TÉCNICA HISTOLÓGICA

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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS 
 
Disciplina: Histologia e Embriologia 
Prof. Mestre: José de Jesus R. Marques 
PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS 
 EXAME “A FRESCO” 
 - Material biológico 
observado sem uso de 
substâncias que 
promovam a sua 
preservação (fixação) 
 Ex: Epiderme da cebola 
 Mucosa oral 
 Sedimento urinário 
 
PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS 
 EXAME DIRETO 
 - Material transparente, 
observado diretamente 
ao microscópio com o 
organismo intacto. 
 Ex: protozoários 
(amebas) 
 
PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS 
 EXAME INDIRETO 
 - Material biológico, 
ainda vivo,retirado do 
organismo. 
 Ex: hemácias 
 leucócitos 
 espermatozóides 
 
 
 
 
PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS 
 CULTURA DE TECIDOS 
 - Observação de células 
vivas cultivadas “in 
vitro” a partir de 
fragmentos de tecidos. 
 Ex: cultura de bactérias 
 
 
 
 
PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS 
 EXAME APÓS 
COLORAÇÃO VITAL 
 - Observação de 
células vivas, 
utilizando corantes 
diluídos que não 
interferem na vida da 
célula 
 Ex: macrófagos 
corados pelo azul de 
tripan 
 
 
 
 
 
PREPARAÇÕES MICROSCÓPICAS 
 EXAME “POST-MORTEM ” 
 - Exame realizado após a 
morte do animal – 
HISTOLOGIA. 
 - Há necessidade do 
material passar por uma 
sequência de tratamentos 
para a sua avaliação 
histológica. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 TÉCNICA HISTOLÓGICA - ETAPAS 
 COLETA 
 FIXAÇÃO 
 DESIDRATAÇÃO 
 CLAREAMENTO 
 IMPREGNAÇÃO 
 INCLUSÃO 
 MICROTOMIA 
 COLORAÇÃO 
 MONTAGEM DE LÂMINAS 
 OBSERVAÇÃO AO MICROSCÓPIO 
 
COLETA 
 É a retirada de parte do órgão a ser 
estudada, podendo ser: 
 ▪ do ser humano vivo ou morto; quando 
realizarmos uma biópsia. 
 ▪ de animais de laboratório. 
 
 OBS: em qualquer caso, a peça deve logo 
ser fixada. 
 
 
FIXAÇÃO 
 O material coletado é imerso em fixadores 
 Evita a destruição das células por suas 
próprias enzimas (autólise), ou por 
bactérias. 
 Preserva a morfologia e a composição dos 
tecido. 
 Insolubiliza as proteínas dos tecidos 
 Oferece ao material uma resistência às 
fases seguintes,pela dureza que lhe 
conferem. 
FIXAÇÃO 
 PRINCIPAIS FIXADORES 
 ▪ Formol (aldeído formico) a 10% 
 ▪ Glutaraldeído a 4% 
 ▪ líquido de “ Bouin” : formol, ácido acético 
e solução aquosa de ácido pícrico). 
 
 Duração: cerca e 12 a 24 horas, 
dependendo do fixador e do tamanho da 
peça. 
 
FIXAÇÃO 
 
 Material cortado e colocado no cassete para o processamento. 
 
 
FIXAÇÃO 
 
 
 
 
 
 
 
 Material em cassetes 
plásticos e mergulhados no 
frasco contendo formol a 
10%. 
 
 
FIXAÇÃO 
 
DESIDRATAÇÃO 
 Remover a água dos tecidos 
 Utiliza-se álcool etílico de concentrações 
crescentes( 70%, 80%, 90% e álcool 
absoluto). 
 Duração: 6 a 24 horas, dependendo do 
tamanho da peça. 
 
DESIDRATAÇÃO 
 
 
 
 
 
 
 Bateria de 
álcool para 
desidratação. 
O frasco 1 
corresponde a 
maior 
proporção 
água/álcool e o 
frasco 5 e 
menor 
proporção 
(absoluto). 
 
 
CLAREAMENTO OU 
DIAFANIZAÇÃO 
 Embeber a peça em substância miscível 
com a parafina. 
 Remover o álcool dos tecidos, permitindo a 
entrada da parafina. 
 Os tecidos tornam-se translúcidos 
 Duração: 1 a 6 horas, dependendo do 
tamanho da peça. 
 Ex: xilol, benzol 
CLAREAMENTO OU 
DIAFANIZAÇÃO 
 
 
 
 
 
 
 Bateria de 
frascos 
com xilol. 
 
