Aula 1- Histologia

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HISTOLOGIA 
Prof.Esp. Paulo Tadeu Silva Costa 
Universidade Estadual de Feira de 
Santana - UEFS 
INTRODUÇÃO 
 1. Conceito → estuda as células e o material 
extracelular que constituem os tecidos do corpo. 
 Campos de estudo : 
→Histofisiologia 
→Histoquímica 
→Imuno-histoquímica 
→Histopatologia 
►O microscópio eletrônico, a cultura de células, as técnicas 
de radioautografia e de imuno-histoquímica contribuíram 
para o crescimento dos campos de estudo. 
 
 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 →Têm por finalidade a obtenção de preparados 
histológicos permanentes para estudo em 
microscópico óptico. 
 Procedimentos : 
→ Fixação 
→ Desidratação 
→ Clareamento 
→ Impregnação 
→ Inclusão 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 1. FIXAÇÃO → tratamento que tem por 
finalidade preservar a morfologia e a composição 
dos tecidos como in vivo, evitando a autólise das 
células e a ação das bactérias após a retirada do 
corpo de um animal. 
►O papel dos fixadores como o formaldeído a 4% e as 
misturas fixadoras (líquido de Bouin, de Helly, de Zenker, 
etc.) é insolubilizar as proteínas dos tecidos. 
►Para observação em microscopia eletrônica utiliza-se 
fixação dupla, primeiro solução de aldeído glutárico e, em 
seguida, solução de tetróxido de ósmio. 
►Dura cerca de 12 horas, dependendo do fixador e do 
tamanho da peça. 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 2.Desidratação → tratamento que tem por 
finalidade remover a água dos tecidos, pela 
passagem dos mesmos em banhos crescentes de 
etanol, começando com álcool a 70% e terminando 
com álcool absoluto. 
 
►Dura de 6 a 24 horas, dependendo do tamanho da peça. 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 3.Clareamento ou Diafanização → tratamento 
que tem por finalidade embeber a peça em 
substância miscível com a parafina,tornando-os 
translúcidos. 
 
►O etanol utilizado na etapa anterior é substituído por um 
líquido miscível com o meio de inclusão (parafina),como o 
benzol ou xilol, que servem de ponte entre o álcool e a 
parafina. 
►Dura cerca de 1 a 6 horas, dependendo do tamanho da peça. 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 4.Impregnação → tratamento que tem por 
finalidade permitir a penetração de parafina nos 
vasos e espaços intercelulares,impregnando o 
tecido e facilitando a obtenção de cortes 
histológicos. 
►A impregnação ocorre em parafina fundida em estufa a 
60ºC, recomenda-se de dois a três banhos.Devido ao calor, o 
xilol ou o benzol evaporam, e os espaços anteriormente 
ocupados por eles são ocupados pela parafina. 
►Dura cerca de 30 minutos a 6 horas, dependendo do 
tamanho da peça. 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 5.Inclusão → procedimento que tem por finalidade 
obter blocos de parafina de forma regular, para 
ser cortado no micrótomo. 
►Após a impregnação por parafina, o tecido é colocado num 
recipiente de forma retangular (molde) contendo parafina 
líquida (fundida), em seguida deixa-se solidificar à 
temperatura ambiente, formando um bloco de parafina com 
o tecido no seu interior (inclusão). 
►Além da parafina, pode-se usar resinas sintéticas, para 
cortes mais finos (1 a 2µm),obtendo-se imagens melhores no 
microscópio óptico. 
►Para microscopia eletrônica são necessários cortes bem mais 
finos(0,02 a 0,1µm),sendo os tecidos embebidos em resinas 
duras, e para cortá-los usam-se navalhas de vidro ou 
diamante 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 6.Obtenção de cortes → procedimento que consiste 
em cortar os blocos de parafina obtidos na etapa 
anterior, através da navalha de aço do micrótomo, 
resultando em cortes de 6 a 8 µm de espessura. 
 
