4_CRESCIMENTO BACTERIANO

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CRESCIMENTO BACTERIANO
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Requerimento nutricional
As bactérias necessitam de uma FONTE DE CARBONO E NITROGENIO, FONTE DE ENERGIA, ÁGUA e vários ions para seu crescimento
CULTURA = ISOLAMENTO DE GERMES
DIAGNÓSTICO DAS DOENÇAS INFECCIOSAS
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Carbono: CO2, carboidratos, aminoácidos, etc.
Nitrogênio: N2, NH3, NO3, aminoácidos, etc.
Enxofre: Cisteína, Cistina e metionina; SO4 e vitaminas, etc.
Fontes de Nutrientes
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Fontes de Nutrientes
FÓSFORO: PO4 e nucleotídeos.
Minerais: Fe, Ca, Mg, Mn, Zn, K, Na, Cl, etc.
Fatores de crescimento: vitaminas, aminoácidos, nucleosídeos.
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CONDIÇÕES DE CULTIVO
TEMPERATURA
D.B.O (Demanda Bioquímica de Oxigênio)
TEMPO DE INCUBAÇÃO
PRESSÃO OSMÓTICA
UMIDADE
pH
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TEMPERATURA DE INCUBAÇÃO
Psicrófilos = 12 	a 17ºC
Mesófilos = 30 a 40 ºC
Termófilos = 57 a 87ºC
Arqueobacter = 250 – 350ºC
Psicrotrófico = deteriorização dos alimentos
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D.B.O – Demanda Bioquímica de O2
FACULTATIVAS: Staphylococcus sp.
ANAERÓBIOS: Clostridium tetani
AERÓBIOS: M. tuberculosi
Utiliza o O2 como aceptor final de eletrons na cadeia respiratória
CAMPNOFÍLICOS = Cresce em CO2
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D.B.O – Demanda Bioquímica de O2
MICROAERÓFILAS: Campylobacter jejuni, Neisseria meningitide
AEROTOLERANTES: Enterococcus, faecalis
CAMPNOFÍLICOS = Cresce em CO2
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PRESSÃO OSMÓTICA
MEIO
ISOTÔNICO
HIPOTÔNICO
HIPERTÔNICO
Bactérias halofílicas obrigatórias ( 30 % )
Bactérias halofílicas facultativas ( 2% )
Ágar Chapman-Stone para S. aureus
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TEMPO DE INCUBAÇÃO
Tempo de Geração= Tempo necessário para uma célula se dividir (dobro)]
Geralmente 1 a 3 H
(E. coli  20 min.)
Representação logarítma ( Yx)
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CRESCIMENTO E REPRODUÇÃO
Crescimento Microbiano: É o aumento do número de indivíduo e não o aumento de tamanho de uma determinada célula.
REPRODUÇÃO: É a perpetuação das espécies de bactérias pelo processo de divisão binária, Cisciparidade
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Divisão Bacteriana
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Número de Bactérias Totais
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MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS NA ROTINA BACTERIOLÓGICAS
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MEIOS DE CULTURA
São misturas de nutrientes necessários ao crescimento microbiano que deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindíveis à vida das células. 
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MEIOS DE CULTURA
A formulação deve levar em conta o tipo nutritivo ao qual o microorganismo pertence, considerando – se a fonte de energia, o substrato doador de elétrons e a fonte de carbono.
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FATORES DE CRESCIMENTO
 Também é imprescindível acrescentar ao meio vitaminas, cofatores e aminoácidos quando estes compostos não são sintetizados pelo microorganismo que se deseja cultivar.
