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1 HEMATOLOGIA Introdução 60% do corpo humano é agua 40% liq intracelular 20% liq. Extracelular* *Liquido intersticial, plasma (substancia orgânica e inorgânica), linfa e liquido cavitários (liq. Cefalo raquidiano, pleural, etc). Albumina ( representa uma classe de prots que são solúveis em agua), é a proteína mais abundante no plasma sanguíneo. Produzida no fígado pelos hepatócitos, suas funções são: � Manutenção da pressão osmótica. � Transporte de hormônios tiroideais. � Transporte de hormônios lipossolúveis. � Transporte de ácidos graxos livres. � Transporte de bilirrubina não conjugada. � União competitiva com ions de cálcio. � Controle do pH Tecido conjuntivo sanguíneo O sangue (originado pelo tecido hemocitopoiético) é um tecido altamente especializado, formado por alguns tipos de células, que compõem a parte figurada, dispersas num meio líquido – o plasma -, que corresponde à parte amorfa. Os constituintes celulares são: � glóbulos vermelhos (hemácias ou eritrócitos). � glóbulos brancos (leucócitos) . O plasma é composto principalmente de água com diversas substâncias dissolvidas, que são transportadas através dos vasos do corpo. 2 HEMATOLOGIA Todas as células do sangue são originadas na medula óssea vermelha a partir das células indiferenciadas pluripotentes (células-tronco). Como consequência do processo de diferenciação celular, as células-filhas indiferenciadas assumem formas e funções especializadas. O sangue em contato com outra superfície (que não seja os vasos sanguíneos), ativa fatores de coagulação. O plasma sem esses fatores de coagulação é chamado de soro. Coagulação - sequência complexa de reações químicas que resultam na formação de um coágulo de fibrina. É uma parte importante da hemostasia (o cessamento da perda de sangue de um vaso danificado), na qual a parede de vaso sanguíneo danificado é coberta por um coágulo de fibrina para parar o sangramento e ajudar a reparar o tecido danificado. A Fibrina é uma proteína fibrosa envolvida na coagulação de sangramentos. Ela sofre polimerização de modo que, em ação conjunta à das plaquetas, formam uma camada que detém hemorragias. A fibrina é formada a partir de uma cadeia de reações que culmina na ação da trombina sobre o fibrinogênio. Plaquetas (ou trombosito) - (elementos figurados do sangue) Plaquetas são restos celulares originados da fragmentação de células gigantes da medula óssea, conhecidas como megacariócitos. Possuem substâncias ativas no processo de coagulação sanguínea, sendo, por isso, também conhecidas como trombócitos (do grego, thrombos = coágulo), que impedem a ocorrência de hemorragias, são ativadas por exposição ao colágeno. Depois que ocorre a ativação, elas se aderem ao subendotélio lesado, ali se acumulam e se ligam entre si formando um trombo que é posteriormente estabilizado. Glóbulos vermelhos (elementos figurados do sangue) Glóbulos vermelhos, hemácias ou eritrócitos são anucleados, possuem aspecto de disco bicôncavo e diâmetro de cerca de 7,2 mm. São ricos em hemoglobina, a proteína responsável pelo transporte de oxigênio, a importante função desempenhada pelas hemácias é transporte de oxigênio e dióxido de carbônico, e o equilíbrio acido básico (tamponamento). Glóbulos brancos (elementos figurados do sangue) Glóbulos brancos, também chamados de leucócitos, são células sanguíneas envolvidas com a defesa do organismo. Essa atividade pode ser exercida por fagocitose ou por meio da produção de proteínas de defesa, os anticorpos. Costuma-se classificar os glóbulos brancos de acordo com a presença ou ausência, em seu citoplasma, de grânulos específicos, e agranulócitos, os que não contêm granulações específicas, comuns a qualquer célula. 