 
 
 
 
 
 
 Fonte: analiticaweb.com.br 
MÉTODOS DE ESTUDO 
►O micrótomo serve para regular a espessura do corte e 
orientar a marcha da lâmina cortante ou da peça, a sua 
navalha ou faca é a parte mais importante, pois da sua 
amolação e assentamento dependerá a regularidade e, em 
consequência, a qualidade do corte. 
o 6.1 Tipos de Micrótomo: 
 
►Micrótomo “Rotatório” (cortes seriados e blocos de parafina) 
►Micrótomo de Congelação (estudo de lipídios e cortes 
isolados) 
►Criostato (obtenção de cortes sem passar pelas etapas 
anteriores) 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 7.Colagem → Consiste em fazer aderir o corte à 
lâmina. Para isso coloca-se a lâmina em placa 
aquecida (40ºC). Sobre ela coloca-se uma gota de 
água albuminada e o corte, que se distende com o 
auxílio de uma agulha. Com papel de filtro 
absorve-se a água em excesso. Vai para a estufa a 
40ºC durante 24 horas. 
 
 
 
 
 Fonte:www.prof2000.pt/users/biologia 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
►Celoidinização → ás vezes os cortes não ficam 
suficientemente aderidos às lâminas.Isso pode ser devido ao 
fato das lâminas não estarem suficientemente limpas e 
isentas de gordura, ou a própria qualidade do material em 
estudo, difícil de permanecer aderido, como no caso da pele. 
 1.Levar as lâminas com cortes até o álcool absoluto. 
 2.Colocar,em álcool absoluto,éter em proporções iguais,por 1’. 
 3.Cobrir a lâmina com celoidina a 0,5-1%,esgotar o excesso, 
indicando a lâmina. 
 4.Após a secagem da lâmina,colocá-la em álcool 70%, para 
endurecer a película de celoidina. 
 5.Lavar em água e corar normalmente. 
 6.Após coloração,a celoidina é removida revertendo o 
processo: água → álcool 70%→álcool-éter→álcool absoluto. 
 7.Diafanizar e montar. (Beçak,W. & Paulete,J.; 1976) 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 8.Coloração → consiste em tingir os componentes 
protéicos, ou associados com proteínas das 
estruturas, por meio de substâncias que agem em 
forma análoga a um filtro de cor, deixando passar 
apenas as radiações luminosas de um 
determinado comprimento de onda.Estas 
substâncias são os corantes, constituídos por sais 
cujos catíon(corante básico),aníon(corante ácido) 
ou ambos são coloridos(corantes neutros). 
►corantes básicos = azul-de-metileno, azul-de-toluidina, 
hematoxilina; 
 corantes ácidos = eosina, orange G, fucsina ácida; 
 corantes neutros = eosinato de azul de metileno. 
MÉTODOS DE ESTUDO 
►As colorações usadas em Histologia podem empregar 
apenas um corante ou associação de vários, geralmente dois 
(métodos dicrômicos), eventualmente três ( métodos 
tricõmicos) excepcionalmente mais (policrômicos). 
 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 9.Montagem → procedimento que consiste em 
fechar o material (corte,esfregaço,etc) em uma 
espécie de câmara constituída pela própria 
lâmina que suporta o espécime e uma lamínula 
de vidro.Esta lamínula é colada sobre o material 
com o auxílio de uma resina solidificável, meio 
altamente refringente, que serve ao mesmo 
tempo para aumentar a transparência dos cortes 
e conservá-los. 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
 10.Microscopia → técnica de estudo que consiste 
em observar os cortes histológicos através de 
instrumentos ópticos ou eletrônicos, onde as 
imagens são ampliadas por um conjunto de lentes 
(objetivas e oculares) e transferidas por 
mecanismos de refração de luz (m.óptico) ou 
bombeamento de elétrons(m.eletrônico). 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
MÉTODOS DE ESTUDO (MICROSCOPIA 
ELETRÔNICA) 
IMAGENS DE CORTES HISTOLÓGICOS (TECIDO 
EPITELIAL,TEC.CONJUNTIVO,TEC.OSSEO,TEC.
MUSCULAR) 
FONTES 
 Beçak, Willy & Paulete, Jorge; Técnicas de Citologia e 
Histologia, Rio de Janeiro-RJ,Livros técnicos e científicos, 
1976. 
 Junqueira, L.C. & Carneiro, José ; Histologia Básica, 
Editora Guanabara Koogan S.A., RJ 
 
 
 
AGORA É SÓ PRATICAR, PORTANTO 
BOAS PRÁTICAS HISTOLÓGICAS!!!!!!