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Cromatografia InstrumentalCromatografia Instrumental Alexandre SchulerAlexandre Schuler Departamento de Engenharia Química Universidade Federal de Pernambuco Nona Aula Sistemas de Detecção em HPLCSistemas de Detecção em HPLC Cromatógrafo a Cromatógrafo a Líquido Líquido -- (HPLC(HPLC)) DETECTORES EMPREGADOS EMDETECTORES EMPREGADOS EM CROMATÓGRAFOS A LÍQUIDOCROMATÓGRAFOS A LÍQUIDO � detector de Índice de Refração (DIR) � detector de Ultravioleta-Visível (DUV-VIS) � detector de Fluorescência (DF)� detector de Fluorescência (DF) � detector de Íons (DI) � detector Eletroquímico (DE) � detector por Espalhamento da Luz (ELSD) Detector de Índice de Refração Tipo Deflexão Detector de Índice de Refração Tipo Fresnel Detector UV – Vis/Fluorescência Fonte de radiação: lâmpada de Hg ou D2 Detector por Espalhamento de Luz (ELSD) Fundamento: Efeito Tyndall ELSD = Evaporative Light Scattering Detector Propriedades dos Detectores As propriedades mais importantes dos detectores são: • Faixa de Linearidade; • Resposta;• Resposta; • Limite de Detecção e de Quantificação. FAIXA DE LINEARIDADE FAIXA DE LINEARIDADE 6,0x102 8,0x102 Á r e a d o p i c o 0 500 1000 1500 2000 0,0 2,0x102 4,0x102 r = 0,99996 Á r e a d o p i c o Concentração (mg/L) Faixa de LinearidadeFaixa de Linearidade Determinação do Limite SuperiorDeterminação do Limite SuperiorDeterminação do Limite SuperiorDeterminação do Limite Superior Procedimento:Procedimento: �� Preparar várias soluções do analito e interesse, com concentrações Preparar várias soluções do analito e interesse, com concentrações variando desde o Limite de Detecção (ou próximo dele) até um variando desde o Limite de Detecção (ou próximo dele) até um valor acima das concentração máxima de interesse.valor acima das concentração máxima de interesse. �� Injetar cada solução em replicata (ver: Número Ideal de Injetar cada solução em replicata (ver: Número Ideal de Repetições).Repetições). �� Construir um gráfico de dispersão Área X Concentração e calcular o Construir um gráfico de dispersão Área X Concentração e calcular o coeficiente e correlação (r)coeficiente e correlação (r).. �� Se o valor de Se o valor de rr encontrado for inferior a 0,999 (r mínimo), eliminar o encontrado for inferior a 0,999 (r mínimo), eliminar o último ponto (concentração mais alta) e recalcular o último ponto (concentração mais alta) e recalcular o rr.. �� Repetir a operação acima, removendo sucessivamente os pontos Repetir a operação acima, removendo sucessivamente os pontos mais altos, até conseguir r mais altos, até conseguir r ≥≥ 0,999.0,999. Exemplo:Exemplo: PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea 11 0,010,01 1,72051,7205 22 0,020,02 3,31453,3145 33 0,050,05 8,83308,8330 44 0,100,10 18,02518,025 55 0,200,20 36,90936,90955 0,200,20 36,90936,909 66 0,500,50 86,40586,405 77 1,001,00 166,87166,87 88 2,002,00 316,13316,13 99 5,005,00 701,16701,16 1010 10,0010,00 1229,81229,8 1111 20,0020,00 2025,22025,2 1500 2000 2500 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a 0 5 10 15 20 25 0 500 1000 r = 0,99287 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a Concentração (mg/L) Removendo o ponto 11:Removendo o ponto 11: PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea 11 0,010,01 1,72051,7205 22 0,020,02 3,31453,3145 33 0,050,05 8,83308,8330 44 0,100,10 18,02518,025 55 0,200,20 36,90936,90955 0,200,20 36,90936,909 66 0,500,50 86,40586,405 77 1,001,00 166,87166,87 88 2,002,00 316,13316,13 99 5,005,00 701,16701,16 1010 10,0010,00 1229,81229,8 1000 1500 2000 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a 0 5 10 -500 0 500 r = 0,99706 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a Concentração (mg/L) PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea 11 0,010,01 1,72051,7205 22 0,020,02 3,31453,3145 33 0,050,05 8,83308,8330 44 0,100,10 18,02518,025 Removendo o ponto 10:Removendo o ponto 10: 44 0,100,10 18,02518,025 55 0,200,20 36,90936,909 66 0,500,50 86,40586,405 77 1,001,00 166,87166,87 88 2,002,00 316,13316,13 99 5,005,00 701,16701,16 500 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a 0 5 0 r = 0,99843 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a Concentração (mg/L) PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea 11 0,010,01 1,72051,7205 22 0,020,02 3,31453,3145 33 0,050,05 8,83308,8330 Removendo o ponto 9:Removendo o ponto 9: 33 0,050,05 8,83308,8330 44 0,100,10 18,02518,025 55 0,200,20 36,90936,909 66 0,500,50 86,40586,405 77 1,001,00 166,87166,87 88 2,002,00 316,13316,13 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 0 r = 0,99949 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a Concentração (mg/L) PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea 11 0,010,01 1,72051,7205 22 0,020,02 3,31453,3145 33 0,050,05 8,83308,8330 Removendo o ponto 8:Removendo o ponto 8: 33 0,050,05 8,83308,8330 44 0,100,10 18,02518,025 55 0,200,20 36,90936,909 66 0,500,50 86,40586,405 77 1,001,00 166,87166,87 150 200 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a 0,0 0,5 1,0 0 50 100 r = 0,9997 Á r e a C r o m a t o g r á f i c a Concentração (mg/L) RESPOSTA Fator de Resposta Os números em vermelho são áreas relativas. Em preto, as concentrações reais. Nível de Ruído Nível de Ruído Limite de Detecção Limite de Quantificação Erro pré-estabelecido LD = 2.hr.Cp / hp Influência do ruído sobre o LD. LD baixo Ruído grande Ruído pequeno Fim da Nona Aula LD baixoLD alto
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