3 HEMATOLOGIA Glóbulos Brancos Características Função G R A N U L Ó C I T O S NEUTRÓFILO Célula com diâmetro entre 10 e 14 mm; nucleo pouco volumoso, contendo 2 a 5 lóbulos, ligados por pontes cromatínicas. Cerca de 55% a 65% dos glóbulos brancos. Atuam ativamente na fagocitose de microorganismos invasores, a partir da emissão de pseudópodes. Constituem e primeira linha de defesa do sangue. EOSINÓFILO Célula com diâmetro entre 10 e 14 mm, núcleo contendo dois lóbulos. Cerca de 2% a 3% do total de leucócitos. Células fagocitárias. Atuação em doênças alérgicas. Abundantes na defesa contra diversos parasitas. A G R A N U L Ó C I T O S BASÓFILO Célula com diâmetro que varia entre 10 e 14 mm. Núcleo volumoso com forma de S. Cerca de 0,5 % do total dos glóbulos brancos. Acredita-se que atuem em processos alérgicos, a exemplo dos mastócitos. LINFÓCITO Célula com diâmetro que varia entre 8 a 10 mm. Dois tipos básicos: B e T. Núcleo esférico. Cerca de 25% a 35% do total de leucócitos. Responsáveis pela defesa imunitária do organismo. Linfócitos B diferenciam-se em plasmócitos, as células produtoras de anticorpos. Linfócitos T amadurecem no timo, uma glândula localizada no tórax. MONÓCITO Célula com diâmetro entre 15 e 20 mm. Núcleo em forma de ferradura. Cerca de 10 % do total dos glóbulos brancos. Acredita-se que atravessem as paredes dos capilares sanguíneos e, nos tecidos, diferenciam-se em macrófagos ou osteoclastos, células especializadas em fagocitose. O sangue é considerado um tecido conjuntivo especializado, no sangue o liquido intracelular e extracelular são 50% de cada. 4 HEMATOLOGIA Componentes do sangue - plasma - Ions orgânicos - Subst. orgânicas. - cels: hemácias e leucócitos. - plaquetas Hematopoiese Proliferação e diferenciação de todas as células do sangue. As cels tronco no adulto se encontram na medula óssea são responsáveis por formar tds as cels e derivados celulares que circulam no sangue. Local de formação do sangue Nas primeiras semanas de gestação o saco vitelino é o principal local de hematopoese. De 6 a 7 semanas de vida fetal, o fígado e o baço são os principais órgãos envolvidos e continuam a produzir cels sanguíneas ate cerca de duas semanas após o nascimento. A medula óssea dos ossos chatos (esponjosos), é o local mais importante de hematopoese, a partir de 6 a 7 meses, durante a infância e a vida adulta (única fonte de novas cels sanguíneas). No período de lactação, toda a medula óssea é hematopoética, mas durante a infância há substituição progressiva da medula por gordura nos ossos longos, de modo que a medula hematopoética no adulto é confinada ao esqueleto central e as extremidades proximais do fêmur e úmero, msm nessas regiões hematopoéticas ~ 50 % da medula é gordura. A medula óssea gordurosa raramente é capaz de reverter para hematopoese, em mtas doenças, tbm há expansão da gordura nos ossos longos. Além disso, o fígado e o baço podem retornar a seu papel hematopoiético fetal (hematopoese extramedular). 5 HEMATOLOGIA Tecido hematopoetico A hematopoiese é função do tecido hematopoiético, que ancora a celularidade e o microambiente tissular necessários para gerar os diferentes constituentes do sangue. No adulto, o tecido hematopoetico forma parte da medula ossea (medula vermelha), ali é normal ocorrer hematopoiese. O local de hematopoiese varia durante a ontogenese (desenvolvimento do embrião), assim observamos tres fases sequenciais de locias hemtopoeticos.1. Fase mesoblastica: fase inicial, no penduculo do tronco do saco vitelino. Ambas as estruturas tem poucos mm de longitude (2ª semana embrionaria). 2. Fase hepatica: 6ª semana de vida embrionaria. 3. Fase mieloide: O baço e a medula ossea fetal. Orgão hematopoéticos: medula óssea, linfonodos (ganglios linfaticos), baço e fígado. Estroma da medula óssea A medua ossea é forma um meio adequado para crescimento e desenvolvimento de cels tronco, o qual é composto por cels do estroma(tecido conectivo e não funcional, servindo de sustentação para orgão ou tecidos) e de uma rede microvascular. As cels do estroma incluem adipocitos, fibroblastos, cels endoteliais e macrofagos que secretam moleculas extracelulares como glicoproteinas (fibronectina e trombospondina) e glicosaminoglicanos (acido hialuronico e derivados condrontinicos) para formar uma matriz extracelular, alémde secretarem varios fatores de crescimento necessários para sobrevivencia das cels tronco. Cels tronco mesenquimais são consideradas criticas na formação do estroma. As cels tronco são capazes de circular no organismo e são encontradas em pequenos numeros no sangue periferico. Para deixar a medula ossea as cels devem atravessar o endotelio vascular, e esse processo de mobilização é aumentado pela administração de citocinas, como fator estimulante de colonias granulocitas ou fator estimulante de colonias granulocitico – macrofagicas. 