Desnaturação de proteínas, ponto isoelétrico e efeito da adição de sais em proteínas

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Data: 30/03/2015 Bioquímica Fundamenta e Experimental 21015NI_1 
Desnaturação de proteínas e pI, e efeito da adição de sais em proteínas. 
 
Alunos: Daniele De Anhaia Mikovski; Letícia Malinoski; Paulo Alexandre Silveira Da 
Silva. 
 
OBJETIVOS 
 
 Avaliar, por meio de reações químicas e físicas, a desnaturação proteica, 
ponto isoelétrico de proteínas, e as reações presentes em uma solução 
proteica com a adição de sais. 
 
METODOLOGIA 
 
A aula prática realizada pretende demonstrar como variados tipos de reação 
podem alterar visualmente a aparência de uma solução contendo proteínas em 
diferentes estados: diluída a uma concentração de 10%, e precipitada. Foram 
utilizadas reações físicas, com o aumento da temperatura da solução com o auxílio 
de um Banho Maria; e também reações químicas, que fizeram uso de sais, ácidos e 
soluções orgânicas para avaliar as possíveis mudanças em proteínas. 
 
MATERIAIS E MÉTODOS 
 
Materiais; 
 Proteína 10%; 
 TCA 10%; 
 ETOH; 
 Proteína Precipitada; 
 NaCl 1 mol/L; 
 Solução saturada de Sulfato de Amônio; 
 Banho Maria; 
 Água destilada; 
 Tubos de Ensaio 
 
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Métodos; 
1) Desnaturação em alta temperatura: Em um tubo de ensaio, adicionou-se 2 mL 
de proteína 10%, e o tubo foi deixado em aquecimento no Banho Maria por 10 
minutos. Passado o tempo, observou-se o ocorrido; 
2) Desnaturação com um ácido forte: Em outro tubo de ensaio, foi adicionado 1 
mL da proteína 10% com mais 1 mL de TCA 10%. O ocorrido foi observado e 
anotado. 
3) Desnaturação com solvente orgânico: Em um tubo de ensaio adicionou-se 1 
mL da proteína 10% com mais 3 mL da solução ETOH. A reação ocorrida foi 
observada e anotada. 
4) Efeito da adição de NaCl: Adicionou-se 2 mL da solução contendo a proteína 
precipitada em um tubo de ensaio, e, de gota em gota, foi adicionado também 
o NaCl 1 mol/L, até o precipitado estar totalmente dissolvido. Anotou-se a 
quantidade necessária de gotas para o ocorrido. 
5) Efeito da adição da solução saturada de Sulfato de Amônio: Em um tubo de 
ensaio foi adicionado 2 mL da proteína precipitada com mais 4 mL da solução 
de Sulfato de Amônio. Observou-se o resultado. Após o ocorrido, foram 
adicionados mais 4 mL de água destilada, e a reação ocorrida foi observada e 
anotada. 
 
RESULTADOS 
 
Desnaturação em alta temperatura; 
Depois do tempo necessário, notou-se que a solução que continha a 
proteína 10% ficou turva. 
 
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Desnaturação com um ácido forte e Desnaturação com solvente orgânico; 
Ambos os experimentos tiveram o mesmo resultado aparente; as soluções, 
que anteriormente somente com a proteína 10% eram translúcidas, depois de 
adicionados os seus devidos reagentes, apresentaram uma aparência esbraquiçada. 
 
 
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Efeito da adição de NaCl; 
Foram necessárias 25 gotas da solução de NaCl 1 mol/L para que a proteína 
precipitada pudesse ser diluída. 
 
 
 
Efeito da adição da solução saturada de Sulfato de Amônio 
Depois de adicionada a solução de Sulfato de Amônio, a solução que, 
anteriormente, somente apresentava visualmente o precipitado da proteína, ficou 
completamente esbranquiçada. Ao ser adicionada a água, notou-se a decantação da 
proteína presente na solução. 
 
DISCUSSÃO 
 
Desnaturação em alta temperatura 
 
O motivo que se pode dar a reação observada, da aparência 
"esbranquiçada" da solução, é o fato da alta temperatura em que a proteína foi 
imposta fez com o mesmo se desnaturasse, ou seja, que a mesma fosse danificada 
pelo calor e que perdesse toda a sua função. 
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Desnaturação com um ácido forte e Desnaturação com solvente orgânico; 
 
Ao fazer com que a solução proteica entrasse em contato com os reagentes 
propostos, fez com que a proteína fosse submetida a uma situação extrema, ou seja, 
uma situação que a mesma não pode manter suas funções normais, fazendo assim, 
com que a proteína acabe se desnaturando. 
 
Efeito da adição de NaCl; 
 
Foi necessária uma quantidade relativamente grande de NaCl para que 
fosse possível diluir completamente a solução de proteína precipitada. Isso se deve 
ao fato de, quando adicionado sal a uma solução proteica, a interação entre as 
moléculas precipitadas da proteínas diminuam, aumentando a solubilidade da 
solução. 
 
Efeito da adição da solução saturada de Sulfato de Amônio 
 
O mesmo observado no experimento anterior pode ser utilizado para se 
explicar o motivo da solução ter apresentado um carater esbranquiçado; houve um 
diluição da proteína precipitada. Mas, ao ser adicionada a água, o sal que estava 
ligado a proteína não se dilui, ao menos tão facilmente, ao ambiente aquoso, sendo 
assim, decantando nesse meio, levando com ele o precipitado de proteína. 
 
CONCLUSÃO 
 
Pode-se concluir que, apesar de serem moléculas de extrema importância 
para a vida, as proteínas são facilmente desnaturadas, fazendo assim que se tornem 
inutilizáveis. A partir de tais experimentos é possível entender mais sobre como o 
mecanismo proteico presente em nosso organismo atua, e como evitar a perda 
dessas moléculas.