TÉCNICA HISTOLÓGICA

Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original

*
TÉCNICA HISTOLÓGICA
Disciplina: Histologia 
Prof. Me. José de Jesus R. Marques
e-mail: jjrmarques@hotmail.com 
*
 TÉCNICA HISTOLÓGICA - ETAPAS
COLETA
FIXAÇÃO
DESIDRATAÇÃO
CLAREAMENTO
IMPREGNAÇÃO
INCLUSÃO
MICROTOMIA
COLORAÇÃO
MONTAGEM DE LÂMINAS
OBSERVAÇÃO AO MICROSCÓPIO
*
COLETA
É a retirada de parte do órgão a ser analisada (preparar uma lâmina histológica) podendo ser:
 ▪ de biópsia cirúrgica, endoscópica, cirurgias radicais e necrópsia.
 ▪ de animais de laboratório.
 OBS: em qualquer caso, a peça deve logo ser fixada. 
 
*
FIXAÇÃO
O material coletado é imerso em fixadores
Evita a destruição das células por suas próprias enzimas (autólise) ou por bactérias.
Preserva a morfologia e a composição dos tecidos.
Insolubiliza as proteínas dos tecidos
Oferece ao material uma resistência às fases seguintes (endurece a peça).
*
FIXAÇÃO
PRINCIPAIS FIXADORES
 ▪ Formol (aldeído fórmico) a 10%
 ▪ Glutaraldeído a 4%
 ▪ líquido de “ Bouin” : formol, ácido acético e solução aquosa de ácido pícrico).
 Duração: cerca e 12 a 24 horas, dependendo do fixador e do tamanho da peça.
*
FIXAÇÃO
 Material cortado e colocado no cassete para o processamento.
 
*
FIXAÇÃO
 Material em cassetes plásticos e mergulhados no frasco contendo formol a 10%. 
 
*
DESIDRATAÇÃO
Remover a água dos tecidos
Utiliza-se álcool etílico de concentrações crescentes( 70%, 80%, 90% e álcool absoluto).
Duração: 6 a 24 horas, dependendo do tamanho da peça.
*
DESIDRATAÇÃO
 Bateria de álcool para desidratação. O frasco 1 corresponde a maior proporção água/álcool e o frasco 5 e menor proporção (absoluto). 
 
*
CLAREAMENTO OU DIAFANIZAÇÃO
Embeber a peça em substância miscível com a parafina.
Remover o álcool dos tecidos, permitindo a entrada da parafina.
Os tecidos tornam-se translúcidos
Duração: 1 a 6 horas, dependendo do tamanho da peça.
Ex: xilol, benzol
*
CLAREAMENTO OU DIAFANIZAÇÃO
 Bateria de frascos com xilol. 
*
IMPREGNAÇÃO
Parafina fundida a 60ºC.
Parafina penetra nos vasos,nos espaços intercelulares, no interior das células, impregnando o tecido e tornando mais fácil a obtenção dos cortes no micrótomo.
Duração: 30 minutos a 6 horas, dependendo do tamanho da peça.
*
IMPREGNAÇÃO
 
 
 Peças dentro de fracos de vidro contendo parafina no interior da estufa a 60ºC dentro.
 
*
INCLUSÃO
A peça é colocada num molde retangular contendo parafina fundida.
Finalidade: Obtenção do bloco de parafina para ser cortado no micrótomo
*
INCLUSÃO
 
 Material já incluído na parafina. 
*
MICROTOMIA
Reduzir os tecidos a cortes finos (4 a 6 µm), que após a sua coloração, são visualizados ao microscópio
Equipamento: micrótomo
*
*
MICROTOMIA
 Corte do bloco em tiras de 4 a 6 micrômetros de espessura.
*
MICROTOMIA
 Cortes do material pronto para serem distendidos em água aquecida.
*
MICROTOMIA
 Cortes sobre a água aquecida em "Banho Maria". 
*
MICROTOMIA
 Corte sendo pescado sobre a lâmina de vidro.
*
MICROTOMIA
 
 Lâminas de vidro com os cortes já distendidos sobre a platina aquecedora.
*
MICROTOMIA
*
COLORAÇÃO
Para se proceder à coloração torna-se necessário remover a parafina e hidratar os cortes. 
São usados corantes, os quais se comportam como ácidos ou bases.
Corante Básico ou Catiônico: possui carga elétrica positiva. Ex: HEMATOXILINA
Corante Ácido ou Aniônico: possui carga elétrica negativa. Ex: EOSINA
*
COLORAÇÃO
COLORAÇÃO: Processa-se através dos seguintes passos:
 – Desparafinar em xilol durante 10 min.
 – Imersão em álcool absoluto.(3x)
 – Lavar a lâmina em água corrente durante 3 min.
 – Corar pela hematoxilina (corante básico) durante 5 min.
 – Lavar a lâmina em água corrente durante 5 min.
 – Corar, pela eosina (corante ácido) durante 30 segundos. 
*
COLORAÇÃO
 
 Frascos de vidro com os principais corantes utilizados na confecção de lâminas histológicas. 
 
*
COLORAÇÃO
 – Desidratar o corte em álcool
 – Imersão em álcool absoluto
– Diafanização ou clareamento
 – Imersão em xilol
 
 
*
MONTAGEM
Coloca-se uma gota de resina sintética (Entelan®) sobre o corte. Coloca-se uma lamínula em cima da resina e comprime-se sobre o corte, de modo a espalhar-se a resina em fina camada entre a lâmina e lamínula.
 
*
MONTAGEM
Lâmina e lamínula ( menor) limpas. 
*
MONTAGEM
 Demonstração da adição da resina sintética sobre a lâmina para a montagem. 
*
MICROSCÓPIO
*
MICROSCÓPIO
 1 = ocular   2 = objetivas e revólver   3 = platina   4 = charriot   5 = macrométrico   6 = micrométrico   7 = diafragma no condensador   8 = condensador   9 = botão do condensador 10 = dois parafusos centralizadores do condensador 11 = fonte de luz 12 = controle de iluminação 13 = diafragma de campo (alavanca no lado esquerdo do microscópio) 14 = dois parafusos de ajuste da lâmpada (esquerdo e direito) 15 = focalizadora da lâmpada (alavanca no lado direito do microscópio - não visível no fotografia) 
*
MICROSCÓPIO
*
“O SENHOR É O MEU PASTOR E NADA ME FALTARÁ”
Salmo 23