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Estudo Dirigido de Microbiologia Geral
Áreas voltadas ao estudo da microbiologia
Médica: mais desenvolvida, a cada dia novas técnicas e aparelhos tentam identificar novos microrganismos e muitos conceitos se modificam.
Alimentos: produção de alimentos, bem como desenvolver-se neles, produzindo substancias indesejáveis como as toxinas.
Industrial: produção de medicamentos. 
Água/ ar: muitos microrganismos podem ser veiculados através das águas superficiais, principalmente contaminadas por matéria orgânica. 
Solo: manutenção da ecologia, estudando a atuação dos microrganismos na natureza, que podem auxiliar na fertilidade do solo. 
Guerra: onde a utilização de microrganismos e/ou suas toxinas são destinadas para a destruição em massa de pop.
Espacial: visa a detecção de microrganismos em outros mundos e testar os conhecidos em ambientes livres de gravidade.
Qual a importância de Robert Hooke e Antony van Leeuwenhoek para a microbiologia?
 Leeuwenhoek – criador do microscópio visualizando seres jamais vistos antes.	 
Robert hooke - criou o microoscopio composto, com lentes e objetivas.	
Desenvolveram microscópios que possibilitaram as primeiras observações de bactérias e outros microrganismos a partir da análise de diversos espécimes biológicos.	
Defina os termos:	
“Contagium” – significa algo que está no doente e que transmite para alguém sadio.	
“Miasma” – algo presente no ambiente que é transmitido para alguém sadio.	 
“Malária” – representa ambiente de “mau ar”
“Influenza” – ambientes que influenciavam levando a quadros característicos como os da gripe
“Contagium per contactum per formitem et ad distans” - pode ocorrer contaminação pelo contato direto com o doente, pelo uso de utensílios do doente ou mesmo a distância.
Explique a teoria da geração espontânea.
Que os microrganismos poderiam surgir do nada como o que ocorria com infusos de carnes expostos ao ambiente.	
Compare as técnicas utilizadas por Spallanzani (1776) e por Pasteur (1861) para confrontar a teoria espontânea.
Spallanzani ferveu o caldo de carne por muito tempo e colocou em vidrarias tampadas por algodão. Teoria questionada pois afirmava-se que o algodão não permitia a passagem do oxigênio, sendo assim não surgia vida. Pasteur ferveu o caldo de carne e depois com auxilio do fogo dobrou o bico do vidro, o que impedia a passagem dos microrganismos e permitia a passagem do oxigênio
Qual a proposta de Whittaker para a classificação dos seres vivos? Explique. Ele propôs a criação dos 5 reinos tendo como base a evolução: o reino primitivo seria o reino monera, que por evolução de seus constituintes (Bactéria) passariam ao reino protista, constituído pelos protozoários. Caso esses por evolução fizessem fotossintese passariam ao reino plantae; se fizessem absorção de alimentos através de membranas, passariam ao reino fungi, e se fizessem ingestão passariam ao reino animalia.
Qual a proposta de Carl Woese para a classificação dos seres vivos? Explique.
Criação dos 3 domínios ao invés dos 5 reinos, baseado na menor subunidade do ribossomo rRNA. Eubacteria (bactéria), arqueobacteria (bactérias de ambientes extremos) e eucarya (animais, plantas e fungos).
Diferencie Eucarióticos de Procarióticos.
Seres procarióticos não possuem membrana nuclear, não possuem organelas revestidas por membrana, parede celular geralmente presente incluindo Peptídeoglicana, sem mitocôndria e divisão celular por fissão binária.
Seres eucarióticos o núcleo é limitado por membrana nuclear, possuem organelas revestidas por membranas, quando tem parede celular é simples, apresentam mitocôndria e divisão celular por mitose.
 
BACTÉRIAS
Quais são e como se organizam os diferentes tipos morfológicos bacterianos à microscopia? 
