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ECOLOGIA MICROBIANA Fatores Intrínsecos e Extrínsecos que determinam o crescimento microbiano nos alimentos e água Nutrição e Farmácia Prof. MSc. Marcus Covre 1 Introdução O crescimento de microorganismos nos alimentos depende de fatores que estão relacionados com as características próprias do alimento e do ambiente. Fatores intrínsecos, relacionados ao alimento; Fatores extrínsecos, relacionados às condições ambientais. Fatores intrínsecos •Água; •Nutrientes; •Acidez; •Condições naturais Fatores extrínsecos •Umidade; •Temperatura; •Composição gasosa da atmosfera. 2 Fatores Intrínsecos Atividade de água (Aa); Funções vitais. Acidez (pH); Os extremos de pH são seletivos. Potencial de oxi-redução (Eh); Capacidade de obtenção de energia – aeróbia e anaeróbia. Composição química (nutrientes); Fonte de energia e nutrientes para o crescimento. Substâncias antimicrobianas naturais; Fatores de defesa dos vegetais. Competição com a flora natural. Fatores que fazem parte do alimento. 3 Fatores Intrínsecos Atividade de água (Aa) Todo organismo necessita de água para sua sobrevivência. As atividades vitais dependem de água na forma disponível (não associada a macromoléculas, na forma de vapor). Cada alimento (origem vegetal ou animal, e processados) apresenta uma Aa, que favorece a colonização de determinados microrganismos. > > > A a A a A a 4 Fatores Intrínsecos Atividade de água (Aa) Máximo de crescimento microbiano, Aa próximo de 1,00. Os valores variam de 0 a 1 (água pura 1,00). As bactérias requerem mais Aa do que os fungos. S. aureus tolera altas concentrações de sais e baixa Aa (0,86). A adição de sais, de açúcar e outros solutos provoca a redução do valor de Aa. A redução da Aa dos alimentos dificulta o crescimento microbiano, aumentando a vida de prateleira. NaCl a 22% Solução saturada NaCl Aa =0,86 Aa =0,75 > Aa Carne fresca (Aa > 0,95) Carne curada (Aa = 0,87) 5 Fatores Intrínsecos 6 Atividade de água (Aa) Microrganismos resistentes a baixa Aa: Microrganismos osmofílicos: precisam de ambientes com baixa Aa (alimentos açucarados); Microrganismos halofílicos: necessitam de ambientes com elevada concentração salina. Microrganismos xerofílicos: possuem afinidade a ambientes secos. Fatores Intrínsecos Alimento Aa Frutas frescas e vegetais >0,97 Carnes frescas >0,95 Ovos 0,97 Queijos 0,91 a 1,00 Carnes curadas 0,87 a 0,95 Nozes 0,66 a 0,84 Farinha de trigo 0,67 a 0,87 Mel 0,54 a 0,75 Cereais 0,10 a 0,20 Açúcar 0,10 Microrganismo Aa Bactérias deteriorantes >0,90 Levedura deteriorante 0,88 Bolor deteriorante 0,80 Clostridium botulinum 0,97 Pseudomonas spp. 0,97 E.coli 0,96 Vibrio spp. 0,94 S. aureus 0,86 Aspergillus echinulatus 0,64 Xeromyces bisporus 0,61 Aa de alguns alimentos e Aa mínima para o desenvolvimento de microrganismos 7 Fatores Intrínsecos Acidez (pH) pH 6,5 a 7,5, favorável para a maioria dos microrganismos. Bolores e leveduras toleram pH mais ácido. O pH interfere principalmente na respiração dos microrganismos, agindo sobre as enzimas (desnaturação) e no transporte de nutrientes na membrana. Carnes de animais fatigados deteriora-se mais rápido do que carnes de animais descansados (pH mais baixo devido a conversão do glicogênio em ácido lático). Alguns microrganismos são capazes de modificar o pH do meio para que consiga se desenvolver. 