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PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS: FERMENTAÇÃOFERMENTAÇÃO Universidade Federal do Ceará Centro de Tecnologia Departamento de Engenharia Química FERMENTAÇÃOFERMENTAÇÃO Profa. Maria Valderez Ponte Rocha Aula 3: Cinética de Processos FermentativosAula 3: Cinética de Processos Fermentativos Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos 1. Introdução � A cinética dos processos fermentativos está ligada à análise da evolução dos componentes do sistema de cultivo: � O micro-organismo � Os metabólitos� Os metabólitos � Os nutrientes � Para o estudo cinético, escolhe- se o produto de interesse econômico e o substrato limitante. � O conhecimento da cinética representa um conjunto de dados importantes para a instalação de uma unidade produtiva. 2.1. Velocidades Instantâneas de Transformação 2. Parâmetros de transformação Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos As seguintes equações são aplicadas considerando sistema em batelada e não há os termos de manutenção. 2.2. Produtividade em Biomassa e em Produto 2.3. Velocidades Específicas de Transformação Velocidade específica de crescimento Velocidade específica de consumo de substrato Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos 2.4. Fatores de Conversão ou Coeficientes de Rendimento Velocidade específica de consumo de substrato Velocidade específica de formação de produto Fatores de Conversão (ou coeficiente de rendimento): se estes fatores permanecerem constantes ao longo do tempo de fermentação, eles podem ser aplicados no tempo final, quando X = Xm, P = Pm e S = 0. Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Combinando as duas equações para Yx/s. Uma definição alternativa. Vantagem: Xo possui + erros que Xm. Porém, nem sempre S = 0. Se Yx/s não for constante, obtém as seguintes expressões para os coeficientes de rendimento: Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Ou utilizando as definições de velocidade específica, têm-se: 2.5 Manutenção celular � Em processos fermentativos, uma parcela da energia do consumo de substrato (S0 -S) é destinada a manutenção das funções vitais do micro- organismo. Conceito introduzido por PIRT. Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Crescimento Manutenção Há a definição de um novo fator de conversão: Assim: 3. Curva de Crescimento A: Fase de latência ou lag B: Fase de aceleração Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos B: Fase de aceleração C: Fase log ou exponencial D: Fase de desaceleração E: Fase estacionária F: Fase de declínio ou morte Fase Logarítmica ou Exponencial Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Tempo de Geração (tg): intervalo de tempo necessário para duplicar o valor da concentração celular. L n ( X / X 0 8 10 3.1 Crescimento com Diauxia Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 2 4 6 Lactose X ( g . L - 1 ) Tempo (h) Glicose Duas fontes de carbono - Após término da primeira, inicia-se uma nova curva. 1. O produto e formado durante o crescimento, sendo somente proporcional a velocidade de crescimento (α≠0 e β=0, produção associada ao crescimento); 4.1 - Metabólito Primário 4. Classificação dos Processos Fermentativos Classificação proposto por GADEN, com base nas funções μ = μ (t). Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Exemplo: Fermentação Alcoólica. Modelo Luedeking e Piret 2. O produto e formado parte antes e parte depois do crescimento (α ≠ 0 e β ≠ 0, produção parcialmente associada ao crescimento); 4.2 Metabólito Parcialmente Associado ao Crescimento Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Exemplo: Fermentação para produção de ácido cítrico e ácido lático. Modelo Luedeking e Piret Antibiótico Açúcares 3. O produto é formado somente após o crescimento (α = 0 e β ≠ 0 , produção não associada ao crescimento); 4.3 - Metabólito Secundário Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Açúcares O2 Biomassa Exemplo: Produção de Penicilina; Toxicinas microbianas. 