Podem ser cocos ou bacilos. Os cocos que são formados por elementos circulares que, dependendo da divisão, podem ser: diplococos(2), tétrades(4), sarcina(8), estreptococos(vários cocos alinhados) e estafilococos( conjunto de cocos reunidos). Os bacilos semelhantes a um bastão, podem ser bastonetes, vibriões(assemelham-se a vírgula), espirilos(corpo ondulado, rígido e se movimentam por flagelos) ou espiroquetas(corpo espiral flácido movimentando-se por contração de um filamento interno).
Função e composição da membrana.
Função mais importante, servir como uma barreira seletiva da qual os materiais entram e saem da célula, produção de energia e digestão de nutrientes. Sua composição é lipoproteica (fosfolipídeos e proteínas), ela faz um enovelado chamado Mesossomo, que está relacionado com a divisão celular e transporte de informações do material genético.
Diferencie a parede celular das bactérias gram-positivas das gram-negativas.
Parede celular : proteger conteúdo interno, dar forma a bactéria o que ajuda na regulação da entrada e saída de substâncias. Uma célula gram-positiva sem parede é denominada protoplasto e a gram-negativa esferoplasto.
A parede celular das bactérias gram-positivas é uma camada espessa de peptideoglicano (dissacarídeo NAM e NAG, ligadas por polipeptídeos) entremeado por ácido teicóico (formado de alcool e fosfato, proteger da lise, e devido sua carga negativa auxilia na entrada e saída de cátions). Já as bactérias gram-negativas é uma camada fina de peptideoglicano em uma zona periplasmática (enzimas de degradação e proteínas de transporte), membrana externa formada por lipopolissacarídeos, lipídeos e lipoproteínas (função auxiliar na evasão da fagocitose e outros mecanismos de defesa do hospedeiro).
Qual a função e os arranjos básicos dos flagelos bacterianos.
Os flagelos tem por função realizar a movimentação das bactérias, constituído de corpo basal, gancho (alça) e filamento. Estrutura: proteína flagelina.
Composição do citoplasma.
80% de água contendo proteínas, carboidratos, lipídeos, íons inorgânicos. Espesso, principais estruturas: DNA, ribossomos e inclusões (deposito de nutrientes que são utilizados quando há deficiência nutricional no meio em que estão).
Tipos de inclusões.
Grânulos Metacromáticos: reserva de fosfato inôrganico, que podem ser usados na síntese de ATP.
Grânulos Polissacarídicos: composto de glicogênio e amido.
Lipídicos: armazena o ácido poli-beta-hidroxibutírico.
Grânulo de Enxofre: obtém energia oxidando o enxofre.
Carboxissomos: contém a enzima ribulose que fixa o dióxido de carbono durante a fotossíntese.
Vacúolos de gás: mantém a flutuação para que as células possam permanecer na profundidade de água, para que recebam quantidades suficientes de O2, luz e nutrientes.
O que é e qual a importância dos plasmídeos?
Elemento genético extracromossomos, que não são cruciais para a sobrevivência da bactéria em condições ambientais normais, mas conferem resistência a elas.
Explique o processo de formação do endosporo.
A formação do endosporo começa quando um nutriente chave torna-se indisponível. No primeiro momento o septo do esporo começa a isolar o DNA recém replicado e uma pequena porção do citoplasma. A membrana plasmática começa a circundar o DNA, citoplasma e o septo do esporo circunda a porção isolada formando um pré-esporo. A camada de peptídeoglicana se forma entre as membranas e forma-se também o revestimento do esporo, que logo após é liberado da célula. 
- Adendo : resistente ao calor, pois ele é desidratado.
- Adento 2: Forma de resistência dos gêneros Clostridium e Bacillus.
Quais as formas dos endosporos?
Central redondo, central oval, subterminal, clostrideo.
Extruturas externas da parede celular:
Glicocálice: composta de polissacarídeos extra celular, polipeptídeo ou ambos, que permite a fixação da bactéria a várias superfícies. 
