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UNVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO ALINE DE OLIVEIRA REZENDE ANA LETÍCIA MACEDO JOSÉ DANIEL RODRIGUES OLIVEIRA FILHO JÉSSICA MARAN CAVALCANTE SOARES LOUÍZE ROBERTA MAFRA DE SOUSA MANUELLA SAMPAIO MARTINS MARCELLA CARVALHO CHAVES RELATÓRIO DE AULAS PRÁTCAS (1-7) SÃO LUÍS 2013 UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS (1-6) Relatório feito para obtenção de nota parcial na primeira avaliação da matéria de Microbiologia que é ministrada pelo professor Luís Carlos. SÃO LUÍS 2013 INTRODUÇÃO Do grego mikrós (pequeno) + biologia (tratado + vida), é a área da ciência que é responsável pelo estudo dos seres que somente podem ser observados com auxílio de microscópio, os microrganismos. Em Microbiologia pode-se estudar os organismos em grande detalhe e observar seus processos vitais durante o crescimento, a reprodução, o envelhecimento e a morte. Modificando-se a composição do meio ambiente, é possível alterar as atividades metabólicas, regular o crescimento e, até alterar alguns detalhes do padrão genético, tudo sem causar a destruição do microrganismo. Os principais grupos de microrganismos são os protozoários, fungos, algas e bactérias. Os vírus, apesar de não serem considerados vivos, têm algumas características de células vivas e por isso são estudados como microrganismos. PRÁTICA 1 Observação de Microrganismos. Exame a fresco, coloração simples e coloração de Gram. - Exame a fresco: Objetivo: Observar microrganismos vivos em material biológico Material: Material biológico em suspensão, lâminas, lamínulas, microscópio, conta-gotas. Método: Coletar uma gota do material biológico, colocar no centro da lâmina e sobrepor cuidadosamente, tendo cuidado para não formar bolhas, numa lamínula. Levar ao microscópio e observar em objetivas de 10 a 40 vezes. Resultados: Foram obsevadas bactérias do tipo Bacilo. - Coloração Simples: Objetivos: Observar microrganismos em preparações coradas a fim de visualizar melhor algumas estruturas celulares, bem como forma e disposição. Material: Material biológico em suspensão, lâminas, lamínulas, microscópio, pipeta Pasteur, corante azul de metileno. Métodos: Foi feito um esfregaço com o material biológico, esperou secar e depois fixou ao calor. Cobriu-se o esfregaço com o corante. Esperou-se por 1 a 5 min. Depois lavou com água, secou com um papel e levou a lamina ao microscópico para ser observado com objetivas de 10 a 40 vezes. Resultados: Foram observadas bactérias do tipo bacilos (maioria) e cocos. Estas bactérias obtiveram afinidade pelo corante azul de metileno. - Coloração de Gram: Objetivo: Observar formas, disposição e comportamento tintorial das bactérias. Distinguir bactérias Gram-positivas das Gram-negativas Material: Reagentes de Gram: solução cristal-violeta 2%; solução aquosa de iodo (Lugol); mistura álcool-acetona, solução de safranina, lâminas, lamínulas, alça de platina, Bico de Bunsen, Microscópio. Métodos: Preparar o esfregaço e fixar ao calor, cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal violeta por 1 min, depois lavar com água corrente e retirar o excesso de água, cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo por 1 min, descorar a lâmina com a mistura de álcool-acetona até ficar incolor, depois cobrir novamente a área com a solução de safranina por 30 segundos, por fim lavar com água corrente e deixar secar no ar. Resultados: Foram observadas bactérias em sua maioria do tipo gram- positiva e poucas gram-negativas. PRÁTICA 2 Preparo de Meios de Cultura Objetivo: Ensinar o aluno a desenvolver um meio de cultura eficiente. Observar o crescimento da bactéria. Materiais: - Mackonkey Agar: auxiliador na digestão de tecido animal. - Ingredientes: placa de petri, erlenmeyer, pipetas e autoclave Métodos: - Pesar 5,1g