4. Classificação dos Processos Fermentativos Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos As “introduções” de nutrientes mantêm a produção de penicilina elevada. Cinética da fermentação de penicilina por Penicillium chrysogenum. Observe como a produção de penicilina ocorre à medida que as células atingem a fase estacionária 5. Influência da Concentração do Substrato sobre a velocidade específica de crescimento 5.1 Equação de Monod • Função Hiperbólica (descrita em 1942); • Similar a isoterma de adsorção de Langmuir (1918) Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos onde: µ : velocidade específica de crescimento (h-1) µmáx: velocidade específica máxima de crescimento (h -1) KS : constante de saturação (g/L) S: concentração de substrato (g/L) • Similar a isoterma de adsorção de Langmuir (1918) e a cinética enzimática de Michaellis – Menten (1902) .(1 ) . S KS n X m S X m eµ µ µ µ − = − = � Equação de Teissier �Moser 5.2 Outros modelos Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos . ( ) . . . n S S S D X m K S S X m K X S S X m K K S µ µ µ µ µ µ + + + + = = = �Moser � Contois e Fujimoto � Powell 5.2 Outros modelos Inibição pelo Substrato Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos Inibição pelo Produto Presença por Múltiplos Substratos Limitantes Exemplo de curva de crescimento e cálculo de μmax: Um tipo de célula é usado para a produção de antígenos. O crescimento é monitorado e os resultados obtidos podem ser observados na Figura 1. Responda. a) Existe fase lag? Caso afirmativo, diga quanto tempo dura. b) Quanto tempo dura a fase log? Qual o valor de μmax? c) Há fase estacionária? Quanto tempo dura? d) E a fase de morte, inicia em que tempo? Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos d) E a fase de morte, inicia em que tempo? Figura 1: Fermentação em reator batelada: variação da concentração X e lnX versus tempo. 0 5 10 15 20 25 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 Tempo (h) X ( g . L - 1 ) -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 L n (X/X 0 ) 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 L n ( X / X 0 ) Equation y = a + b* Adj. R-Squar 0,99888 Value Standard Erro Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos 0 5 10 15 20 25 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 Tempo (h) X ( g . L - 1 ) -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 L n (X/X 0 ) 4 6 8 10 12 14 -0,2 0,0 Tempo (h) Value Standard Erro LnX Intercept -0,5082 0,01175 LnX Slope 0,11648 0,00123 ln X = 0,11648 t – 0,5082 µmax= 0,11648 h -1 Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos ExemplosExemplos Tempo (h) X (g/l) S (g/l) P (g/l) Dados da Produção de Etanol por Saccharomyces cerevisiae utilizando glicose como fonte de carbono. (h) 0,0 1,3 90,0 0,0 1,0 1,5 89,0 0,0 3,0 2,5 88,6 0,3 5,3 5,1 84,0 2,7 7,7 10,5 76,0 5,6 10,022,0 48,1 11,5 11,3 33,0 20,6 24,2 12,0 37,5 9,4 33,0 13,3 41,0 0,4 37,0 15,0 42,0 0,2 38,0 18,0 42,0 0,0 38,0 Resolver utilizando a planilha proposta no Cap. 6 do Livro de Biotecnologia Industrial, volume 2. 80 90 100 X S P C o n c e n t r a ç a o d e X , S e P ( g / L ) Curva de crescimento celular, consumo de substrato e produção do produto de interesse ao longo do tempo. Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos ExemplosExemplos 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 10 20 30 40 50 60 70 80 P C o n c e n t r a ç a o d e X , S e P ( g / L ) Tempo (h) Cálculo da máxima velocidade específica de crescimento. 2,5 3,0 3,5 B Linear Fit of B Equation y = a + b*x Adj. R-Square 0,98316 Value Standard Error B Intercept 0 -- B Slope 0,35439 0,01891 µmax= 0,35439 h-1 Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos ExemplosExemplos 0 2 4 6 8 10 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 L n ( X / X 0 ) Tempo (h) R2 = 0,98316 0,6 0,7 0,8 mi x mi s mi p Velocidade específica de crescimento, consumo de substrato e produção. Metabólito Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos ExemplosExemplos 0 2 4 6 8 10 12 14 16 -0,1 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 m i x ( 1 / h ) Tempo (h) Metabólito Primário. OU Parcialmente associado ao crescimento? dX/dt dP/dt 0,288136 0,049261 0,703652 0,416765 1,426837 1,11744 2,788164 1,551591 y = 1,3763x R² = 0,8948 y = 1,5976x - 0,942 R² = 0,9304 8 10 12 dP/dt Tipo de Metabólito aplicando Luedeking Piret. Cinética de Processos Cinética de Processos FermentativosFermentativos ExemplosExemplos 2,788164 1,551591 6,914307 11,25344 3,685185 4,111037 0,958268 0,946484 0,333704 0,333704 -2 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 dP/dt Linear (dP/dt) Linear (dP/dt)
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