Filamentos axiais: presente nas espiroquetas, são feixes de fibrilas que se originam nas extremidades das células, sob uma bainha externa e fazem espiral em torno da célula.
Fímbria: permite a célula aderir a superfícies incluindo a de outras células
Pili: proteína pilina, com função de fixação e preparação para a transferência de DNA de uma célula para outra.FUNGOS 
Cite os aspectos das colônias de fungos unicelulares e pluricelulares.
Colônias de fungos pluricelulares ou filamentosos são descritos como estruturas vegetativas, porque são compostas de células que estão envolvidas no catabolismo e no crescimento, tem característica algodonosas, aveludada e pulverulenta. As colônias de fungos unicelulares ou leveduras tem características cremosas ou cerebriforme ou mucoide.
Qual a importância e como são classificadas as hifas?
As hifas fixam o fungo ao substrato, retiram dele nutrientes e, das hifas geralmente se desenvolvem estruturas de reprodução e resistência. Hifa Vegetativa a porção que obtém nutrientes e Hifa Reprodutiva a porção envolvida na reprodução e resistência. Podem ser septadas (as dividem em unidades uninucleadas) ou não septadas/cenocítica (células longas e com muitos núcleos).
Adendo: Quando em condições favoráveis as hifas crescem e formam uma massa filamentosa, chamada Micélio.
Descreve a constituição celular da hifa.
 É constituída por membrana e citoplasma.
Quais os tipos de esporos assexuais que são reproduzidos por mitose?
Conídio: uni ou multicelular, não é fechado por uma bolsa.Ex.: Aspergillus.
Artroconídio: formado pela fragmentação de uma hifa septada em células únicas, pequenas e levemente espessas. Ex.: Coccidioides immitis.
Blastoconídio: um broto originado de uma célula parental. Ex.: Cryptococcus.
Clamidósporo: formado por um arredondamento e um arredondamento no interior em um segmento de hifa.Ex.: C. albicans.
Esporangiósporos: formado dentro de um esporângio, na extremidade de uma hifa aérea.Ex.: Rhizopus.
Esquematize e denomine a composição da estrutura de reprodução (anamorfa) do Aspergillus spp, Penicillium e Rhizopus.
Aspergillus spp.: Hifa septada, célula basal, estípede, vesícula, métula, fiálide, conídios.
Penicillium: estípede, ramo, fiálide, conídio.
Rhizopus: rizóide, esporangióforo, columela, esporo.
Diferencie a conidiogênese blástica de conidiogênese tálica.
Conidiogênese são as estruturas produtoras de conídios (reprodução anamorfa). Na Conidiogênese Tálica a própria hifa delimita uma área transformando em conídio. Na Blástica, a produção de um brotamento que dará origem ao conídio.
O que é clamidoconídeo?
É a forma de resistência do fungo.
Diferencie a reprodução anamorfa dos fungos unicelulares (Leveduras) por brotamento e por fissão. 
Brotamento: Divide-se formando células desiguais. A célula parental forma um broto na surperfície.
Fissão: Divide-se formando duas novas células iguais. As células parentais se alongam, seus núcleos se dividem, e duas células filhas são produzidas.
VÍRUS
Características gerais dos vírus.
Os vírus são parasitas intracelulares obrigatórios. Fora das células hospedeiras são inertes e quando as penetram, o ácido nucleico viral torna-se ativo, ocorrendo a multiplicação viral. Eles possuem um único tipo de ácido nucleico, DNA ou RNA. Introduzem a síntese de estruturas especializadas capazes de transferir o ácido nucleico viral para as outras células.
Adendo: DNA ou RNA, envolvido por uma cobertura proteica formada por capsídios,formada por capsômeros. O capsídio é coberto por uma envelope que consiste de uma combinação de lipídios e carboidratos. Esse envelope contém proteínas codificadas pelo genoma viral junto com material derivado da célula hospedeira, que podem apresentar estípulas ou não.
