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Profa DSc. Denise Fernandes denise.fernandes@ifc.edu.br Biotecnologia Vegetal Embriogênese Somática Vegetal in vitro ✓ É o processo de formação do embrião ✓ Início do desenvolvimento vegetal ✓ Processo de divisão e diferenciação celular, que ocorre no rudimento seminal e semente imatura, e estabelece os padrões básicos de desenvolvimento da planta adulta: o padrão radial de tecidos, o eixo apical- basal e os meristemas primários Tipos: ❖ Zigótica (União do gameta com a oosfera - zigoto) ❖ Somática (Células somáticas sob condições especiais) Embrião Células somáticas Células sexuais Zigoto Embrião Células somáticas Células sexuais Zigoto Inicialmente não há separação diferencial (Sistema de desenvolvimento aberto / pós-embrionário) As células são precocemente separadas e definidas (Sistema de desenvolvimento fechado / pré-embrionário) Fases da embriogênese zigótica Angiospermas HISTODIFERENCIAÇÃO MATURAÇÃO Fases da embriogênese zigótica Angiospermas x Gimnospermas ESTÁDIOS DE DESENVOLVIMENTO 1) GLOBULAR 2) CORDIFORME 3) TORPEDO 4) COTILEDONAR EMBRIOGÊNESE MONOCOTILEDÔNEA DICOTILEDÔNEA GIMNOSPERMA Nos animais a embriogênese e organogênese ocorrem simultaneamente, nas plantas esses dois processos são separados temporalmente Plantas e animais possuem diferenças quanto ao tipo de desenvolvimento 1) Embriogênese: formação de um eixo polar contendo dois meristemas 2) Organogênese: atividade dos meristemas formando órgãos ao longo do ciclo de vida zigoto - O primeiro plano de divisão do zigoto é sempre assimétrico - Ocorre em ângulo reto ao eixo longitudinal - O zigoto torna-se polarizado e se alonga antes de sofrer a sua primeira divisão celular Célula apical Célula basal Divisões transversais e longitudinais Divisões transversais suspensor protoderme pericarpo tegumento ápice radicular procâmbio meristema fundamental cotilédone protoderme ápice caulinar A formação do embrião apresenta uma certa DIFERENCIAÇÃO das suas células A embriogênese estabelece somente um eixo rudimentar da planta, com meristemas APICAIS RADICULAR e CAULINAR COIFA P R O C Â M B I O P R O T O D E R M E M E R I S T E M A F U N D A M E N T A L G E M A A X I L A R P R I M Ó R D I O F O L I A R PROCÂMBIO PROTODERME (A) Embrião de uma célula após a primeira divisão do zigoto, formando as células apical e basal; (B) embrião de duas células; (C) embrião de oito células; (D) estádio globular, que desenvolveu uma protoderme distinta; (E) estádio cordiforme inicial; (F) estádio cordiforme tardio; (G) estádio torpedo; (H) embrião maduro. Célula menor, recebe mais citoplasma e herda o grande vacúolo zigótico. Sofrem duas divisões verticais e uma horizontal originando o embrião globular de oito células. Célula maior, todas as divisões são horizontais originando o suspensor de 6-9 células CÉLULA APICAL CÉLULA BASAL A organização apical-basal de tecidos e órgãos vegetais é estabelecida bem cedo na embriogênese. Órgãos da plântula inicial originam-se de regiões específicas do embrião (Arabidopsis). Região apical – origina os cotilédones e meristema apical caulinar Região mediana – origina o hipocotólito, raiz e parte do meristema radicular Hipófise – origina o restante do meriste- ma radicular Já é possível reconhecer três regiões axiais!!! ❖ CONCEITO GERAL: “Análogo à embriogênese zigótica, no qual uma célula isolada ou um pequeno grupo de células somáticas são os precursores da formação de embriões somáticos” (Tautorus et al., 1991) Embriogênese somática Embriogênese Somática in vitro O mesmo padrão de divisões é realizado in vitro Diferentes estádios de diferenciação ocorrem ao mesmo tempo in vitro Embriogênese somática a = Globular b = Cordiforme c = Torpedo Os reguladores de crescimento vegetais, notadamente auxina e citocininas, controlam esses três processos 1) Expansão: auxina 2) Divisão: auxina e citocininas 3) Diferenciação: expressão seletiva de genes induzidos ou reprimidos por auxina e citocininas CONTROLE DO DESENVOLVIMENTO Indução de Embriogênese Vegetal in vitro Anther Developing pollen grains Haploid somatic embryo Roots Callus Single cells Callus Shoot tip Seed Diploid somatic embryo Protoplasts Shoots Fonte de explantes para induções embriogênicas Embriogênese somática - Aplicações ➢PROPAGAÇÃO DE ESPÉCIES RECALCITRANTES ➢ PRODUÇÃO DE MUDAS (reflorestamento,áreas degradadas, programas de utilização e reposição de espécies nativas) ➢ MELHORAMENTO GENÉTICO (transformação genética, conservação de germoplasma) MICROPROPAGAÇÃO EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA DIRETA INDIRETA Calo Vias de diferenciação do material em cultura Embriogênese ❖ INDIRETA ❖ DIRETA EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA INDIRETA Souza et al., 2007 (Solanum melongena L.) Embriogênese direta Explante original Embriogênese somática direta EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA INDIRETA algodão Alamo cacto samambaia soja castanha Cheng & Chang, 2006. Biol. Plantarum 50 (2): 169-173 Phalaenopsis amabilis Embriogênese (soja) Indução Proliferação Desenvolvimento Germinação Aclimatação sementes imaturas (explante) Araucaria angustifolia Proc. 0403333-1 Ocotea catharinensis MODULAÇÃO DA EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA fase de multiplicação A explante PLANTA MATRIZ 2,4-D escuro indução da competência/ determinação multiplicação cultura embriogênica fase de maturação B inibição da multiplicação Promotores - ABA - poliaminas - citocininas - PEG maturação dos embriões somáticos estabelecimento ex vitro 2,4-D Steiner & Guerra, 2006 EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE GENES ➢)Proteômica comparativa (estádios embriogênese somática) Ocotea catharinensis (embriogênese zigótica) Expressão diferencial de proteínas (número de polipeptídeos Dias,L.C. et al. (2007) Proteínas não identificadas madurotorpedo Proteína de reserva Vicilina LEA (late embryogenesis abundant) ➢ Araucaria angustifolia (embriogênese zigótica) ❖ Marcadores dos diferentes estádios da embriogênese ✓Araucaria angustifolia Análises bioquímicas ✓Ocotea catharinensis Globular Cotiledonar inicial Cotiledonar Maduro Globular Pré-cotiledonar Cotiledonar MaduroPró-embrião RELEMBRANDO !!!! ➢ Vegetais possuem desenvolvimento aberto; ➢ Divisão assimétrica no embrião estabelece o eixo apical-basal; ➢Meristemas caulinar e radicular das plântulas originam os demais estruturas das plantas adultas; ➢ O desenvolvimento é sustentado pelo crescimento, diferenciação e morfogênese ➢ A diferenciação é influenciada por três fatores: genético, características originadas durante a ontogênese e características cuja expressão depende apenas do ambiente ou meio de cultivo ➢ Cultura de tecidos vegetais se baseia na totipotencialidade vegetal e possibilita gerar embriões somáticos