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1 SÍNTESE PROTEICA Etapas Dogma Central da Biologia Molecular 2 Replicação do DNA � É a única molécula capaz de sofrer autoauto-- duplicaçãoduplicação. � Ocorre durante a FaseFase SS da IntérfaseIntérfase. � É do tipo semiconservativasemiconservativa, pois utiliza cada fita da hélice dupla parental como molde, e cada hélice dupla recém-replicada inclui uma fita “antiga” e uma “nova” de DNA � É função essencial do MaterialMaterial genéticogenético, que deve ser executada com precisão para a manutenção da continuidade genética entre as células após a divisão celular � Extremamente complexo e confiável CICLO CELULAR: FASE S 3 FITA “NOVA” COMPLEMENTAR SEMI-CONSERVATIVA: FITA “ANTIGA” Replicação do DNA – Padrão geral da duplicação � Além de ser semiconservativa é também bidirecional, ou seja, a replicação afasta-se do local de origem em ambas as direções. � Enzima Chave: DNA Polimerase � Necessidade de requisitos principais: - A presença dos 4 Trifosfatos de desoxirribonucleosídeos – Adenina (A), Timina (T), Citosina (C) ou Guanina (G) - DNA-molde - Iniciador 4 Replicação do DNA � Enzima: DNA Polimerase � Tipos: I, II, III, IV e V � 6 Polimerases: αααα (alfa) - ββββ (beta) - δδδδ (delta) - ε (épsilon) - γγγγ (gama) -ζζζζ (dzeta) � Além de participarem do alongamento de uma fita de DNA, � Também apresentam atividade exonucleásica, ou seja, têm capacidade de revisar o DNA há pouco sintetizado e de remover e substituir os nucleotídeos incorretos = REVISÃO DE LEITURA DO DNA Ponto de controle G2/M: � Monitora o DNA, antes do início da Mitose. - Se replicação do DNA estiver incompleta - Se for detectado algum dano do DNA que não tenha sido reparado = SUSPENSÃO DO CICLO CELULAR PONTOS DE CONTROLE DO CICLO CELULAR:LEMBRANDO... 5 Replicação do DNA � DNA polimerase III - subunidade épsilon (ε) – Está envolvida diretamente na etapa de revisão de leitura e é ativada quando a enzima insere um nucleotídeo incorreto Obs.: Mutação na subunidade épsilon a torna não funcional ⇒ ↑↑ taxa de erro (mutação) durante a síntese de DNA � Tão logo removido o nucleotídeo mal pareado, a síntese pode prosseguir novamente � REVISÃO DE LEITURA DO DNA: Aumenta a fidelidade da síntese em cerca de 100x 1º) Transcrição Como o DNA, um ácido nucleico, consegue especificar uma proteína composta de aminoácidos??? � O processo complexo e em múltiplas etapas começa com a transferência da informação genética armazenada no DNA para o RNA Processo denominado TRANSCRIÇÃO e se limita a reproduzir em RNA o que está escrito em DNA, o que não apresenta maiores dificuldades: As bases A, T, G e C da fita molde de DNA comandam o pareamento de U, A, C e G na fita recém sintetizada de RNA. 6 LEMBRANDO OS NUCLEOTÍDEOS... URACILA NO RNA 7 Transcrição � Resulta em uma molécula de RNA complementar à sequência gênica de uma das duas fitas da hélice dupla � Para que ocorra o processo de transcrição é necessária a presença de uma enzima: RNA polimerase. Esta enzima reconhece o sítio de iniciação do gene, identifica a cadeia do DNA em que está contido e inicia a transcrição. Durante este processo, o pareamento dos nucleotídeos de RNA na cadeia de DNA, segue um padrão determinado, já conhecido: Transcrição �A adenina (A) do DNA se pareia com uracil (U) do RNA → uma vez que a molécula de RNA apresenta esta base no lugar de timina �A timina (T) do DNA se pareia com adenina (A), a citosina (C) com guanina (G) e a guanina (G) com citosina (C). �Os nucleotídeos de RNA se unem pelo fosfato e pela ribose. À medida que a molécula de RNA vai sendo construída e se afasta da cadeia ativa do DNA que serviu de molde, a molécula de DNA se reconstitui 8 Transcrição então... ... É o passo inicial do processo de FLUXO DE INFORMAÇÃO intracelular �A idéia de que o RNA está envolvido como molécula intermediária nesse processo de fluxo de informação entre o DNA e a Proteína é sugerido pelas seguintes observações: 9 Transcrição 1) A maior parte do DNA está associado aos cromossomos no núcleo da célula, porém, a síntese proteica ocorre em associação aos ribossomos, localizados no citoplasma. Portanto, parece que o DNA não participa diretamente da síntese proteica. 