6 HEMATOLOGIA O processo reverso, de volta ao lar (homing), parece depender de um gradiente quimiocinetico, no qual o fator derivado do estroma é critico. Eritropoese As stem cells (cels de origem da medula ossea) tem a capacidade de gerar novas cels de origem, e de se diferenciar em qualquer linhagem de cel do sangue. Com o inicio da diferenciação uma cel de origem perde seu potencial pluripotente, e é direcionada para a produção de uma ou mais linhagens celulas. Perde tbm sua capacidade de auto-renovação, tornando-se uma célula progenitora. Embora destinada a uma dada linhagem essa celula progenitora ainda não adquiriu as caracteristicas da linhagem. Os estagios de diferenciação da hemacia pode ser divididos da seguinte forma: Coloração: aspirado de medula ossea, corado por azul de metileno-eosina (coloração de Wright). • Fase de proliferação da celula - Proeritroblasto – cel grande, citoplasma azul e um nucleo que ocupa mais da metade da celula. O nucleo apresenta cromatina e contem mtos nucleolos pequenos e azuis. - Eritroblasto basófilo – a cel perdeu seus nucleolos, aglutinação de cromatina no nucleo, citoplasma azul com elevado conteudo de RNA. - Eritroblasto policromatico – a cel e seu nucleo são menores, grandes agrupamento de cromatina nuclear, conteudo decrescente de RNA e aumento da hemoglobina. • Fase da maturação – hemoglobinização e perda de núcleo. -Eritoblasto ortocromático - cel ainda menor, núcleo bola maciça e preta, citoplasma roséo. - Reticulócito – cel quase madura, já expeliu o núcleo, contém RNA residual em seu citoplasma. - Eritrocito – disco bicôncavo sem núcleo, vermelho. Diariamente são produzidas em torno de 10¹² novos eritrocitos, a eritropoese dura cerca de 7 dias, e um proeritroblasto produz 16 eritrocitos maduros. 7 HEMATOLOGIA Regulação da eritropoese A regulação é mediada por um fator de crescimento a eritropoietina, um hormônio que é levado pelo sangue até a medula óssea a partir de seu local de produção no rim. Não há reservas de eritropoietina , o estimulo para sua produção é a tensão de oxigênio nos rins. A produção de eritropoietina portanto aumenta na anemia, qdo por alguns motivo a Hb é incapaz de liberar o oxigênio. A eritropoietina estimula a eritropoese aumentando o numero de cels progenitoras comprometidas com a eritropoiese. A medula óssea necessita de mtos outros precursores para uma eritropoese eficaz, incluindo metais como o ferro e cobalto, vitaminas (especialmente a B12*, C, E, B6, tiamina e riboflavina). A deficiência de qlq um desses pd levar a anemia. *B12- é uma coenzima de duas reações bioquímicas , elemento necessário para manter a hematopoese e a síntese de Hb, assim como o acido fólico e o ferro. A B12 tbm é importante para a divisão celular e duplicação do DNA. Hemoglobina (Hb) A principal função dos eritrócitos é o transporte de oxigênio aos tecidos e retorno de dióxido de carbono dos tecidos para os pulmões. Para executar essa tarefa eles contam com uma proteína especializada chamada Hb. Proteína formada por quatro cadeias polipeptídicas, cada uma contém um grupo HEME. Cada HEME é formado por um anel protoporfirínico contendo um átomo de ferro na forma ferroso(Fe++). Ocorre o início da síntese nos pró-eritroblastos e termina nos reticulócitos. Um fator importante para a formação da Hb é o ferro. Tipos de Hemoglobina • Embrionária: • Gower 1 (ξ2ε2) • Gower 2 (α2ε2) • Hemoglobina de Portland (ζ2γ2) 8 HEMATOLOGIA • Fetal: • Hemoglobina F (α2γ2) – contem cadeias α2γ2 • Adultos: • Hemoglobina A (α2β2) - O tipo mais comum, correspondendo a 95% da hemoglobina total. Consiste de quatro cadeias polipeptídicas α2β2, cada uma com seu próprio heme. • Hemoglobina A2 (α2δ2) - cadeias δ são sintetizadas no