Ciclo reprodutivo viral.
1° adsorção: fago adere a célula hospedeira.
2° penetração: parte do fago penetra na célula hospedeira, e injeta o seu DNA.
3° biossíntese: o DNA do fago conduz a síntese de componentes virais pela célula hospedeira.
4° maturação: os componentes virais são montados formando virions (vírus complexos e funcionais, que podem infectar - associar a uma célula) 
5° liberação: célula hospedeira sofre a lise liberando novos virions.
Quais são os processos de obtenção de energia utilizados pelos microrganismos? 
Catabolismo (processos de degradação dos nutrientes) e anabolismo (Biossíntese de biomoléculas).
Esquematize a curva de crescimento microbiano e identifique suas fases.
Lag fase - fase de adaptação, para que o microrganismo reconheçam os constituintes e as condições do meio.
Fase logarítmica – multiplicação.
Estacionária – o numero de microrganismos que surgem é igual aos que morrem. 
Morte – com o fim dos nutrientes e de fatores favoráveis os microrganismos morrem.
Adendo: É possível manter as bactérias no crescimento exponencial com o auxilio de um equipamento que faz a renovação do meio de cultura.
Descreva o método de contagem de células viáveis e compare com o método de contagem direta (contagem total). 
9 TUBOS DE ENSAIO CONTENDO MEIO DE CULTIVO SÓLIDO.
9 TUBOS DE ENSAIO CONTENDO EXATOS 9 mL DE SOLUÇÃO SALINA EM CADA
1º - FUNDIR OS MEIOS DE CULTIVO QUE ESTÃO NOS TUBOS E MANTER A 50º C ATÉ O MOMENTO DA REALIZAÇÃO DO TESTE 
2º - REALIZAR AS DILUIÇÕES ATÉ 10 -9	
3º - TRANSFERIR 1 mL ou 0,1 mL DE CADA DILUIÇÃO PARA PLACAS DE PETRI VAZIAS E ESTERILIZADAS, ANOTANDO AS RESPECTIVAS DILUIÇÕES	
4º - VERTER O MEIO DE CULTIVO PREVIAMENTE FUNDIDO PARA CADA PLACA DE PETRI
5º - IMEDIATAMENTE APÓS O PREENCHIMENTO DAS PLACAS COM O MEIO DE CULTIVO, REALIZAR MOVIMENTOS “EM OITO” COM CADA PLACA, EM UMA SUPERFÍCIE PLANA E INCUBAR
6º - AGUARDAR O SURGIMENTO DE COLÔNIAS, REALIZAR A CONTAGEM E EFETUAR O CÁLCULO
Esse método de contagem de células viáveis baseia-se no fato de que somente bactérias viáveis podem formar colônias e, portanto, apresenta grande vantagem de contar somente os microrganismos unicelulares com capacidade de se multiplicarem.
CONTAGEM DIRETA 
utiliza câmaras de contagem que determina também o número de bactérias unicelulares em um determinado meio. Neste é contado tanto microrganismos viáveis como os inviáveis. 
Descreva o método de determinação de peso seco para avaliação do crescimento microbiano.
Peso de um material completamente destituído de água. Quando se obtém um valor constante, depois de pesagens frequentes, pode-se dizer que obtivemos o peso seco. 
Desvantagem: limitada sensibilidade dos métodos gravimétricos e a determinação do crescimento somente por amostragem por um total de cultivos.
Explique o método de turbidimetria. 
Quando microrganismos unicelulares encontram-se dispersos em um meio líquido, o mesmo torna-se turvo proporcional ao n° de indivíduos. Quando acabamos de preparar um meio com um caldo simples, verificamos que o mesmo apresenta uma aparência límpida. Se inocularmos uma bactéria compatível com os nutrientes apresentados pelo mesmo, verificaremos que a pop. irá aumentar e ao mesmo tempo turvando o meio. As partículas representadas pelas bactérias diminuem a passagem da luz.
