AS Micobacterias

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 Pesquisa de micobactérias (cultura de BAAR, cultura de BK, cultura para tuberculose, pesquisa de micobactérias) Bacteriologia Profa. Sibele Ribeiro de Oliveira 
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Micobactérias
 Bastonetes aeróbicos, não formadores de esporos, imóveis;
 myco – semelhança com fungos (crescimento filamentoso ocasional);
 Principais características
coloração álcool-ácido resistente; resistência a drogas; alta infectividade e baixa patogenicidade
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Micobactérias
 Parede celular com uma camada de ácido micólico;
Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium leprae
 8 milhões de novos casos de tuberculose/ano;
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Micobactérias
 Podem sobreviver por semanas em escarro seco;
 A tuberculose é adquirida através da inalação do bacilo;
 São resistentes aos anti-sépticos e desinfetantes;
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Micobactérias
 Os patógenos são isolados em tubérculos, que podem se romper e seguir para vias aéreas, linfa e sistema cardiovascular;
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Micobactérias
 Não se coram bem pelo Gram mas são consideradas Gram positivas;
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Tuberculose 
 Alguns sintomas: perda de peso, tosse, escarro sanguinolento, fraqueza (tísica);
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Tuberculose
 Tratamento
1o antibiótico: estreptomicina
isoniazida
rifampicina
pirazinamida
etambutol
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Tuberculose
 Coleta do escarro
 Colher a 1a amostra matinal em frasco estéril de boca larga com tampa de rosca, encaminhar em até 12hs;
Escarro, lavado broncoalveolar, lavado brônquico, urina, líquor, aspirado gástrico, fragmentos de tecido, biópsias, sangue, fezes.
 Obter 2 a 3 amostras em dias consecutivos ou alternados;
 Podemos pesquisar micobactérias em:
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Baciloscopia
 Coloração para BAAR
 Preparação da lâmina:
 1-numerar o corpo do pote, nunca a tampa;
 2-numerar a lâmina;
 3-escolher as partes mais densas e estender até o final da lâmina;
 4-deixar secar e fixar três vezes no fogo.
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Baciloscopia
 Coloração para BAAR
 Coloração de Ziehl-Neelsen
 1-cobrir a lâmina com fucsina fenicada;
 2-aquecer por 5 min até a emissão de vapores;
 3-lavar a lâmina com água corrente;
 5-lavar com água corrente;
 4-cobrir a lâmina com álcool ácido (2 min);
 6-cobrir a lâmina com azul de metileno-30seg;
 7-lavar com água corrente e secar.
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Baciloscopia
 Observação microscópica
 contar os germes em cada campo; 
 número de campos observados.
 Resultado
 ausência de BAAR em 100 campos -
 01 BAAR em 100 campos +
 02 a 10 BAAR em 50 campos ++
 mais de 10 BAAR em 20 campos +++
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Baciloscopia
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Processamento do escarro para cultura
Coleta
Gram
Ziehl-Neelsen
Sangue, EMB, Chocolate
IDENTIFICAÇÃO
ANTIBIOGRAMA
Procedimentos complementares
Descontaminação/ Homogeinização
Ziehl-Neelsen
Loewenstein-Jensen
Leitura final
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Baciloscopia
 Procedimento
 Algumas amostras devem ser descontaminadas:
Escarro, lavado broncoalveolar, lavado brônquico, urina, amostras de pele, aspirado gástrico, fezes;
 Amostras que não devem ser descontaminadas:
Líquor, medula óssea, sangue, líquidos orgânicos e biópsias.
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Baciloscopia
 Descontaminação – Método de Petroff
 1-colocar a amostra clínica em tubo cônico estéril;
 2-adicionar o mesmo volume de NaOH a 2%;
 3-homogeneizar vigorosamente;
 4-esperar 15 min;
 5-completar com tampão-fosfato;
 6-misturar por inversão várias vezes;
 7-centrifugar a 3.000/15 min;
 8-desprezar o sobrenadante;
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Baciloscopia
 Descontaminação – Método de Petroff
 9-adicionar algumas gotas de vermelho de fenol;
 10-neutralizar com HCl;
 11-ressuspender o sedimento em 1ml de tampão;
 12-inocular nos meios apropriados;
 13-fazer uma lâmina para pesquisa direta.
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Baciloscopia
 Meio de cultura – Lowenstein-Jensen
Sólido, à base de ovo, sais, glicerol e fécula de batata, permite o desenvolvimento de pigmento pela bactéria.
Em até 7 dias: crescimento rápido + de 7 dias: crescimento lento
Resultados: cultura positiva para micobactérias; cultura negativa para micobactérias.
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Outros achados na árvore brônquica
 Klebsiella pneumoniae;
 Haemophylus influenzae;
 Staphylococcus aureus;
Proteus
Pseudomonas
E. coli
uso indiscriminado de antibióticos
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Exercício 1
A característica de álcool-ácido resistência observada em micobactérias ocorre devido à presença de: a, flagelos peritríquios; b, lipídios na parede celular; c, polissacarídeos capsulares; d, ácidos teicóicos na membrana celular; e, ácidos nucléicos dispersos na parede
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Exercício 2
O diagnóstico de tuberculose feito pelo exame microscópico de esfregaços corados pelo método de Ziehl-Nielsen evidencia: a, bastonetes gram positivos b, bastonetes curvos corados em vermelho pela fucsina fenicada; c, bastonetes retos e delicados corados em vermelho pela fucsina fenicada; d, bastonetes retos e delicados corados em azul pela fucsina fenicada.
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Hanseníase
 causada pela M. leprae;
 2ª doença por micobactérias no mundo;
 os bacilos infectam nervos periféricos;
 ocorrem lesões sensitivas e motoras;
 não se consegue isolá-la in vitro.
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Hanseníase
 diagnóstico pela presença dos BAAR;
 coleta das lesões ou de áreas frias do corpo: lóbulos auriculares, joelho.
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Hanseníase
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Hanseníase