alinhamento dos próximos nucleótidos 2. Formam-se novas fitas complementares às fitas paternas 3. O resultado final são 2 novas duplas hélices-filhas idênticas a dupla hélice paterna ou a que foi usada como molde. 8 Tipos de replicação de DNA 1-Replicação dispersiva ou não conservativa 2- Replicação conservativa 3- Replicação Semi-conservativa 10 1- Replicação dispersiva ou não conservativa Ambas fitas da dupla hélice paterna são fragmentadas, formando segmentos de DNA paternos. Os segmentos são depois intercalados em cada uma das fitas da nova dupla hélice. 11 2- Replicação conservativa A dupla hélice paterna inteira é conservada e dirige a síntese de uma nova dupla hélice 12 3- Replicação Semi-conservativa Cada fita simples da dupla hélice paterna é conservada. Funciona como molde para a síntese da fita complementar. 13 Historia de la genética1958l experimento Meselson-Stahl demuestra que el ADN se replica de modo semiconservador. A replicação semi-conservativa é a forma utilizada pelas células para produzir novas moléculas de DNA. http://es.wikipedia.org/wiki/1958 http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Experimento_Meselson-Stahl&action=edit 18 Forquilha de replicação Este impasse foi solucionado por R. Okazaki, que observou que o DNA recém sintetizado, na região da forquilha de replicação (RF) se encontrava em forma de pequenos fragmentos (fragmentos de Okazaki) - O modelo que explica este mecanismo é que a síntese de DNA segue a direcção 3’ a 5’ ao longo da cadeia ou fita molde e posteriormente muda para a outra fita para seguir a mesma direcção 3’ a 5’ na fita atrasada, com auxilio das primasas. - Enquanto isto a DNA ligasa vai unindo estes fragmentos sobre a cadeia, devido a acção desta enzima é que parece que a replicação segue ambas direcções. 19 21 A BOLHA E AS FORQUILHAS DE REPLICAÇÃO DO DNA PROCARIOTOS EUCARIOTOS Genoma pequeno e circular Única origem de replicação biderecional Genoma grande e linear Múltiplas origem de replicação biderecional 2. Transcrição É o processo de formação do RNA a partir do DNA, este processo é também denominado Síntese de mRNA. O processo da transcrição é efectuado em 3 etapas: Iniciação ou sítio promotor = 3´-TATA-5´ Elongação Terminação = 3’-AAAAAAT-5’ 22 Alongamento da transcrição A sequência terminadora da transcrição do mRNA (em muitos eucariotas) na fita codante é 3’-AAAAAAT-5’ Fita molde e codificadora A transcrição é catalizada pela enzima RNA-polimerase, que rompe as pontes de hidrogénio entre as bases nitrogenadas dos dois filamentos de DNA abrindo-a em forma de zíper. A enzima RNA- polimarase escolhe a fita de DNA molde com a direcção 3´-5´ (fita codante, líder, matriz, rainha ou sentido) para com base nela: Construir o mRNA, Ligando as bases nitrogenadas de RNA à fita de DNA. No fim do processo, a RNA-polimerase: Destaca o filamento de mRNA formado e Volta a unir as duas fitas de DNA. 26 Processo de transcrição 28 Tipos de RNA – RNA mensageiro (mRNA) – RNA de transferência ou transportador (tRNA) – RNA ribossómico (rRNA) 1 - RNA mensageiro (mRNA) É uma longa molécula com uma cadeia única de nucleótidos. Função: Leva a mensagem sequenciada da fita codante no DNA, do núcleo para o citoplasma, em forma de cóndons (tripletos). Cóndon ou tripleto = sequência de 3 nucleótidos. 29 2- RNA de transferência (tRNA) É uma cadeia única constituída de moléculas pequenas, com cerca de 80 nucleótidos; Tem uma configuração que se assemelha a folha de trevo; Algumas bases paream-se formando pontes de hidrogénio entre bases complementares; As partes que não formam pontes de hidrogénio formam o anticóndon; Anticóndon = tripleto do tRNA que reconhece e se liga de forma complementar ao cóndon do mRNA. Uma das extremidades da cadeia termina por G e a outra pela sequência CCA que é onde se liga o aminoácido e é especifico para cada aa. 31 aminoacil-tRNA sintetasas, una para cada aminoácido. 32 Função do tRNA: tRNA serve de ponte (ou adaptador) entre os aminoácidos e as moléculas de mRNA. tRNA medeia a incorporação dos aminoácidos apropriados em resposta aos cóndons específicos do mRNA. 3- RNA ribossómico (rRNA) Função do rRNA: rRNA orienta o mRNA, o tRNA e os aminoácidos sintetizados de um modo preciso para a formação das proteínas. 33 3. Tradução / Síntese proteica • Tradução é o processo pelo qual a informação genética é traduzida em proteínas (síntese protéica). É o processo pelo qual a informação genética DNA, copiada pelo mRNA no núcleo e levada para o citoplasma em forma de tripletos é traduzida numa sequência de aminoácidos (aa) ou polipeptidos = proteínas. 34 Síntese protéica nos ribossomas 36 Fim do processo da tradução O término da tradução é assinalado por um dos seguintes tripletos stop: • UAA, • UAG, ou • UGA Que são tripletos sem sentido uma vez que não codificam nenhum aminoácido. 38 Código Genético Relação entre a sequência de bases no DNA , com as trincas do RNAm e a correspondente sequência de aminoácidos na proteína ...Como é que o DNA que se localiza no núcleo poderia ordenar a estrutura molecular das proteínas que é muito diferente da sua? 40 Pressupostos: a) - 4 diferentes tipos de nucleótidos - 2 nucleótidos purínicos (guanina e adenina) - 2 nucleótidos pirimídicos (timina, citosina e uracilo) b) - 20 diferentes aminoácidos (aa) biológicamente importantes Supondo que: - 1 nucleótido 1 aa 41 = 4 combinações - 2 nucleótidos 1 aa 42 = 16 combinações - 3 nucleótidos 1 aa 43 = 64 combinações 41 Neremberg & Severo, confirmaram a hipótese de que 1aa é codificado por 3 nucleótidos, através da produção de aa in vitro. Ex: mRNA sintético produziu 1 polinucléotido só a base de adenina - AAA lisina - 2partes de guanina +1 parte de uracilo = GUG Valina Incógnitas que permaneceram: - Qual é a ordem das bases? - Quais das 64 combinações são funcionais e quais não são? - Existirão aa codificados por mais de um trio de nucleótidos? 42 O código genético 43 Implicações biológicas do código genético O código genético é universal… O código genético é degenerado… ex: Do incumprimento do mesmo Hemoglobina normal (HBA) mRNA (GAA / GAG) ác. glutámico Hemoglobina anormal (HBs) = Anemia falciforme mRNA (GUU / GUC / GUA / GUG) Valina …substituição de A por U. 44