ultimo trimestre apos o parto, seu nível normal e de aproximadamente 2.5%. Globina formada por duas cadeia alfa e duas cadeias gama. • Hemoglobina F (α2γ2) - No adultos a Hemoglobina F e restrita a uma população de células vermelhas (hemácias) chamadas células F, este tipo de hemoglobina corresponde a cerca de 2,5% da hemoglobina total. Cada grupo heme é formado por um anel porfirinico contedo um átomo de ferro na sua forma ferrosa. A Hb é formada por uma porção proteica chamada globina e uma outra correspondente ao heme, a síntese de Hb começa a partir do proeritroblasto e vai aumentando durante a maturação das cels ate a fase de reticulocito. Estes são responsáveis por 35% da produção de Hb, eritrócitos não sintetizam Hb! Hemacias – seu equilíbrio osmótico é determinado pela bomba de sódio e potássio, tem função tampão (promove a manutenção do pH do sangue). Sua produção de ATP se da pela glicose anaeróbia (piruvato � lactato) – principal via de energia de produção de energia e corresponde a aproximadamente 90% da degradação da glicose. Vias das pentoses – corresponde de 5% a 10% da glicose que é degradada por essa via. É dependente da enzima glucose 6 fosfato desidrogenase (G6PD). Hemacias senescentes são removidas pelo baço, se a pessoa não tiver baço a remoção será pelo fígado. Anemias Diminuição da concentração de Hb no sangue e deficiência de suprimentos de oxigênio para os tecidos. Homem adultos – abaixo de 13,5g/dL Mulher adulto – abaixo de 11,5g/dL As principais adaptações as anemias ocorre no sistema cardiovascular (com o aumento do volume sistólico e taquicardia), há pqnas perdas há adaptação da M.O. 9 HEMATOLOGIA A anemia resulta sempre de um desequilíbrio entre a produção e distribuição de eritrócitos. - beta talassemia – causa anemia por afeiçoamento (foice) dos eritrócitos. É uma doença hereditária autossômica recessiva que afeta o sangue. Na talassemia, o defeito genético resulta na redução da taxa de síntese de uma das cadeias da globina que formam a Hb. A redução da síntese pd causar a formação de moléculas de Hb anormal, causando anemia. - anemia ferropriva – comum, causada pela deficiência de ferro, as hemácias ficam pqnas (microcitose). - Anemia por deficiência na vitamina B12 – (anemia perniciosa) é uma anemia megaloblástica. A pessoa não produz um fator extrínseco para absorção da vitaminaB12. Há baixa produção de glóbulos vermelhos, afeta SN, aparecimento de movimentos espasticos. Hemofílico – doença genética causada por deficiência no fator de coagulação do sangue. Hematócrito Método que permite medir a massa de hemácias , por centrifugação em capilares, onde uma de suas extremidades é vedada. Constitui a medida da razão entre o volume dos eritrócitos e o volume de sangue total. O resultado é expresso em %: Valores de referencia – homem 40 a 50% Mulher 35 a 45% Degradação da Hb – formação de bilirrubina a partir da degradação da Hb. As hemácias senescentes (120 dias) se tornam mto frágeis para permanecerem na circulação sanguínea, suas membranas sofrem ruptura , e a Hb é liberada e fagocitada por macrófagos 10 HEMATOLOGIA teciduais em todo organismo. Nesse sistema a Hb é desdobrada em globina e heme, e o anel heme é aberto produzindo: - ferro livre que é transportado pela corrente sanguínea pela transferina. - Uma cadeia linear de 4 nucleos pirrolicos, que constitui o substrato a partir do qual sera formada a bilirrubina (heme). A primeira substancia formada é a biliverdina, que é rapidamente reduzida a biliverdina livre. Esta ultima é gradualmente liberada no plasma pelos macrófagos. A bilirrubina livre se combina com a albumina plasmática e é transportada para o sangue e liquido intersticial. Msm qdo ligada a prots plasmáticas essa bilirrubina é denominada livre para se diferenciar da bilirrubina conjugada. Dentro de poucas horas a bilirrubina livre é absorvida através da membrana celular hepática. Ao passar para o interior das cels hepáticas é liberada da albumina, e depois, 80% é conjugada com acido glicurônico para formar glicuronideo de bilirrubina, enquanto 10% são conjugados com sulfato, formando sulfato de bilirrubina. E os 10% restantes são conjugados com outras substancias. É nessa forma que a bilirrubina é excretada dos hepatócitos por um transporte ativo nos canalículos biliares, e a seguir no intestino. Lá ela volta a ficar livre, sofre ação de redução pelas enzimas da flora bacteriana, tornando-se estercobilinogênio. Este é oxidado pelo oxigênio atmosférico, convertendo-se a estercobilina (da cor as fezes). Por causa do estercobilinogênio ser mto solúvel em agua, há reabsorção de uma parte e esta é eliminada na urina (urobilinogênio). 