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Tipos de Meios de Cultura
Meio Quimicamente Definido  Meio AR-103
Meio Complexo. Ex. ágar-sangue, ágar-chocolate
Meio Seletivo Ex. ágar Chapman Stone (S.aureus), ágar E.M. B (E.coli)
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Tipos de Meios de Cultura
Meio Diferencial. Ex. ágar SS (Salmonella x Shigella)
Meio de Enriquecimento. Caldo Verde Brilhante
Meio de Transporte. Ex. Meio de Stuart
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MEIOS DE TRANSPORTE
MEIO DE STUART
CARY BLAIN = Transporte para fezes
 ROSA DUDET = Transporte para Micoplasma
MEIO DE LIGNIER
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COPROCULTURA
ÁGAR E.M.B (Eosina Blue Metilene)
ÁGAR MAC CONKEY
ÁGAR SS ( Salmonella-Shigella)
CALDO TETRATIONATO
SKIRROW = CAMPYLOBACTER
BACTÉRIAS ENTEROPATOGÊNICAS
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UROCULTURA
ÁGAR CLED (Contagem de colônias)
ÁGAR MAC CONKEY
BROLACIN
ÁGAR SANGUE
BACTÉRIAS UROPATOGÊNICAS
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CULTURA DE SECREÇÕES
ÁGAR SANGUE
ÁGAR CHOCOLATE
ÁGAR THAYER MARTIN (GONOCOCOS)
CALDO BHI
CALDO TIOGLICOLATO (anaeróbios)
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CULTURA PARA ANAEROBIOS
CALDO TIOGLICOLATO
Agar Sangue para Anaeróbios (ASA)
ASA + álcool feniletila, 
ASA + kanamicina + vancomicina
Agar cicloserina-cefoxitina—frutose, Caldo tioglicolato enriquecido
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CULTURA PARA TUBERCULOSE
Descontaminação prévia (Petrof, Lauril sulfato de sódio)
Meio de Lowenstein-Jensen: ovo coagulado
Middlebrook 7H10 - Meio à base de ágar
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MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS
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BACTÉRIAS NÃO CULTIVÁVEIS:
MYCOBACTERIUM LEPRAE
TREPONEMA PALIDUM
RIQUÉTSIAS
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CULTURA PARA FUNGOS
ÁGAR SABOURAND
MICOSEL
ÁGAR B.D.A (ÁGAR DEXTROSE-BATATA)
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MEIOS PARA TRICHOMONAS
MEIO DE KUPFERBERG
MEIO DE ROISON
MEIO DE DIAMOND
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S.Aureus em ÁGAR SANGUE
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MEIOS DE CULTURA
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ÁGAR SANGUE
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ÁGAR SANGUE = O sangue é adicionado a temperatura de 40ºC no ágar base ou ágar Mueller-Hinton. As hemácias são preservadas íntegras
ÁGAR CHOCOLATE = O sangue é adicionado a temperatura de 56ºC no ágar base ou ágar Mueller-Hinton. As hemácias não são preservadas. Ocorre hemólise
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ÁGAR CHOCOLATE
O SANGUE QUANDO AQUECIDO A 56ºC LIBERA DIVERSAS SUBSTÂNCIAS QUE FUNCIONAM COMO FATORES DE CRESCIMENTO
Cultura para Neisserias
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ÁGAR SS (Salmonella & Shigella)
AS COLÔNIAS NEGRAS INDICAM A PRODUÇÃO DE H2S PELAS SALMONELLAS
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TCBS CHOLERA MEDIUM
1-V. Cholerae
2-Escherichia Coli 
Incubação: 24hs em 35ºC
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VRB GLUCOSE AGAR 
1-E. Coli 2-S. aureus 
Incubação: 24hs em 35ºC 
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1- Morfologia das colônias;
2-Forma, Coloração de Gram, Arranjo, Motilidade, Catalase;
3-Modo de fermentação da glicose (carboidratos) e perfil bioquímico;
4-Fatores de crescimento;
5-Disponibilidade de oxigênio;
CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS
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6-Testes de produção de gás;
7-Tolerância ao sal, pH e bile;
8-Crescimento em determinadas temperaturas (máxima e mínima);
9-Condições do ácido láctico produzido;
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10-Tipos de bacteriófagos;
11-Hidrólise da Arginina;
12-Formação de Acetoina (Acetilmetilcarbinol);
13-Fermentação butilenoglicólica;
14-Tipo de hemólise;
15-Produção de polissacarídeos extracelulares;
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16-Tipagem sorológica;
17-Presença de enzimas e antígenos na superfície celular;
18-Perfil eletroforético de proteínas;
19-Atividade antimicrobiana;
20-Lipídeos e constituintes da parede celular
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Características culturais das bactérias
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Características culturais das bactérias
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Características das Colonias
1.Qto ao BRILHO: TRANSPARENTE, TRANSLUCIDA OU OPACA
2.Qto a COR: INCOLOR OU PIGMENTADA
3.Qto ao ASPECTO:VISCOSA, ÚMIDA, FILAMENTOSA, ETC,
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Crescimento em tubo de agar inclinado
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Meios para Provas Bioquímicas
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Fermentação da carboidratos
Bifidobacterium
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Fermentação da carboidratos
Tube 1:Culture en WW (rose) Tube 2:Lait Tube 3:Type respiratoire anaerobi (WW profond) Tube 4:Glucose Tube 5:Saccharose 
Tube 6:Lactose Tube 7:Glycerol Tube 8:Mannitol Tube 9:Amidon Tube 10:Indole Tube 11:Nitrate 
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ÁGAR MUELLER-HINTON
CRESCIMENTO CONFLUENTE UTILIZADO NO ANTIBIOGRAMA
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PROVA DA OPTOQUINA
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PREPARAÇÃO DO MEIO
1-PESAGEM
2-DISSOLUÇÃO
3-ESTERILIZAÇÃO
4-DISTRIBUIÇÃO
5-TESTE DE ESTERILIDADE
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DISSOLUÇÃO
A FRIO = MEIO LIQUIDO 
 (CALDO, INFUSO)
A QUENTE = MEIO SÓLIDO
 (ÁGAR-ÁGAR)
Tubos
Placas
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ESTERILIZAÇÃO
AUTOCLAVE = 121ºC por 15 a 20min
 (Substância termoestável)
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ESTERILIZAÇÃO
FILTRAÇÃO = Membrana milipore
 (Substâncias termolábil: Soro, vitaminas, antibióticos, açucares, etc)
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SEMEADURA
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SEMEADURA
Princípio: Uma população microbiana, sob condições naturais, contém muitas espécies diferentes. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e identificar os microrganismos em uma amostra, para então classificá-los e caracterizá-los.
