Exercícios Cromatografia Gasosa e HPLC

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Química Analítica Biotecnológica 
Exercícios 
Cromatografia Gasosa e HPLC 
 
 
1- Na análise por cromatografia gasosa de uma mistura contendo os compostos na tabela abaixo foi 
realizada. Escolha e justifique a ordem de eluição em uma coluna apolar e em uma coluna polar. 
 
Composto Ponto de Ebulição (
o
C) Polaridade 
A 75 Baixa 
B 75 Média 
C 60 Média 
 
2-Calcule a eficiência da coluna em relação ao pico 5 da tabela abaixo, e a resolução entre os picos 
(2 e 3) e (3 e 4). Considere tM = 1 cm. 
 
Pico Largura do pico (cm) tR (cm) 
1 0,5 3,1 
2 1,3 9,5 
3 0,9 10,2 
4 1,1 11,2 
5 1,5 16,4 
 
3-Em um equipamento de HPLC, inicialmente foi registrado o cromatograma para a injeção de uma 
solução 0,5 mM de paration. Um segundo cromatograma foi registrado para a injeção de um mesmo 
volume de outra solução 1mM de paration. Qual deve ser a diferença entre os cromatogramas no 
que se refere a (i) altura, (ii) área e (iii) tempo de retenção do pico relativo a este analito. 
 
4-Uma amostra de vitamina E foi analisada pelo método da padronização externa, ou seja, a partir 
de um padrão de acetato de alfa-tocoferol foram preparadas 4 soluções com as seguintes 
concentrações: 200, 400, 600 e 800 mg/L. Em paralelo, foi preparada uma solução contendo 500 
mg de amostra/L. As 5 soluções preparadas foram analisadas nas mesmas condições 
cromatográficas e o volume injetado foi sempre o mesmo (20 µL). A partir das áreas dos picos em 
cada cromatograma, calcular a porcentagem em massa de acetato de alfa-tocoferol na amostra. 
 2 
Solução Área (mm
2
) Concentração (mg/L) 
1 483 200 
2 972 400 
3 1454 600 
4 1938 800 
Amostra 1091 ? 
 
 
5- Em qual dos casos a eluição por gradiente é indicada? Para aqueles casos onde a eluição por 
gradiente for adequada, sugira um gradiente. Qual a modificação que solucionaria o problema nos 
outros casos. Para os três casos foi empregada uma coluna C18 e fase móvel composta por uma 
mistura de acetonitrila : água (1 : 1) 
 
 
 
 
A 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
B 
 
 
 
 
 
 3 
 
 
 
C 
 
 
 
 
 
6- O cromatograma abaixo refere-se à análise de tolueno (PE = 111ºC) e fenol (PE = 182 
o
C) por 
cromatografia gasosa. 
 
 
 
 
Pede-se: Identifique os picos e explique. 
 
7- Análise da cloroquina e hidroxicloroquina em leite. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Cloroquina Hidroxicloroquina 
 
 Coluna: 2mm x 200 cm 
 FE: SE-30 
 Vazão nitrogênio: 30 mL/min 
 Temp. injetor: 200ºC 
 Temp. detector: 280ºC 
 Temp. coluna: 180ºC 
 Amostra dissolvida em metanol 
e injeção de 1 µL 
 4 
 
Preparo da curva analítica: Alíquotas de 1 mL de leite foram enriquecidas com padrões de 
cloroquina e hidroxicloroquina nas concentrações especificadas abaixo. Em seguida, foram 
submetidas a extração com acetato de etila em meio básico. Volumes de 100 µL da fase orgânica 
foram coletados, evaporados até a secura, os resíduos foram dissolvidos em 100 µL da fase móvel e 
20 µL foram injetados no sistema cromatográfico. 
Padrões Cloroquina (µg/mL) Hidroxicloroquina (µg/mL) 
I 0,5 0,25 
II 0,8 0,4 
III 2,0 1,0 
 
Amostra: Diversas alíquotas 1 mL de leite de diferentes fabricantes foram analisadas. 
Análise cromatográfica: Coluna RP-18 (partículas 5 µm, 125 x 4,6 mm); fase móvel: água 
alcalinizada com trietilamina pH 7,5 : acetonitrila (80:20, v/v); vazão 1 mL/min; detecção em 320 
nm). 
Perguntas: 
a. Calcular a concentração de CQ e HCQ na amostra de leite 
b. Porque foi necessário alcalinizar a fase móvel 
c. Explicar a ordem de eluição 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Cloroquina Hidroxicloroquina 
Concentração 
(µg/mL) 
Altura (cm) Concentração 
(µg/mL) 
Altura (cm) 
0,5 9 0,25 3 
0,8 14 0,4 5 
2,0 36 1,0 12 
Amostra ? Determinar a altura 
no cromatograma 
abaixo. Depois 
determinar a conc. da 
amostra 
Amostra ? Determinar a altura 
no cromatograma 
abaixo. Depois 
determinar a conc. da 
amostra 
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