Roteiro_de_pr_tica_-_The_Virtual_NMJ_1_

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Preparação “nervo frênico–músculo diafragma” para o estudo da atividade 
eletrofisiológica da junção neuromuscular através do registros intracelular na 
fibra muscular. (The Virtual NMJ) 
 
1) Clique sobre o botão “File” e selecione o item “New Experiment”. 
Inicialmente, a preparação está montada com solução de Krebs contendo íons nas suas 
concentrações fisiológicas. 
2) Um experimento consiste em uma série de registros obtidos sob a ação de diferentes drogas e/ou 
condições iônicas. 
Para iniciar um registro clique sobre o botão “Do Sweep” 
3) Para adicionar uma droga à preparação, ou mudar sua concentração: 
a) Selecione a droga desejada no menu “Drugs” 
b) Anote a concentração requerida, em Moles (M) 
c) Clique o botão “OK” para adicionar a droga 
d) Clique o botão “Do Sweep” para visualizar o efeito da droga 
4) Para mudar a composição iônica da solução extracelular: 
a) Selecione os íons desejados no menu “Ions” 
b) Modifique a concentração do(s) íon(s), em mM 
c) Clique o botão “OK” para modificar a concentração do(s) íon(s) 
d) Clique o botão “Do Sweep” para visualizar o efeito da mudança da concentração. 
5) Você pode reexaminar cada registro realizado usando a barra “Playback Scroll” do menu para 
reexibir-los na tela do computador. 
Você pode também ampliar a área de registros com um click duplo sobre a mesma. Esta operação 
abrirá uma janela de diálogo com a área amplificada. 
Caso você queira sobrepor os traçados registrados clique no check box “Display Auto-Erase”. 
6) Você pode fazer avaliações quantitativas a partir dos traçados obtidos arrastando a linha cinza 
vertical. Os valores correspondentes de potencial de membrana e tempo aparecerão na janela de 
leitura à direita da tela. 
Os valores são obtidos relativamente à linha cinza horizontal, denominada linha de base, a qual pode 
ser reposicionada arrastando-a para cima ou para baixo. A linha tracejada azul indica o valor de 
Zero mV na janela de registro. 
7) Para imprimir um cópia dos traçados selecione o item “Print” no menu de arquivos (File) 
8) Para salvar o seu experimento, selecione e clique sobre o item “Save Experiment” no menu de 
arquivos (File) e entre com o nome de arquivo desejado. Você poderá recarregar o seu experimento 
selecionando e clicando sobre o item “Load Experiment”. 
9) Para sair do programa, clique sobre o botão “File” e selecione o item “Exit”. 
 
 
 
 
Protocolos Experimentais Básicos 
Recomendamos que você realize inicialmente os seguintes procedimentos: 
 
a) Obtenha um traçado sem estímulo (No Stimulus; Do Sweep). 
b) Obtenha um traçado aplicando estímulo no nervo. Atenção: na estimulação indireta, a simulação já 
está calibrada para produzir sempre um potencial de ação na fibra nervosa. Ou seja, os parâmetros 
de estimulação (Amplitude e Duração) serão constantes. 
c) Adicione “Tubocurarine (Tb)” na concentração de 1E-7 e registre. Atenção: note que a preparação 
está sob fluxo contínuo de solução nutritiva, não há necessidade de lavagem da mesma. 
d) Adicione “Tubocurarine (Tb)” na concentração de 1E-6 e registre. Repita o mesmo procedimento com 
a concentração de 1E-5. 
e) Remova a droga clicando sobre o item “Drugs” na barra do menu e selecione “Remove all drugs” 
f) Obtenha traçados sem adição de nenhuma droga (controle) 
g) Adicione Tetrodotoxina na concentração 1E-7 e registre. Repita a adição de TTX na concentração de 
1E-6 e registre. 
h) Remova a droga clicando sobre o item “Drugs” na barra do menu e selecione “Remove all drugs” 
i) Adicione Mu-Conotoxina (CTX) na concentração 1E-7 e registre.. Repita esse procedimento com as 
seguintes concentrações: 1E-6, 1E-5 e 1E-4. 
j) Remova a droga clicando sobre o item “Drugs” na barra do menu e selecione “Remove all drugs” 
k) Obtenha traçados sem adição de nenhuma droga (controle) 
l) Adicione Neostigmina (NEO) na concentração 1E-5 e registre. Repita esse procedimento com as 
seguintes concentrações: 1E-4 e 1E-3. 
m) Remova a droga clicando sobre o item “Drugs” na barra do menu e selecione “Remove all drugs” 
n) Obtenha traçados sem adição de nenhuma droga (controle) 
o) Adicione 3,4 Diaminopiridina (DAP) na concentração 1E-5 e registre. Repita esse procedimento com 
concentração de 1E-4. 
p) Remova a droga clicando sobre o item “Drugs” na barra do menu e selecione “Remove all drugs” 
q) Obtenha traçados sem adição de nenhuma droga (controle) 
r) Adicione Suxametônio (SUX) na concentração 1E-5 e registre. Repita esse procedimento com as 
seguintes concentrações: 1E-4, 1E-3 e 1E-2. 
s) Remova a droga clicando sobre o item “Drugs” na barra do menu e selecione “Remove all drugs” 
t) Obtenha traçados sem adição de nenhuma droga. 
 
Explique o provável mecanismo de ação de cada uma das drogas