2) O RNA é sintetizado no núcleo, onde o DNA está e é quimicamente semelhante a ele. Transcrição 3) Depois de sua síntese, a maior parte do RNA migra para o citoplasma (mRNA), onde ocorre a síntese proteica (Tradução). 4) A quantidade de RNA de uma célula geralmente é proporcional à quantidade de proteínas que ela contém. Essas observações, sugeriram que a informação genética armazenada no DNA é transferida para um RNA intermediário, o qual dirige a síntese proteica. 10 Transcrição A molécula completa de RNA surgida da transcrição, recebe o nome de Transcrito primário. � 1977: Berger, Sharp e Roberts, apresentaram uma evidência direta de que os genes de vírus de animais contêm sequências nucleotídicas internas que não são expressas na sequência de aminoácidos da proteína que eles codificam. � Essas sequências internas de DNA estão representadas nos transcritos iniciais do RNA, mas são removidas antes de o mRNA maduro ser traduzido. Transcrição � Esses segmentos nucleotídicos são chamados de Sequências Intervenientes, e os genes que as contêm são genes interrompidos. � As sequências de DNA que não estão representadas no produto de mRNA final são chamadas íntrons (“int” de intervenientes) e as que são mantidas e expressas são chamadas de éxons (“ex” de expressão) � Íntron – Trecho de nucleotídios ociosos � Éxon – Segmentos aproveitáveis de nucleotídios 11 Transcrição � Antes de abandonar o núcleo, os íntrons são removidos do transcrito primário em um processo que inclui cortes entre íntrons e éxons (Figura A) � Posteriormente ocorrem ligações entre as extremidades livres dos éxons → o que elimina as sequências inúteis - e cria uma molécula de RNA contínua, na qual as sequências aproveitáveis se acham alinhadas de forma consecutiva. (Figura B) Transcritos primários mRNA final 12 Transcrição � RNA polimerases: Fazem a síntese do mRNA e devem ser capazes de: � Ligação ao feixe duplo ou feixe simples de DNA (fita- molde) � Reconhecer a sequência específica inicial do DNA (região promotora) Quando isso ocorre, a hélice é localmente desnaturada, ou destorcida, tornando a fita-molde de DNA acessível à ação enzimática (desenrolamento da fibra de cromatina) � Inserir o ribonucleotídeo correto em cada posição na cadeia crescente de RNA � Fazer uma síntese em série, sem desligar do DNA em cada etapa Transcrição � Reconhecer sinais de término � A enzima percorre toda a extensão do gene até encontrar uma sequência nucleotídica específica que atue como sinal de terminação � Atingida a terminação, a molécula de RNA transcrita é liberada do molde de DNA, e a porção central da enzima polimerase se dissocia � A molécula de RNA sintetizada é exatamente complementar à sequência de DNA da fita-molde do gene � Reconhecer sinais de regulação. 13 Região Gênica É a porção que codifica para um produto final, que pode ser uma cadeia polipeptídica ou um RNA Gênicas Intergênicas Região Intergênica É a porção regulatória, que sinaliza o início ou o final de um gene, que influencia a transcrição gênica, ou que é o ponto de início para a replicação do DNA Intergênicas Gênicas Regiões Codificadoras e Não-Codificadoras do DNA Transcrição Tipos principais de RNA presentes na célula eucariótica: � RNAs mensageiros (mRNA), que são usados posteriormente na síntese de proteinas � RNAs ribossômicos (rRNA), um tipo especial de RNA que se associa a certas proteínas para formar os ribossomos (estruturas citoplasmáticasque conduzem a síntese das proteínas) Os genes para RNA ribossômico ficam concentrados nas regiões dos cromossomos nas quais se formam os nucléolos � RNA de transferência (tRNA), que serão utilizados na transferência dos aminoácidos para a formação de novas proteinas. 14 Só pra lembrar... Ciclo de transcrição: �Ligação da RNA polimerase ao DNA (promotor fechado), em feixe duplo �Abertura do DNA em região adequada, formando complexo aberto �Síntese das primeiras ligações, da ordem de 10 nucleotídeos �Término da transcrição, DNA e RNA se soltando, DNA fechando na região. . Fica faltando a Última etapa: TRADUÇÃO...
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