102 ROTEIRO DILUIÇÃO SERIADA

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FACULDADE MAURÍCIO DE NASSSAU 
CURSO DE NUTRIÇÃO 
Microbiologia dos Alimentos 
 
Profª. Helena Taina Diniz Silva 
Monitor: Wagner 
 
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
AULA 2: DILUIÇÃO SERIADA 
 
1 Descrição geral 
A diluição seriada é a técnica que permite a contagem do número de micro-organismos 
de amostras com concentrações muito elevadas. Considerando-se que cada colônia de 
bactérias formada sobre um meio de cultivo se origine de uma unidade formadora de colônia 
(cadeia ou grumo de bactéria), quando a concentração de micro-organismos inoculados é 
muito grande, haverá o crescimento de colônias de maneira sobreposta impossibilitando a 
contagem. A amostra deve então ser diluída de forma seriada para que a concentração de 
microrganismos diminua, dando origem a colônias suficientemente separadas, possibilitando 
assim a contagem. Para a determinação do número de micro-organismos da amostra original 
multiplica-se o número de colônias formadas a partir da amostra diluída, pelo volume de 
diluição. Uma diluição é uma expressão de concentração, não de volume. Uma diluição indica 
a quantidade relativa de substâncias em uma solução. Quando a palavra diluição é usada, ela 
deve significar o número de partes que foram diluídas em um número total de partes. Em 
outras palavras, uma diluição deve significar o volume de concentrado no volume total da 
solução final. O menor número corresponde ao número de partes da substância que está 
sendo diluída; o maior número refere-se ao número total de partes da solução final. 
 
Considere as seguintes frases: 
 
 Faça uma diluição 1 para 10 de uma amostra de alimento em salina. 
 Faça uma diluição 1 em 10 de uma amostra de alimento em salina. 
 Faça uma diluição 1/10 de uma amostra de alimento em salina. 
 Faça uma diluição 1:10 de uma amostra de alimento em salina. 
 Faça uma diluição de 1 parte de uma amostra de alimento e 9 partes de salina. 
 Faça uma diluição de 1 parte de uma amostra de alimento para 9 partes de salina. 
 
Qual é a diferença entre essas frases? Nenhuma! Todas significam exatamente a mesma 
coisa. 
 
2 Materiais necessários 
 
Acessórios 
 Pêra 
 Suporte para os tubos 
 Bico de Bunsen 
 Alça bacteriológica 
 Caneta para CD 
 
Vidraria 
 Pipetas graduadas (1 mL) estéreis 
 Erlenmeyer com 90 mL de diluente (água peptonada) 
 Tubos com 9 ml de diluente (água peptonada) 
 
Meios de cultura 
 Água de peptona 
Equipamentos 
 Autoclave 
 Estufa de esterilização e secagem (180 ºC) 
 Balança semi-analítica 
 
3 Procedimento 
 
1º passo: Deve-se higienizar a bancada e dispor o material; 
2º passo: Codificar os frascos de diluição; 
 
3.1 Obtenção das diluições seriadas (ou decimais) 
 
1º passo: Pesar a amostra (10 g) no erlenmeyer contendo o diluente esterilizado e 
homogeneizar por 2-3 minutos, no caso de amostras sólidas. Essa suspensão corresponde à 
diluição 10-1; 
2º passo: Com auxílio de uma pipeta e uma pera, transferir 1 mL para um frasco contendo 9 
mL de diluente, obtendo-se a diluição 10-2; 
3º passo: Repetir o mesmo procedimento para obter a diluição 10-3. 
 
Amostra sólida 
 10-1 1 mL 10-2 1 mL 10-3 1 mL 10-4 ... 
 
10 g de amostra + 
90 mL diluente 9 mL 9 mL 9 mL 
 
 
 
Amostra líquida 
 
 100 1 mL 10-1 1 mL 10-2 1 mL 10-3 ... 
≈ 100 mL de amostra 
 9 mL 9 mL 9 mL 
 
 
 
 
Referências 
SILVA, N.; JUNQUEIRA, V. C. A.; SILVEIRA, N. E. A. Manual de métodos de análises 
microbiológicas de alimentos. São Paulo: Varela, 2007. 552p.