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Técnicas de Semeadura
ESGOTAMENTO
ESPALHAMENTO “POUR PLATE” 
ESPALHAMENTO POS PLATE 
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Técnica de Esgotamento
A mais utilizada paraisolamento de germes em meio sólido (ágar sangue, ágar EMB, etc ), onde se utiliza uma alça de platina, previamente flambada e esfriada 
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Técnica de Esgotamento
 Com a alça de platina, tocar suavemente na amostra.
 Passar a alça sobre o meio de cultura em movimento de zigue-zague sem sobrepor as linha e sem recarregar a Alça.
 Incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 horas
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Técnica de Esgotamento
Incubar na estufa
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Colônias isoladas
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COLÔNIAS QUE SURGEM FORA DOS RISCOS DA ALÇA
SUGEREM POSSÍVEIS CONTAMINANTE
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Espalhamento “Pour Plate”
Consiste em fazer uma prévia diluição da amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e depois derramar o meio sobre a amostra e agitar para homogenizar a amostra diluída com o meio de cultura.
Cultura de urina = Contagem de colônias (UFC/ml)
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Espalhamento “Pour Plate”
 Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10, 1/100 e 1/1000.
 Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de Petri estéril
 Fundir 10 ml de meio sólido e refriar a 65ºC
 Derramar sobre a amostra na placa e aplicar movimentos suaves na placa para misturar a amostra com o meio;
 Esperar o meio solidificar novamente e incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 hora
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Espalhamento Pos Plate
Consiste em colocar a amostra (diluida ou não) sobre o meio com auxilio da alça de platina calibrada e espalhar por toda placa.
Pode-se também colocar um volume conhecido (10ul) com pipeta automática e espalhar com alça de Drigalsky.
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Contagem de Bactérias Viáveis
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Recomendações Para Semeadura
Todo processo deve ser feito em ambiente limpo e desinfectado, próximo de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de uma câmara de fluxo laminar;
Alça de platina utilizada para semear, deve ser flambada antes e depois da semeadura;
As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não haver transpiração do meio sobre a tampa
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Recomendações Para Semeadura
Regular a entrada de ar do bico de Bunsen, para obter uma chama azul ( zona de esterilidade );
Os tubos ou recipientes com meios de cultura, estéreis ou com material a ser inoculado, deverão ser abertos ou manipulados, somente na proximidade da chama do bico de Bunsen (zona estéril);
As manipulações devem ser feitas, preferencialmente, por trás da chama do bico de Bunsen.
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Recomendações Para Semeadura
As alças ou agulhas, de platina ou níquel-cromo, devem ser flambadas imediatamente antes e depois de qualquer transferência. Elas devem ser flambadas em todo seu comprimento, a partir de alguns centímetros do cabo de Kolle, até ao rubro, mantendo-as em posição vertical à chama do bico de Bunsen. Nunca iniciar a flambagem pela extremidade livre da alça ou agulha. Deixar esfriar nas proximidades da chama;
Passar, ligeiramente, dentro da chama do Bico de Bunsen, imediatamente antes e depois da transferência, pipetas graduadas estéreis, pipeta Pasteur, ou alça de Drigalsky;
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Recomendações Para Semeadura
Nunca abrir ou deixar aberto verticalmente os tubos ou frascos com culturas, incliná-los a aproximadamente em ângulo de 30º;
No caso de tubo com ágar inclinado, este deve ficar de preferência na horizontal. Flambar também a boca dos tubos ou frascos contendo culturas e meios, imediatamente antes e depois da transferência;
Nunca depositar a tampa ou tampão de algodão dos tubos ou frascos sobre a bancada ou mesa de trabalho.