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HISTOLOGIA Prof.Esp. Paulo Tadeu Silva Costa Universidade Estadual de Feira de Santana - UEFS INTRODUÇÃO 1. Conceito → estuda as células e o material extracelular que constituem os tecidos do corpo. Campos de estudo : →Histofisiologia →Histoquímica →Imuno-histoquímica →Histopatologia ►O microscópio eletrônico, a cultura de células, as técnicas de radioautografia e de imuno-histoquímica contribuíram para o crescimento dos campos de estudo. MÉTODOS DE ESTUDO →Têm por finalidade a obtenção de preparados histológicos permanentes para estudo em microscópico óptico. Procedimentos : → Fixação → Desidratação → Clareamento → Impregnação → Inclusão MÉTODOS DE ESTUDO 1. FIXAÇÃO → tratamento que tem por finalidade preservar a morfologia e a composição dos tecidos como in vivo, evitando a autólise das células e a ação das bactérias após a retirada do corpo de um animal. ►O papel dos fixadores como o formaldeído a 4% e as misturas fixadoras (líquido de Bouin, de Helly, de Zenker, etc.) é insolubilizar as proteínas dos tecidos. ►Para observação em microscopia eletrônica utiliza-se fixação dupla, primeiro solução de aldeído glutárico e, em seguida, solução de tetróxido de ósmio. ►Dura cerca de 12 horas, dependendo do fixador e do tamanho da peça. MÉTODOS DE ESTUDO 2.Desidratação → tratamento que tem por finalidade remover a água dos tecidos, pela passagem dos mesmos em banhos crescentes de etanol, começando com álcool a 70% e terminando com álcool absoluto. ►Dura de 6 a 24 horas, dependendo do tamanho da peça. MÉTODOS DE ESTUDO 3.Clareamento ou Diafanização → tratamento que tem por finalidade embeber a peça em substância miscível com a parafina,tornando-os translúcidos. ►O etanol utilizado na etapa anterior é substituído por um líquido miscível com o meio de inclusão (parafina),como o benzol ou xilol, que servem de ponte entre o álcool e a parafina. ►Dura cerca de 1 a 6 horas, dependendo do tamanho da peça. MÉTODOS DE ESTUDO 4.Impregnação → tratamento que tem por finalidade permitir a penetração de parafina nos vasos e espaços intercelulares,impregnando o tecido e facilitando a obtenção de cortes histológicos. ►A impregnação ocorre em parafina fundida em estufa a 60ºC, recomenda-se de dois a três banhos.Devido ao calor, o xilol ou o benzol evaporam, e os espaços anteriormente ocupados por eles são ocupados pela parafina. ►Dura cerca de 30 minutos a 6 horas, dependendo do tamanho da peça. MÉTODOS DE ESTUDO 5.Inclusão → procedimento que tem por finalidade obter blocos de parafina de forma regular, para ser cortado no micrótomo. ►Após a impregnação por parafina, o tecido é colocado num recipiente de forma retangular (molde) contendo parafina líquida (fundida), em seguida deixa-se solidificar à temperatura ambiente, formando um bloco de parafina com o tecido no seu interior (inclusão). ►Além da parafina, pode-se usar resinas sintéticas, para cortes mais finos (1 a 2µm),obtendo-se imagens melhores no microscópio óptico. ►Para microscopia eletrônica são necessários cortes bem mais finos(0,02 a 0,1µm),sendo os tecidos embebidos em resinas duras, e para cortá-los usam-se navalhas de vidro ou diamante MÉTODOS DE ESTUDO 6.Obtenção de cortes → procedimento que consiste em cortar os blocos de parafina obtidos na etapa anterior, através da navalha de aço do micrótomo, resultando em cortes de 6 a 8 µm de espessura. Fonte: analiticaweb.com.br MÉTODOS DE ESTUDO ►O micrótomo serve para regular a espessura do corte e orientar a marcha da lâmina cortante ou da peça, a sua navalha