do Mackonkey agar - Colocar o pé no Enlemayer e dissolver com 100ml de água, com isto a solução ficou vermelha. - A solução foi colocada na autoclave Resultados: - Houve um crescimento bacteriano satisfatório. Foram observadas aproximadamente 64 culturas de bactérias, menos do que o esperado, por conta da alta taxa de diluição. PRÁTICA 3 Semeadura por esgotamento Objetivo: Desenvolver técnicas básicas de semeadura de materiais para isolamentos de germes Materiais: Material biológico (amostra de água do sapário), placa de petri, bico de Bunsen e alça de platina. Métodos: Utiliza-se a alça de platina para pegar o material biológico, depois coloca-se a alça de platina com o material biológico no bico de bunsen e, após o esfriamento, é feito o ziguezague na placa de petri. Após estes métodos o material é encubado 37 °C, no tempo de 24-48 horas. Resultados: Diluição Numero de colônias na placa Número de colônias/ml Grupo V 10-5 64 6,4 . 106/ ml PRÁTICA 4 Folha Objetivo: desenvolver a microbiota. Materiais: folha de none, placa de petri, estufa, lugol, álcool, fucsina, violeta. Métodos: Pegou-se a folha de none e a colocou no meio (placa de petri), em seguida deixou-se na estufa, depois disso, fizemos o esfregaço e a coloração de gram (violeta, lugol, álcool e fucsina). Resultados: Pudemos observar o crescimento da microbiota dentro do meio que fora preparado. Imagens dos resultados contidas nos anexos. PRÁTICA 5 Controle de Micro-organismos (assepsia): Objetivo: Comprovar se a assepsia das mãos é eficiente no controle de micro-organismos. Material: Placa de Petri, sabão e água. Métodos: A mão de um aluno foi utilizada como objeto de estudo. A mão foi pressionada na placa de petri antes da assepsia (antes), para verificar a quantidade de micro-organismos existentes na amostra. A mão foi lavada e depois de limpa e seca foi pressionada em outra placa de Petri (depois), para verificar se houve uma diminuição na quantidade de micro-organismos. Resultados: Houve uma diminuição considerável na quantidade de micro-organismos na amostra analisada, antes da assepsia havia 25 colonias de bactérias e após a assepsia havia 14. PRÁTICA 6 Uso de antibiótico em microbiota normal Objetivo: Observar se a microbiota era sensível ou resistente a determinados antibióticos usados no experimento Material: antibióticos: penicilina, cefotax, sulfonamidas, pipimidico, tetraciclina; placa de petri contendo bactéria do tipo estafilococos aureus. Métodos: Os antibióticos foram colocados em cinco pontos equidistantes na placa de petri que continha bactérias. Resultados: Prática não realizada com sucesso pois houve falha técnica em pressionar os discos contra a placa, ocasionando assim um resultado não conclusivo. PRÁTICA 7 Microbiota do Meio ambiente Materiais: swab, desinfetante, placa de petri. Objetivo: Observar se o desinfetante é eficaz para a remoção das bactérias de um determinado localMétodos: Foi usado um lado do swab no chão sujo do banheiro fazendo um esfregaço. Depois se usou o desinfetante no mesmo lugar para limpar a área escolhida, e então foi feito, com o outro lado do swab, o esfregaço novamente. Após feito isto, dividiu-se a placa de petri em ANTES e DEPOIS e colocou-se o material recolhido na placa. Resultados: O uso do desinfetante foi eficaz para remover as bactérias da área escolhida, houve uma diminuição no numero das mesma neste local. CONCLUSÃO Concluímos que devido à complexidade dos seres estudados dentro da microbiologia, existem várias técnicas para que os vários aspectos desses seres possam ser estudados, e que precisam ser feitos dentro de um protocolo correto para que a experiência possa ter êxito. ANEXOS PRÁTICA 1 ANEXOS PRÁTICA 2 ANEXOS PRÁTICA 3 ANEXOS PRÁTICA 4 ANEXOS PRÁTICA 5 ANEXOS PRÁTICA 6 ANEXOS PRÁTICA 7
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