MUCOSA ORAL

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Introdução 
A observação do material exige a aplicação de diversas técnicas que permitem uma melhor visualização dos seus componentes. Hans Christian Gram, um bacteriologista dinamarquês, estudou e definiu a técnica para corar bactérias, a coloração Gram, em 1884.
A coloração é uma técnica importante em microscopia, pois permite evidenciar estruturas celulares pouco perceptíveis, existem as técnicas de coloração das bactérias que são as gram vermelhas (negativas), apresentam uma parede estratificada constituída por uma membrana externa e por uma camada mais interna que contém peptidoglicano e que é mais fina que a do Gram-positivo. Deste modo, o precipitado insolúvel, que se forma por ação do mordente, é removido (camada de peptidoglicano é mais fina que a do Gram-positivo e a membrana externa são parcial ou totalmente solubilizadas pelo agente descolorante), pelo que as células ficam descoloradas, corando de vermelho pelo contrastante ela tem uma camada espessa de peptidoglicano que é o local em que o corante se fixa. E existem as gram roxa (positiva), apresentam uma parede espessa, homogênea, geralmente não estratificada e predominantemente constituída por peptidoglicano. Deste modo, o precipitado insolúvel que se forma por ação do mordente,  fica retido no interior da célula pela camada espessa de peptidoglicano, logo, estas células não são descoradas permanecendo com a coloração conferida pelo corante primário  contem uma fina camada de peptidoglicano, isto dependerá da parede celular da bactéria. Se for estruturalmente simples a coloração será positiva, se for estruturalmente complexa a coloração será então negativa.
Esta coloração permite distinguir os mais variados tipos de bactérias e que tipo de parede celular elas tem (se mais simples ou mais complexas, com mais ou menos peptideoglicanos – principal componente da parede celular bacteriana). As bactérias que descorarem quando submetidas a um solvente orgânico são Gram-negativas, e as que permanecerem coradas mesmo quando em contato com o solvente são denominadas Gram-positivas.
Esta bactéria de diferentes colorações tem também graus diferentes de virulência. As Gram-negativas, por exemplo, são constituídas por uma endotoxina denominada LPS (lipopolissacarídeo), que é causadora da patogenicidade. Já as Gram-positivas possuem a exotoxina rica em ácido lipoprotéico que confere aderência à bactéria.
Existe um protocolo que se segue usualmente para fazer a coração de um esfregaço, com etapas bem definidas e com misturas de substâncias (solução de cristal violeta; solução de lugol (iodeto de potássio - KI); solução de safranina e solução de álcool) que resultarão na coloração positiva ou negativa.
Objetivo
- Observar como as células eucariontes e procariontes se comportam em relação à coloração de Gram;
- Conhecer a morfologia dos procariotos;
Material
- Espátula de madeira;
- Lamina e lamínula;
- Cristal violeta;
- Lugol;
-Fucsina;
- Álcool;
Procedimentos:
1- Depois de realizado o bochecho, retiraou células da mucosa bucal raspando-a com uma espátula de madeira;
2- Apoiou-se o palito contendo o material colhido sobre uma lamina de microscopia;
3-Deslizou-se o palito sobre a lamina, de maneira que o material seja deixado na porção central da mesma, preparando-se assim um esfregaço;
4-Deixou secar (balançou a lamina no ar para secar mais rápido);
5-Procedeu à coloração, adotando os seguintes passos:
a. Corou com cristal violeta2 gotas por 1 minuto;em seguida lavou com água;
b. Corou com lugol 2 gotas por 1 minuto;em seguida lavou com água;
c. Acrescentou-se álcool 2 gotas por 30 segundos;em seguida lavou com água;
d. Corou com fucsina2 gotas por 1 minuto;em seguida lavou com água;
6- Colocou a lamínula e levou ao microscópio para observação;
7- Esquematizou os desenhos nos aumentos de 100x, 400x e 1000x;
Resultados
 
 Aumento de 100x Aumento de 400x
 
 Aumento de 1000x
Ao microscópio, as bactérias Gram-positivas aparecem coradas em violeta escuro e as Gram-negativas em vermelho ou rosa escuro.
Discussão
1- Pela classificação de Gram, quais tipos de células foram observados?
Pode-ser observado às células eucariontes e procariontes,células eucariontes se coram como bactérias Gram negativas.
2- Qual a diferença observada entre as células Gram-positivas e Gram-negativas após a aplicação da bateria de corantes?
 A coloração ficou diferente, pois umas ficaram Gram-positivas (roxa) e as Gram negativas (vermelha)
3- A que se deve a diferença entre os dois tipos de bactérias coradas pelo método de Gram?
 A camada de peptidoglicano é maior em bactérias Gram positivas que e de coloração roxa, as gram negativas, por sua vez possuem pouco peptidoglicano e são coradas pelo vermelho de fucsina.
4-Qual a função de cada corante e do álcool na técnica de coloração de Gram?
Corante primário – cristal de violeta : cora o citoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula. Mordente – solução de iodo: aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da célula.  Agente descolorante – álcool, acetona ou ambos: solvente lipídico. Contrastante – safranina ou fucsina básica: cora o citoplasma de vermelho.  
5- Qual a importância pratica de classificar as bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas?
Esta coloração e importante, pois permite distinguir os mais variados tipos de bactérias e que tipo de parede celular elas tem (se mais simples ou mais complexas, com mais ou menos peptideoglicanos – principal componente da parede celular bacteriana) e classificação de diagnostico de doenças bacterianas.
6- Como e feito e qual o objetivo do esfregaço?
Desliza o palito sobre a lamina, de maneira que o material seja deixado na porção central da mesma, preparando-se assim um esfregaço; o objetivo e de que é possível a análise de vários esfregaços por lâmina, o que facilita a comparação de espécimes clínicos.
7- Justifique por que ocorre a diferenciação de coloração entre as duas células: bacteriana positiva e eucarionte da mucosa bucal. 
Pela fixação que é a coagulação do protoplasma bacteriano com o mínimo de deformação e sua colagem à lâmina. Como exemplos de agentes fixadores têm o calor, o formol e o éter. Na gram positiva a coloração de ser roxo e devido à camada de peptideoglicano e ao corante lugol no eucarionte da mucosa bucal o mesmo são que é mais concentrada.
8-Ao se observar uma célula eucarionte animal, por que as bactérias gram-negativas (após a coloração de Gram) não as se mostram tão evidenciadas/distintas quanto às bactérias gram-positivas?
Isto se deve a coloração, pois o lugol cora as bactérias de roxo, a fucsina cora as demais de vermelho sendo assim as bactérias Gram negativas ficam em maior destaque.
Conclusão
Levando-se em conta o que foi observado se conclui que a célula da mucosa bucal é de fácil observação de sua estrutura o núcleo,citoplasma e bacterias, que a utilização de corantes é essencial para definir quais os tipos de gram existente na célula e obter a identificação de quais são as diferenças da positiva e negativa, com isto tornando o experimento de fácil visualização na microscopia óptica.
Referências
Acessado em: http://www.infoescola.com/microbiologia/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas/, no dia 17 de maio de 2015; 
Acessado em: http://www.prof2000.pt/users/biologia/tcolgram.htm no dia 18 de maio de 2015;
Acessado em: http://www.provida.ind.br/site/index.php/bacterias/bacterias/122-tecnica-de-gram.html no dia 18 de maio de 2015;