8 Fatores Intrínsecos Acidez (pH) Microrganismo pH Bacillus subtilis 6,8 a 7,2 Clostridium botulinum 6,0 a 8,0 E.coli 6,0 a 8,0 Lactobacillus spp. 5,5 a 6,0 Pseudomonas spp. 6,6 a 7,0 Salmonella spp. 6,0 a 7,5 S. aureus 6,0 a 7,0 Leveduras S. cerevisiae 4,0 a 5,0 Bolores Aspergillus niger 3,0 a 6,0 Mucor spp. 3,0 a 6,1 Microrganism o 9 Fatores Intrínsecos Potencial Oxi-redução (Eh) Respiração aeróbia → Presença de O2 → Eh positivo. Respiração anaeróbia → Ausência de O2 → Eh negativo. 10 • O processo de oxidação e redução estão relacionados com a troca de elétrons durante as reações químicas na respiração celular e obtenção de energia (aerobiose ou anaerobiose). • O oxigênio é o fator que mais contribui para aumento do potencial redox. Fatores Intrínsecos Potencial Oxi-redução (Eh) A medição é expressa em volts (V) ou milivolts (mV). Microganismos aeróbios → Eh positivo Pseudomonas, Bacillus, Acinetobacter, Micrococcus, bolores e leveduras oxidativas. Microrganismos anaeróbios → Eh negativo (Clostridium). Microrganismos aeróbios e anaeróbios facultativos → Eh + ou – (Leveduras fermentativas, S. aureus e enterobactérias: E.coli, Salmonella). Eh entre +300 a +400 mV. Frutas e carne moída. Eh entre -20 a -200 mV. Carnes e queijos em peças 11 Fatores Intrínsecos Composição química Alimentos = fonte de nutrientes. Principais nutrientes: água, fonte de energia, fonte de nitrogênio, vitaminas e sais minerais. Fonte de energia: carboidratos, aminoácidos e lipídios. Fonte de nitrogênio: aminoácidos na forma livre ou em proteínas. Vitaminas (coenzimas de várias reações metabólicas). Minerais: em quantidades reduzidas, são indispensáveis para a multiplicação, e estão envolvidas em diversas reações enzimáticas (sódio, potássio, cálcio, magnésio, ferro, cobre, manganês, fósforo, enxofre ,etc). 12 Fatores Intrínsecos Fatores antimicrobianos Substâncias naturalmente presentes nos alimentos. Retarda ou impede a multiplicação microbiana. Exemplos: Condimentos que apresentam óleos essenciais (cravo - com eugenol (fenol); alho (alicina); canela (aldeído cinâmico); mostarda e orégano (timol e isotimol) com atividade bacteriostática (Listeria monocytogenes). Clara de ovo, rica em lisozima (muramidase), enzima capaz de destruir a parede celular de bactérias gram positivas; Leite, rico em lisozima, lactenina (sistema lactoperoxidase – enzima catalítica do tiocianeto e H2O2) que apresenta fator anti- coliformes, anticorpos, macrófagos e linfócitos mantém a estabilidade microbiana do produto nas 2 primeiras horas depois da ordenha. Frutas e outros vegetais contêm ácidos orgânicos e óleos essenciais importantes na inibição da multiplicação microbiana (amora – ácido bezóico contra fungos). Barreiras mecânicas: casca de nozes, das frutas e dos ovos, pele dos animais e a película que envolvem as sementes. 13 Fatores Intrínsecos Fatores antimicrobianos Ovos 14 Fatores Intrínsecos Microbiota do alimentos Determinados microrganismos produzem metabólitos que podem inibir a multiplicação de outros microrganismos. Bactérias láticas acidificam o meio impedindo o crescimento de outras bactérias. Streptococcus e lactobacilos produzem peróxido de hidrogênio (H2O2) que é inibidor para Pseudomonas spp., Bacillus spp. e Proteus spp. Ou podem produzir metabólitos que podem ser essenciais ao desenvolvimento de outros microrganismos. Pseudomonas aeruginosa produz vitaminas (vit. B1) e aminoácidos (triptofano), que são essenciais para o S. aureus. 