IMPREGNAÇÃO 
 Parafina fundida a 60ºC. 
 Parafina penetra nos vasos,nos espaços 
intercelulares, no interior das células, 
impregnando o tecido e tornando mais fácil 
a obtenção dos cortes no micrótomo. 
 Duração: 30 minutos a 6 horas, 
dependendo do tamanho da peça. 
IMPREGNAÇÃO 
 
 
 
 
 
 
 Peças dentro de fracos de vidro 
contendo parafina no interior da 
estufa a 60ºC dentro. 
 
 
 
 
INCLUSÃO 
 A peça é colocada num molde retangular 
contendo parafina fundida. 
 Finalidade: Obtenção do bloco de parafina 
para ser cortado no micrótomo 
 
 
 
INCLUSÃO 
 
 
 
 Material já 
incluído na 
parafina. 
MICROTOMIA 
 Reduzir os tecidos 
a cortes finos (4 a 6 
µm), que após a 
sua coloração, são 
visualizados ao 
microscópio 
 Equipamento: 
micrótomo 
 
 
 
MICROTOMIA 
 
 
 
 
 
 
 Corte do bloco 
em tiras de 4 a 
6 micrômetros 
de espessura. 
MICROTOMIA 
 
 
 
 
 
 
 Cortes do 
material 
pronto 
para 
serem 
distendid
os em 
água 
aquecida. 
 
MICROTOMIA 
 
 
 
 
 
 
 
 Cortes sobre a 
água aquecida 
em "Banho 
Maria". 
MICROTOMIA 
 
 
 
 
 Corte sendo 
pescado 
sobre a lâmina 
de vidro. 
 
MICROTOMIA 
 
 
 
 
 
 Lâminas de vidro com os 
cortes já distendidos 
sobre a platina 
aquecedora. 
COLORAÇÃO 
 Para se proceder à coloração torna-se 
necessário remover a parafina e hidratar os 
cortes. 
 São usados corantes, os quais se 
comportam como ácidos ou bases. 
 Corante Básico ou Catiônico: possui carga 
elétrica positiva. Ex: HEMATOXILINA 
 Corante Ácido ou Aniônico: possui carga 
elétrica negativa. Ex: EOSINA 
COLORAÇÃO 
 COLORAÇÃO: Processa-se através dos seguintes 
passos: 
 – Desparafinar em xilol durante 10 min. 
 – Hidratar em álcool. 
 – Imersão em álcool absoluto.(3x) 
 – Lavar a lâmina em água corrente durante 3 min. 
 – Corar pela hematoxilina (corante básico) durante 
5 min. 
 – Lavar a lâmina em água corrente durante 5 min. 
 – Corar, pela eosina (corante ácido) durante 30 
segundos. 
 
 
COLORAÇÃO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Frascos de 
vidro com os 
principais 
corantes 
utilizados na 
confecção de 
lâminas 
histológicas. 
 
 
 
COLORAÇÃO 
 – Desidratar o corte em álcool 
 – Imersão em álcool absoluto 
 – Imersão em álcool absoluto 
 – Imersão em álcool absoluto 
 – Diafanização ou clareamento 
 – Imersão em xilol 
 – Imersão em xilol 
 – Imersão em xilol 
 
 
 
MONTAGEM 
 Coloca-se uma gota de resina sintética 
(Entelan®) sobre o corte ou sobre uma 
lamínula. Esta é então, colocada e 
comprimida sobre o corte, de modo a 
espalhar-se a resina em fina camada entre 
a lâmina e lamínula. 
 
 
MONTAGEM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Lâmina e lamínula ( menor) 
limpas. 
MONTAGEM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Demonstração da adição 
da resina sintética sobre a 
lâmina para a montagem. 
 
 
MICROSCÓPIO 
MICROSCÓPIO 
 1 = ocular 
 2 = objetivas e revólver 
 3 = platina 
 4 = charriot 
 5 = macrométrico 
 6 = micrométrico 
 7 = diafragma no condensador 
 8 = condensador 
 9 = botão do condensador 
10 = dois parafusos 
centralizadores do condensador 
11 = fonte de luz 
12 = controle de iluminação 
13 = diafragma de campo 
(alavanca no lado esquerdo do 
microscópio) 
14 = dois parafusos de ajuste da 
lâmpada (esquerdo e direito) 
15 = focalizadora da lâmpada 
(alavanca no lado direito do 
microscópio - não visível no 
fotografia) 
 
MICROSCÓPIO 
 
“O SENHORÉ O MEU PASTOR 
E NADA ME FALTARÁ” 
Salmo 23