Aula 9 (Sistemas de detecção em HPLC)
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Aula 9 (Sistemas de detecção em HPLC)


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Cromatografia InstrumentalCromatografia Instrumental
Alexandre SchulerAlexandre Schuler
Departamento de Engenharia Química
Universidade Federal de Pernambuco
Nona Aula
Sistemas de Detecção em HPLCSistemas de Detecção em HPLC
Cromatógrafo a Cromatógrafo a Líquido Líquido -- (HPLC(HPLC))
DETECTORES EMPREGADOS EMDETECTORES EMPREGADOS EM
CROMATÓGRAFOS A LÍQUIDOCROMATÓGRAFOS A LÍQUIDO
\ufffd detector de Índice de Refração (DIR)
\ufffd detector de Ultravioleta-Visível (DUV-VIS)
\ufffd detector de Fluorescência (DF)\ufffd detector de Fluorescência (DF)
\ufffd detector de Íons (DI)
\ufffd detector Eletroquímico (DE)
\ufffd detector por Espalhamento da Luz (ELSD)
Detector de Índice de Refração
Tipo Deflexão
Detector de Índice de Refração
Tipo Fresnel
Detector UV \u2013 Vis/Fluorescência
Fonte de radiação: lâmpada de Hg ou D2
Detector por Espalhamento de Luz (ELSD)
Fundamento: Efeito Tyndall
ELSD = Evaporative Light Scattering Detector
Propriedades dos Detectores
As propriedades mais importantes dos detectores são:
\u2022 Faixa de Linearidade;
\u2022 Resposta;\u2022 Resposta;
\u2022 Limite de Detecção e de Quantificação.
FAIXA DE LINEARIDADE
FAIXA DE LINEARIDADE
6,0x102
8,0x102
Á
r
e
a
 
d
o
 
p
i
c
o
0 500 1000 1500 2000
0,0
2,0x102
4,0x102
r = 0,99996
Á
r
e
a
 
d
o
 
p
i
c
o
Concentração (mg/L)
Faixa de LinearidadeFaixa de Linearidade
Determinação do Limite SuperiorDeterminação do Limite SuperiorDeterminação do Limite SuperiorDeterminação do Limite Superior
Procedimento:Procedimento:
\ufffd\ufffd Preparar várias soluções do analito e interesse, com concentrações Preparar várias soluções do analito e interesse, com concentrações 
variando desde o Limite de Detecção (ou próximo dele) até um variando desde o Limite de Detecção (ou próximo dele) até um 
valor acima das concentração máxima de interesse.valor acima das concentração máxima de interesse.
\ufffd\ufffd Injetar cada solução em replicata (ver: Número Ideal de Injetar cada solução em replicata (ver: Número Ideal de 
Repetições).Repetições).
\ufffd\ufffd Construir um gráfico de dispersão Área X Concentração e calcular o Construir um gráfico de dispersão Área X Concentração e calcular o 
coeficiente e correlação (r)coeficiente e correlação (r)..
\ufffd\ufffd Se o valor de Se o valor de rr encontrado for inferior a 0,999 (r mínimo), eliminar o encontrado for inferior a 0,999 (r mínimo), eliminar o 
último ponto (concentração mais alta) e recalcular o último ponto (concentração mais alta) e recalcular o rr..
\ufffd\ufffd Repetir a operação acima, removendo sucessivamente os pontos Repetir a operação acima, removendo sucessivamente os pontos 
mais altos, até conseguir r mais altos, até conseguir r \u2265\u2265 0,999.0,999.
Exemplo:Exemplo:
PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea
11 0,010,01 1,72051,7205
22 0,020,02 3,31453,3145
33 0,050,05 8,83308,8330
44 0,100,10 18,02518,025
55 0,200,20 36,90936,90955 0,200,20 36,90936,909
66 0,500,50 86,40586,405
77 1,001,00 166,87166,87
88 2,002,00 316,13316,13
99 5,005,00 701,16701,16
1010 10,0010,00 1229,81229,8
1111 20,0020,00 2025,22025,2
1500
2000
2500
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
0 5 10 15 20 25
0
500
1000 r = 0,99287
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
Concentração (mg/L)
Removendo o ponto 11:Removendo o ponto 11:
PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea
11 0,010,01 1,72051,7205
22 0,020,02 3,31453,3145
33 0,050,05 8,83308,8330
44 0,100,10 18,02518,025
55 0,200,20 36,90936,90955 0,200,20 36,90936,909
66 0,500,50 86,40586,405
77 1,001,00 166,87166,87
88 2,002,00 316,13316,13
99 5,005,00 701,16701,16
1010 10,0010,00 1229,81229,8
1000
1500
2000
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
0 5 10
-500
0
500 r = 0,99706
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
Concentração (mg/L)
PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea
11 0,010,01 1,72051,7205
22 0,020,02 3,31453,3145
33 0,050,05 8,83308,8330
44 0,100,10 18,02518,025
Removendo o ponto 10:Removendo o ponto 10:
44 0,100,10 18,02518,025
55 0,200,20 36,90936,909
66 0,500,50 86,40586,405
77 1,001,00 166,87166,87
88 2,002,00 316,13316,13
99 5,005,00 701,16701,16
500
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
0 5
0
r = 0,99843
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
Concentração (mg/L)
PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea
11 0,010,01 1,72051,7205
22 0,020,02 3,31453,3145
33 0,050,05 8,83308,8330
Removendo o ponto 9:Removendo o ponto 9:
33 0,050,05 8,83308,8330
44 0,100,10 18,02518,025
55 0,200,20 36,90936,909
66 0,500,50 86,40586,405
77 1,001,00 166,87166,87
88 2,002,00 316,13316,13
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5
0
r = 0,99949
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
Concentração (mg/L)
PontoPonto Conc (mg/L)Conc (mg/L) ÁreaÁrea
11 0,010,01 1,72051,7205
22 0,020,02 3,31453,3145
33 0,050,05 8,83308,8330
Removendo o ponto 8:Removendo o ponto 8:
33 0,050,05 8,83308,8330
44 0,100,10 18,02518,025
55 0,200,20 36,90936,909
66 0,500,50 86,40586,405
77 1,001,00 166,87166,87
150
200
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
0,0 0,5 1,0
0
50
100
r = 0,9997
Á
r
e
a
 
C
r
o
m
a
t
o
g
r
á
f
i
c
a
Concentração (mg/L)
RESPOSTA
Fator de Resposta
Os números em 
vermelho são 
áreas relativas. 
Em preto, as 
concentrações 
reais.
Nível de Ruído
Nível de Ruído
Limite de Detecção
Limite de Quantificação
Erro pré-estabelecido
LD = 2.hr.Cp / hp
Influência do ruído 
sobre o LD.
LD baixo
Ruído 
grande
Ruído 
pequeno
Fim da Nona Aula
LD baixoLD alto