15 Fatores Intrínsecos Microbiota do alimentos Bacitracinas, produzidas por algumas bactérias. Capacidade de degradarproteínas vitais, DNA e RNA, inibição de síntese de proteínas, de DNA, de RNA e de peptidoglicano. 16 Fatores extrínsecos Condições ambientais que interferem no desenvolvimento de microrganismos. Temperatura ambiental Umidade Composição gasosa Fatores relacionados aos processos de conservação dos alimentos. 17 Fatores extrínsecos Temperatura ambiental Um dos fatores mais importante que afeta a multiplicação microbiana. Influência na atividade enzimática (velocidade das reações). Multiplicação em faixas amplas (-35ºC a 90ºC). Psicrotróficos (0ºC a 7ºC, máx. cresc. 20 a 30ºC) – Pseudomonas, Lactobacillus; Psicrófilos (0º a 20ºC, máx. cresc.10ºC a 15ºC) - Enterobacter, Yersinia; Mesófilos (25ºC a 40ºC, máx. cresc. 35ºC) – maioria dos patógenos; Termófilos (45ºC a 65ºC) – Clostridium, Bacillus. Os fungos são capazes de crescer em faixa de temperatura mais ampla. 18 Fatores extrínsecos 19 Temperatura ambiental Fatores extrínsecos Umidade relativa do ambiente (UR) Existe uma correlação entre a atividade de água (Aa) de um alimento e a umidade relativa do ambiente. Alimentos conservados em ambiente com UR superior à Aa tenderão a absorver umidade do ambiente, causando um aumento em sua Aa. Os alimentos perderão água se a umidade ambiental for inferior à sua Aa. O binômio UR/temperatura não pode ser desprezado, sendo que, no geral, quanto mais elevada a temperatura de estocagem, menor deverá ser a UR, sendo o inverso verdadeiro. 20 Fatores extrínsecos Composição gasosa do ambiente Pode determinar os tipos de microrganismos que poderão predominar. Presença de oxigênio → microrganismos aeróbios. Ausência de oxigênio → microrganismos anaeróbios. “Atmosfera modificada” = ambiente nos quais o oxigênio é total ou parcialmente substituído por outros gases para aumentar a vida útil dos alimentos (recursos tecnológicos). Gases utilizados: CO2, CO, N2, óxido nitroso, ozônio (03) e dióxido de enxofre. Ex.: Atmosfera com 10% de CO2 ou ozônio, utilizada para conservação de frutas (ação de competição com o etileno produzido pelas frutas e retardo do crescimento de fungos filamentosos). 21 Fatores extrínsecos “Conceito das Múltiplas Barreiras” ou “Obstáculos de Leistner” Combinação de fatores intrínsecos e extrínsecos. Geralmente, para a conservação dos alimentos, adota-se o conjunto de barreiras. Os obstáculos normalmente considerados na conservação dos alimentos, são: temperatura (elevada ou baixa), atividade de água (Aa), pH (acidificação), potencial redox, conservantes (nitritos, sorbatos e sulfitos), atmosfera modificada e microrganismos competitivos (bactérias lácticas e produtos de seu metabolismo). Ex.: Inibição de crescimento de Clostridium botulinum – pH menor que 4,6; Aa menor que 0,94; 10 % de NaCl; temperatura menor que 10ºC; 120ppm de NaNO2; e presença de biota aeróbia. 22 Fatores extrínsecos “Obstáculos de Leistner” http://www.ebah.com.br/content/ABAAAA06sAC/obstaculos- leistner-aplicados-na-fabricacao-pao-forma 23 Atividade Leitura do artigo “Fatores limitantes à proliferação de microrganismos em alimentos”. http://www.signuseditora.com.br/BA/pdf/09/09% 20-%20Higiene.pdf 24
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