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Ana Beatriz Graça Duarte Disciplina Biologia Celular 1 2 O fluxo da informação genética do DNA ao RNA (transcrição) e do RNA À proteína (tradução) ocorre em todas as células vivas RNA Ácido ribonucléico ▪ Polímero linear 4 subunidades ▪ Ligação fosfodiéster Difere DNA: Açúcar Ribose Base nitrogenada ▪ Adenina ▪ Guanina ▪ Citosina ▪ Uracila forma pares com A 3 Estrutura Química do RNA O açúcar é a ribose A base nitrogenada Uracila entra no lugar da Timina A ligação fosfodiéster entre os nucleotídeos é a mesma 4 Complementaridade de bases semelhante ao DNA G com C A com U RNA fita simples Dobram-se sobre elas mesmas Formam estruturas tridimensionais Funções estruturais e catalíticas 5 Segmentos que formam pareamento com sequencias complementares na mesma molécula Pareamentos convencionais e não convencionais 6 Processo de síntese do RNA A partir do DNA ▪ Similar à replicação do DNA Início abertura da dupla hélice DNA 1 fita servirá como molde Adição de ribonucleotídeos 7 Fita molde Transcrição 8 RNA não permanece ligados por pontes H Moléculas curtas a partir de pequenos segmentos DNA Cromossomo humano ~250 milhões pb RNA milhares de nucleotídeos ou menos 9 RNA polimerases Abertura dupla hélice DNA ▪ Exposição da fita molde Catalisa ligação fosfodiéster Direção 5´-3´ Ribonucleosídeos trifosfato ▪ ATP, GTP, CTP, UTP ▪ Ligações alta energia pra reação 10 11 12 O DNA é transcrito pela RNA polimerase que se move sobre o DNA desenrolando a hélice e adicionando nucleotídeos usando a fita DNA como molde Diferenças replicação X transcrição Substratos são ribonucleosídeos ▪ Reação fosfodiéster é a mesma Síntese da cadeia RNA no início ▪ Não requer sequência iniciadora Taxa de erro RNA polimerase ▪ Consequência erros são menos graves 13 14 GENES: segmentos DNA que codificam sequencias de aminoácidos e moléculas de RNA RNAs: Funções estruturais, catalíticas e tradução de proteínas RNA mensageiro (mRNA) transcrevem a informação do gene RNA ribossomal (rRNA) compõem os ribossomos RNA transportador (tRNA) adaptadores selecionam aminoácidos na síntese proteica Micro RNA (miRNA) controle expressão gênica em eucariotos 15 16 Início em procariotos Promotor sequencia específica nucleotídeos qe indica início ▪ RNA polimerase se liga fortemente ▪ Abertura dupla hélice a frente promotor ▪ Pareamento de bases com a fita molde DNA Terminador ou sítio de parada ▪ RNA polimerase se libera do DNA molde e da fita recém sintetizada 17 Subunidade sigma Reconhecimento da sequência promotora do DNA Liberação do fator Após início da síntese Garante que apenas a região gênica será transcrita 18 19 RNA polimerases I, II e III Transcrição de diferentes genes RNA polimerase I e III tRNA, rRNA e RNAs catalíticos RNA polimerase II Transcreve maioria genes eucariotos Presença de proteínas acessórias no início Complexidade 100.000 pb entre genes Sequencias regulatórias 20 21 Vários fatores de transcrição participam do início O Fator de transcrição TFIID se liga a TATA box e sinaliza agregação de outras proteínas acessórias no promotor 22 O TATA BOX é um componente do promotor situado a distancia de 25 nucleotídeos antes do sítio de início. Outros fatores formam um complexo de iniciação com a RNA polimerase e só inicia a transcrição quando é liberada desses fatores. Síntese do mRNA núcleo Processamento antes de ir ao citoplasma 2 etapas de processamento no núcleo ▪ Identificação do mRNA ▪ Mensagem completa 1) modificação da extremidade 5´ ▪ Adição de metil guanosina (G + CH3) 2) Poliadenilação da extremidade 3´ ▪ Cauda poli-A ▪ Estabilização da molécula durante exportação ▪ Identificação como RNAm completo 23 24 Modificações das moléculas de mRNA. Adição de um quepe na extremidade 5´e adição de uma cauda poli-A na extremidade 3´. Os quepes possuem metilação em uma hidroxila da ribose Éxons Porções esparsas de sequencias expressas Juntos formam pequena porção do comprimento total do gene Íntrons Sequencias curtas não codificadoras alternadas A maioria dos genes apresenta íntrons, nem todos Remoção dos íntrons Processamento complexo além do capeamento e poliadenilação 26 Genes bacterianos consistem em uma sequencia expressa não interrompida que codifica a sequencia de aminoácidos das proteínas As sequencias codificadoras da maioria dos genes em eucariotos são interrompidas por sequencias não codificadoras, os íntrons Gene da -globina que codifica uma das subunidades da hemoglobina, contém 3 éxons Fator de coagulação sanguínea VIII (fator VIII) contém 26 éxons. Splicing de RNA Remoção dos íntrons União dos éxons Intróns ▪ Sequencias nucleotídicas curtas nos limites dos íntrons direcionam a remoção Molécula de RNA funcional Modificações de splicing + extremidades 5´(quepe) e 3´ (poliadenilação) 29 Sequencias especiais de nucleotídeos sinalizam o início e o final de um íntron Essas sequências são reconhecidas por ribonucleoproteínas nucleares (snRNPs) que clivam o RNA entre os íntrons e éxons Um íntron forma uma estrutura ramificada durante o splicing A Adenina (A) ataca o sítio (local) de splicing e corta a ligação açucar fosfato do RNA A extremidade cortada do íntron se liga covalentemente a ribose do A formando uma estrutura ramificada A extremidade 3´-OH livre reage com o éxon seguinte Várias formas de processamento por splicing 1 gene Diferentes proteínas produzidas Genes humanos 60% realizam splicing alternativo potencial de codificação do genoma Evolução dos genes Modificação de proteínas novas e adaptadas 32 A tropomiosina regula a contração em células musculares e seu transcrito primário sofre splicing em diferentes formas Em eucariotos a molécula de RNA produzida contém exóns e íntrons. Suas 2 extremidades são modificadas e os íntrons são removidos enzimaticamente pelo complexo spliceossomo (snRNP) e o mRNA é transportado para citoplasma
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