ou faca é a parte mais importante, pois da sua amolação e assentamento dependerá a regularidade e, em consequência, a qualidade do corte. o 6.1 Tipos de Micrótomo: ►Micrótomo “Rotatório” (cortes seriados e blocos de parafina) ►Micrótomo de Congelação (estudo de lipídios e cortes isolados) ►Criostato (obtenção de cortes sem passar pelas etapas anteriores) MÉTODOS DE ESTUDO 7.Colagem → Consiste em fazer aderir o corte à lâmina. Para isso coloca-se a lâmina em placa aquecida (40ºC). Sobre ela coloca-se uma gota de água albuminada e o corte, que se distende com o auxílio de uma agulha. Com papel de filtro absorve-se a água em excesso. Vai para a estufa a 40ºC durante 24 horas. Fonte:www.prof2000.pt/users/biologia MÉTODOS DE ESTUDO ►Celoidinização → ás vezes os cortes não ficam suficientemente aderidos às lâminas.Isso pode ser devido ao fato das lâminas não estarem suficientemente limpas e isentas de gordura, ou a própria qualidade do material em estudo, difícil de permanecer aderido, como no caso da pele. 1.Levar as lâminas com cortes até o álcool absoluto. 2.Colocar,em álcool absoluto,éter em proporções iguais,por 1’. 3.Cobrir a lâmina com celoidina a 0,5-1%,esgotar o excesso, indicando a lâmina. 4.Após a secagem da lâmina,colocá-la em álcool 70%, para endurecer a película de celoidina. 5.Lavar em água e corar normalmente. 6.Após coloração,a celoidina é removida revertendo o processo: água → álcool 70%→álcool-éter→álcool absoluto. 7.Diafanizar e montar. (Beçak,W. & Paulete,J.; 1976) MÉTODOS DE ESTUDO 8.Coloração → consiste em tingir os componentes protéicos, ou associados com proteínas das estruturas, por meio de substâncias que agem em forma análoga a um filtro de cor, deixando passar apenas as radiações luminosas de um determinado comprimento de onda.Estas substâncias são os corantes, constituídos por sais cujos catíon(corante básico),aníon(corante ácido) ou ambos são coloridos(corantes neutros). ►corantes básicos = azul-de-metileno, azul-de-toluidina, hematoxilina; corantes ácidos = eosina, orange G, fucsina ácida; corantes neutros = eosinato de azul de metileno. MÉTODOS DE ESTUDO ►As colorações usadas em Histologia podem empregar apenas um corante ou associação de vários, geralmente dois (métodos dicrômicos), eventualmente três ( métodos tricõmicos) excepcionalmente mais (policrômicos). MÉTODOS DE ESTUDO MÉTODOS DE ESTUDO 9.Montagem → procedimento que consiste em fechar o material (corte,esfregaço,etc) em uma espécie de câmara constituída pela própria lâmina que suporta o espécime e uma lamínula de vidro.Esta lamínula é colada sobre o material com o auxílio de uma resina solidificável, meio altamente refringente, que serve ao mesmo tempo para aumentar a transparência dos cortes e conservá-los. MÉTODOS DE ESTUDO 10.Microscopia → técnica de estudo que consiste em observar os cortes histológicos através de instrumentos ópticos ou eletrônicos, onde as imagens são ampliadas por um conjunto de lentes (objetivas e oculares) e transferidas por mecanismos de refração de luz (m.óptico) ou bombeamento de elétrons(m.eletrônico). MÉTODOS DE ESTUDO MÉTODOS DE ESTUDO (MICROSCOPIA ELETRÔNICA) IMAGENS DE CORTES HISTOLÓGICOS (TECIDO EPITELIAL,TEC.CONJUNTIVO,TEC.OSSEO,TEC. MUSCULAR) FONTES Beçak, Willy & Paulete, Jorge; Técnicas de Citologia e Histologia, Rio de Janeiro-RJ,Livros técnicos e científicos, 1976. Junqueira, L.C. & Carneiro, José ; Histologia Básica, Editora Guanabara Koogan S.A., RJ AGORA É SÓ PRATICAR, PORTANTO BOAS PRÁTICAS HISTOLÓGICAS!!!!!!
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