11 HEMATOLOGIA Leucócitos (glóbulos brancos) São divididos em dois grupos granulocitos e agranulocitos Os granulocitos são: - Neutrofilo: trilobado, segmentado, grânulos finos no citoplasma róseo - eosinófilo: possui dois lobos separados, com bastante granulações - Basofilo: granulações grosseiras no citoplasma (roxas) no citoplasma, núcleo irregular em forma de trevo. Leucócitos agranulócitos Linfócito – núcleo grande, pouco citoplasma. Monócito – núcleo em forma de ferradura. Obs.: Para observar os leucócitos é necessário colocar uma solução lisante de hemácias. Mastócitos (não encontrado no sangue) e monócito = alergia. Neutrófilo Eosinófilo Basófilo 12 HEMATOLOGIA Neutrófilo - população mais numerosa entre os leucócitos circulantes do sangue. - Apresenta núcleo lobulado - defesa: fagocitose e destruição dos microorganismos Neutrofilia – aum. no numero de neutrófilos (infecção bacteriana, inflamação etc). Neutropenia – dim no numero de neutrófilos (problemas na produção das cels na m.o. ou destruição das cels em outras partes do corpo). Eosinófilo - menos numerosos: 2 a 4% concentração na pele e mucosas - núcleo bilobulado - granulações grosseiras de coloração alaranjada no citoplasma -Defesa: processos parasitários e alérgicos. Eosinofilia – aumento no numero de eosinófilos. Basófilo - 0 a 1% dos leucócitos (raro). - núcleo volumoso com forma irregular - grandes grânulos citoplasmáticos, grosseiros azul escuro mtas vezes sobre o núcleo. - Grânulos- histamina e heparina (envolvidos em processos alérgicos). - Basofilia – aumento número de basófilos. GRANULOPOESE Mieloblasto � promielócito � mielócito � matamielócito � bastonete � segmentado neutrófilo, basófilo ou eosinófilo. 13 HEMATOLOGIA Agranulócitos Linfócitos - segunda maior célula sanguínea e mais comum no sangue (20 a 50%) - núcleo redondo pouco citoplasma Subtipos de linfócitos - T CD4 – participa da resposta celular, q consiste na ativação de macrófagos por meio do linfócito TCD4 (auxiliar), para eliminar o microorganismo fagocitado. Ativação do TCD8 (citotóxico) para eliminação de cels infectadas. - Linfocito B – representa 15% dos linfócitos do sangue, participam da resposta humoral (mediada por anticorpos) . diferenciação em plasmócito que libera anticorpos Obs.: os subtipos T e B não podem ser diferenciados por esfregaço sanguíneo. Monócitos -Representa de 2 a 10% dos leucócitos - constituí a célula de maior tamanho no sangue - núcleo irregular em forma de ferradura - citoplasma com coloração acinzentada com granulações azurofilas, podem apresentar VACUOLOS no citoplasma. - Precursores dos macrófagos - Função: fagocitose e apresentação de antígenos - monocitose – aum no numero de monócitos no sangue. MONOPOESE Monoblasto � promonócito � monócito LINFOPOESE Linfoblasto � prolinfócito � linfócito 14 HEMATOLOGIA Megacariócito São cels da Medula óssea, são responsáveis pela produção de plaquetas - Apresenta de 4 a 8 lobos - citoplasma de contorno irregular (após perder todo seu citoplasma seu núcleo se fragmenta) Megacariocitose – aumento no numero de megacariócitos. Megacariopenia – diminuição no numero de megacariócitos. Plaquetas ou trombócitos Formada na medula óssea, as células que geram a formação das plaquetas são os megacariócitos. Megacariócito é uma célula grande e multinucleada e as plaquetas nada mais são do que fragmentos do seu citoplasma. Sua produção é estimulada pelo hormônio trombopoietina, formado no fígado. - São fragmentos celulares anucleados que tem origem a partir do CITOPLASMA do megacariócito. - apresentam aspecto