Desvantagem: acuidade visual de casa um e considera tanto células viáveis como inviáveis. 
O que é a escala de Mc Farland?
utiliza-se tubos de Mc Farland como um padrão de turbidez em seus determinados graus e compara-se para saber o nível de turbidez e consequentemente o número aproximado de bactérias. A escala de Mc Farland é constituída por uma série de 10 ampolas de vidro, no interior das quais existe H2SO4, H2O destilada e cloreto de bário, que contem concentrações diferentes. Quando a escala encontra-se em repouso, o cloreto de bário encontra-se precipitado nos fundos das ampolas, ficando em suspensão sempre que as ampolas são agitadas manualmente. Quando isso ocorre cada ampola simula a turbidez de uma cultura bacteriana. Deste modo, quando queremos estimar o número de bactérias presentes em uma suspensão, podemos comparar com os tubos da escala e verificarmos com qual grau mais se aproxima. A cada tubo corresponde um numero de microrganismos unicelulares. 
Desvantagens: acuidade visual de cada um, e considera tanto células viáveis como inviáveis.
Método de determinação dos constituintes essenciais (C e N)
Coloca a cultura no meio isento de C e N e verifica a quantidade inicial desses elementos. E em intervalos preestabelecidos, se houver aumento deC e N, pode-se pressupor que houve crescimento microbiano.
Método de determinação da Atividade Catalítica
Relaciona-se a medida do aumento nas quantidades de determinadas enzimas ou na medida das taxas de um processo metabólico com uma respiração ou fermentação.
Desvantagem: necessidade de grande quantidade de células para que se consiga determinar a presença enzimática.
Qual a importância da avaliação do controle físico-químico do crescimento microbiano?
Aprender mais sobre as condições de crescimento microbiano, e assim saber como combatê-los e/ou cultiva-los adequadamente para determinados fins, que seja relativamente inócuo para o homem.
Quais os principais fatores limitantes para o crescimento microbiano? Como eles limitam esse crescimento?
Temperatura - no geral o intervalo de temperatura que os microrganismos podem crescer, varia de 16°C (mín) à 40°C (máx). Para cada microrganismo em particular esse intervalo pode variar entre -5°C à 110°C. Psicrófilos (0°/15°/20°); Psicrotolerantes (0°/20°/40°); Mesófilos (20°/40°); Termófilos (40°/60°); Hipertermófilos (60°/110°); Termodúricos: organismos que não crescem mas se mantém viáveis, após ser posto em temperatura acima da sua máxima, voltarem para sua faixa de mín- máx voltam a crescer 
pH - O ambiente interno dos microrganismos é aproximadamente neutra, porém existem aqueles que crescem preferencialmente em pH ácido (acidófilos), os que crescem pref. em pH neutro (neutrófilos) e os que crescem pref. em pH básico (basófilos). 
Oxigênio - Eles podem ser divididos em vários grupos com relação ao oxigênio: Aeróbios (crescem com presença de O2) e Anaeróbios (crescem na ausência de O2) 
Pressão osmótica - Os micro-organismos obtem a maioria dos seus nutrientes da água presente no seu meio ambiente. Pressões osmóticas elevadas tem como efeito remover a água necessária para a célula. O meio onde uma célula se encontra pode ser isotônico ( quando a concentração de soluto dentro e fora da célula são iguais), hipertônico ( a concentração de soluto externo é maior que a interna), hipotônico ( quando a concentração de soluto externa é menor que a interna). 
Como se classificam os microrganismos quanto à exigência por oxigênio? 
Aerobios estritos – so vivem na presença de oxigenio.
