16.04.12 Sanidade Avícola Ferramentas de Diagnóstico

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Sanidade Avícola – Ferramentas De Diagnóstico
Paulo Henrique da Silva Barbosa
Medicina Veterinária
Diagnóstico Sorológico – ELISA
A sorologia é tanto usada para diagnóstico quanto para monitoramento de doenças. ELISA é a mais utilizada na avicultura, principalmente para monitoramento. É uma técnica muito mais sensível. Por outro lado, quanto mais sensível à técnica, tende-se a perder especificidade. Uma técnica muito sensível pode dar resultados falso positivos, o que é melhor que uma técnica muito específica e pode dar falso negativo no que diz respeito ao monitoramento de doenças, onde um falso negativo e continuar deixando animais doentes entre animais saudáveis, prejudicando a produção. 
Doença de alta taxa de impacto: Utilizar técnica de alta sensibilidade para retirar o máximo de indivíduos positivos do plantel. 
Não se faz monitoramento em frangos de corte porque eles vão viver cerca de 40 dias. 
Infecção x Reação Vacinal
Histórico de títulos vacinais (Linha de base): Saber a curva de anticorpos da granja para saber se o título de anticorpos após a vacinação atingiu o esperado ou saber, por exemplo, se a quantidade de anticorpos daquele lote é referente à vacinação ou uma infecção. Essa é uma estratégia subjetiva. 
Existem estratégias de modificar geneticamente o antígeno para que o anticorpo gerado naquela vacinação seja diferente do anticorpo formado numa infecção natural. Essa é uma estratégia cara e nem sempre o anticorpo funciona da forma que deveria. No caso da Brucelose bovina é muito eficaz. Na avicultura não há antígeno modificado geneticamente para esse fim.
É uma técnica rápida, que através do Kit de ELISA pode-se fazer cerca de 80 amostras de uma vez, além dos controles. Além disso, não é uma técnica interpretativa, dando resultados mais fidedignos que técnicas subjetivas. 
Funcionamento do Kit
Nos poços estão presentes os antígenos do vírus a ser pesquisado. Coloca-se então o soro do animal. Os anticorpos do soro se ligarão aos antígenos dos poços. Lava-se os poços para retirar outras imunoglobulinas presentes no soro da ave que não foram ligadas aos antígenos dos poços. Coloca-se um conjugado (imunoglobulina + enzima) nos poços que se ligará ao complexo antígeno-anticorpo dos poços. Coloca-se um substrato nos poços para a enzima metabolizar e os poços mudam de cor. Coloca-se uma solução stop para ter noção da quantidade indireta de anticorpos (pois amostras com menos anticorpos ligados a menos enzimas demorará mais que amostras com mais anticorpos ligados a mais enzimas para fazer a reação).
A sorologia não é uma medida de proteção, embora haja uma boa correlação entre títulos sorológicos e proteção. A presença dos anticorpos pode ser em função de uma infecção e não de uma medida de proteção. 
Objetivos Principais
Conhecer os níveis de anticorpos vacinais presentes em uma população de abes estabelecendo parâmetros de normalidade sanitária de uma empresa;
Detecção de alterações nos níveis de proteção ou presença de desafios de campo;
Conhecer os níveis de anticorpos maternos;
Detecção de doenças em uma população de aves (Vigilância epidemiológica);
Determinar a prevalência da doença;
Comprovar a eficácia das vacinações;
Interpretação dos Resultados
O coeficiente de variação (%CV) é importante ser interpretado pois se houver muita variação, ou seja, que há muita variação entre títulos de anticorpos entre aves do mesmo lote, pode refletir que houve algum erro durante o processo.
Critérios de Interpretação do (CV%) em esquema de Vacinação
Menos de 30%: Excelente
Entre 30 – 50%: Bom
Entre 51 – 80%: Razoável
Mais de 90%: Ruim
Se tiver um CV% menor que 30%, ou seja, excelente, quer dizer que a vacinação funcionou? Não necessariamente, pois todas as aves podem ter uma média de anticorpos baixa, porém homogêneas entre si, sem muita variação, o que não seria um resultado de variação eficaz.
Slides – Gráfico 3 (Típico Caso de Desafio de Campo)
Infecção maciça. Títulos de Ac muito mais altos que os normais. PROVA!!
Exemplo 4: Leve falha de vacinação. Título de Ac bom porém pouco abaixo do esperado.
Aplicações Específicas do Teste de ELISA
Avaliar Eficácia e Eficiência de Vacinações
Métodos de Vacinação
Insumos utilizados
Trabalho do pessoal
Rotas de aplicação, etc...
Determinar o período no qual est[a presente um desafio e assim poder ajustar o calendário de vacinação;
Avaliar os níveis de Ac maternos e determinar a época mais adequada de vacinação dos pintinhos (Gumboro);
Diagnóstico Microbiológico
Detecção de bactéria e fungo.
Bactérias de Importância para Aves de Produção: Escherichia coli. Salmonela, micoplasma, pasteurella e Avebacterium. (Devo ter escrito tudo errado kkkkkk)
Doenças Fúngicas de Importância Para Ave Comercial: Aspergillus. 
O simples fato de isolar uma bactéria de uma ave não quer dizer que essa bactéria esteja causando uma infecção. Deve-se identificar os fatores de virulência. Tem que saber se as bactérias estão expressando fatores que conferem patogenicidade à ave.
O isolamento em fase aguda da doença é melhor pois a carga de patógeno neste momento é maior.
Faz-se amostragem de vários locais: Penas, pulmão, ovo, ara saber se o patógeno está no ambiente.
Pode ser usado para diagnóstico e monitoramento.