granular, coradas em purpura devido a numerosas organelas. - Atuam na coagulação sanguínea (mantem a homeostase sanguínea, processo fisiológico de reparo, tampão homeostático). Adesão plaquetária Qdo um vaso sanguíneo é lesado, ocorre exposição de colágeno à plaqueta. Neste momento ocorre a secreção de um fator chamado de FATOR DE VON WILLWBRAND que ira se ligar a uma proteína presente na membrana superficial das plaquetas, a glicoproteína GPib. O fator de VON serve como uma TROMBOCITOPOESE Cels da linhagem germinativas �magacarioblasto � promegacariócito � megacariócito � plaquetas 15 HEMATOLOGIA ponte de ligação entre as plaquetas e o endotélio, o fator de von willebrand (VWF) é uma glicoproteína secretada pelo endotélio envolvida com a adesão plaquetária a parede vascular (agregação). Obs.:Qdo uma pessoa tem falta de GPib ela é acometida pela síndrome de bernard-souliver. Pessoas que tem falta ou diminuição do fator de VON são acometidas pela doença de VON WILLWBRAND, em ambos os casos suas plaquetas não conseguem aderir normalmente ao endotélio. Ativação plaquetária Após a adesão das plaquetas ao subendotélio, novas plaquetas são ativadas e acabam se juntando a essas plaquetas. Os eventos subsequentessão alteração de forma distensão, ativação GPib e secreção de grânulos. As plaquetas tornam-se mais esféricas e emitem pseudopodes que aumentam a interção com as paredes vasculares e com as demais plaquetas. O resulado final da distensão é a formação de uma plaqueta achatada com grânulos e organelas no centro, com aparência de ovo frito. São produzidas pelo citoesqueleto de actina. Agregação plaquetaria Caracterizada pela ligação cruzada das plaquetas por meio de receptores de GP com pontes de fribrinogênio, a ligação ocasiona alteração na conformação molecular, resultando em uma conexão firme e ativação progressiva das plaquetas. Limitação fisiológica da coagulação sanguínea – a coagulação descontrolada do sangue causaria oclusão perigosa dos vasos sanguíneos (trombose) se mecanismos protetores (inibidores de fatores de coagulação, diluição pelo fluxo de sangue ou fibrinolise) não fossem operantes. 16 HEMATOLOGIA AULAS PRÁTICAS 1- Coleta, esfregaço sanguíneo, coloração de rotina. Coleta • Antes da coleta: conferir nome, sobrenome do paciente e data de nascimento. • Identificar o tubo antes da coleta • Uso de EPI: luvas e avental Na coleta • Escolher a veia para fazer a punção • Para antissepsia do local de punção passar álcool 70% • O garrote deve ser removido antes de retirar a agulha. � Após a coleta a agulha deve ser descartada no recipiente de perfuro cortantes e deve-se aplicar pressão digital no lugar da punção. � O anticoagulante utilizado é o EDTA(quelante de ions) � O transporte da amostra deve ser a 5ºC Preparo de esfregaço sanguíneo A corante utilizados são do tipo ROMANOWSKY que é a mistura de: - Azur: cora o núcleo em azul (componente básico cora ácidos nucleicos). - Eosina: cora o citoplasma em púrpura (componente acido cora em laranja a Hb e os grânulos dos eosinófilos). 17 HEMATOLOGIA 2- hematócrito e coloração, identificação dos reticulócitos Hematócrito (ou Ht ou Htc) é a percentagem ocupada pelos glóbulos vermelhos ou hemácias no volume total de sangue. TÉCNICA DO MICROHEMATÓCRITO 1- Preencher um tubo capilar com sangue até ¾ da sua altura. 2- Fechar uma das extremidades na chama . 3- Colocar o capilar em uma centrífuga apropriada (centrífuga própria para microhematócrito - figura 2) por 5 minutos em 10000 a 12000 rpm. Identificação de reticulócitos – são hemácias imaturas Hemácia a esquerda e reticulócito a direita. Câmera de Neubauer Quadrantes A ate D utilizados para contagem de leucócitos. Quadrante E – hemácias e plaquetas. MÉTODOS • Fazer a diluição de 20microlitros de amostra em 400microlitros de solução turk (ácido acético 10% + corante azul), aguardar por 3 minutos. • Umedecer levemente as laterais da câmara de Neubauer • Colocar a lamínula, tomando cuidado para não sujar, pois prejudica a leitura. Com um capilar colocar cuidadosamente a amostra diluída.
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