Anaerobios estritos – o oxigenio é toxico para esses microorganismos
 Microaerofilos – vivem na presença do oxigenio, mas em pouca quantidade
Aerobios facultativos – vivem sem o oxigenio ms na presença dele se desenvolvem melhor Anaerobios aerotolerantes – vivem na presença do oxigenio mas não fezem sua utilização
Defina:
Esterilização – destruição de todas as formas de vida microbiana, incluindo endosporo
Desinfecção – destruição de microorganismos de uma superfície inanimada 
Antissepsia – destruição de microorganismo de uma superfície viva 
Assepsia - conjunto de técnicas necessárias para não permitir a contaminação microbiana.
Diferencie microbicida de microbiostático.
o microbicida mata os microorganismos os microbiostáticos inibem os microorganismos 
Quais são as propriedades de um desinfetante ideal?
alta toxidade para os microrganismos, não toxico (relativamente) ao homem e animais, não ter odor desagradável, ser barato, estabilidade elevada.
Quais as características de um agente antimicrobiano ideal para ser utilizado in vivo? 
Toxicidade seletiva, estabilidade, vida longa em prateleira, custo razoável, não alérgico. Causa dano as proteínas, a membrana, a parede celular e a ácidos nucleicos. 
Classifique e defina os agentes antimicrobianos utilizado in vivo? 
Antibióticos: produzidos pelos microrganismos (bactérias e fungos) exibindo função de inibir ou matar outros microrganismos. Ex.: Penicilina G 
Agentes sintéticos: sintetizados em laboratório exibindo função de inibir ou matar outros microrganismos.
Ex.: Cloranfenicol 
Semi - sintéticos: Ex.: Aninopenicilina
MEIOS DE CULTURA
Classificação quanto a consistência: 
Sólido, líquido e gasoso
Classificação quanto a composição química:
Sintético: componentes e quantidades conhecidas
Complexo: contem componentes cuja composição não é precisa.
Classificação quanto a utilização:
Uso geral: permite o crescimento da maioria dos microrg. presentes na amostra
Meio de enriquecimento: favorece o crescimento de um microrg. específico através da adição de determinados compostos.
Meio seletivo: favorece o crescimento de determinados microrg. através da adição de inibidores que impedem o desenvolvimento de outros.
Diferencial: permite a distinção de microrg. através de reações ou produção de estruturas.
Processos físicos de controle microbiano
1) Calor seco
a) Flambagem: chama redutora e oxidante (passa primeiro na redutora para evitar aerossóis)
b) Forno Pasteur: preparo das vidrarias vazias e metais (180 - 200°C / 1h30min)
2) Calor úmido
a)Pasteurização: Baixa- aquecimento a 63°C/30min
		Alta- aquecimento a 72°C/25s
b) Tindalização: aquecimento a 63-80°C/ 24h por 3 dias consecutivos.
c) Água fervente: aquecimento a 100°C/ 5min
d) Autoclavagem: meios de cultura, 120°C/ 15-20min
3) Filtração: Remoção física de microorganismos, Soluções sensíveis ao calor: vitaminas, aminoácidos, antibióticos, vacinas; ar de salas assépticas ou cirúrgica.
4)Radiações: -Ionizantes (Gama e raio-x): danos ao DNA e RNA do microrg, alta penetração.
	 -Ultravioleta: poder de penetração pequena e usadas para pegar microrg no ar
Processos químicos de controle microbiano
1) Desinfetante
a) Fenóis (cresóis): Alteram a permeabilidade seletiva da membrana, desnatura e inativam proteínas.
b)Glaconato de Clorexidina: princípio ruptura da membrana plasmática, atóxico, bactericidade para Gram + e -, antesseptico bucal e para pele.
c) Halogênios (Cl e I): oxidação de compostos celulares
			Iodo- antesséptico
			Cloro- desinfecção de água
d)Metais pesados: principio desnaturação de proteínas, desnaturação enzimática.
e)Detergentes: alteração da permeabilidade da membrana.