RELATORIO MICRO MARLLA

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO 
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE 
DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA 
DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIOS DE AULAS PRÁTICAS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
SÃO LUIS 
2013 
 
ANA CAROLINA NUNES DE MORAES REGO - 2012023389 
CAROLINA BORGES CORDEIRO – 2012016535 
JÉSSICA LOPES DA SILVEIRA LEITE - 2012016526 
JOANA VIVIANE DOS ANJOS - 2012034963 
KAMILLA DA SILVA VERAS - 2012028812 
MARLLA MARIA BARBOSA AROUCHE - 2012023404 
ROBERTH RICARD DINIZ PEREIRA - 2012050671 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIOS DE AULAS PRÁTICAS 
 
 
Relatório referente ás aulas 
práticas da disciplina 
Microbiologia, ministrada pela 
Prof.º Dr.º LUIS CARLOS 
FIGUEIRA DE CARVALHO 
para complementação de nota. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
SÃO LUIS 
2013 
Sumário 
 
 
PRÁTICA 01 __ ___________________________________________________________ 4 
PRÁTICA 02 ____________________________________________________________ 14 
PRÁTICA 03 ____________________________________________________________ 18 
PRÁTICA 04 ____________________________________________________________ 23 
PRÁTICA 05 ____________________________________________________________ 27 
PRÁTICA 06 ____________________________________________________________ 28 
Prática 01 = Observação de microorganismos 
 
 
EXAME A FRESCO 
 
 
Prática realizada dia 18 de Setembro, onde observamos microorganismos e 
foram ensinadas as técnicas de coloração simples e de gram, tornando assim possível a 
observação em microscópio ótico. 
 
Objetivo: Observar microrganismos vivos em material biológico 
 
Princípio: O exame a fresco fundamenta-se na observação de microrganismos vivos 
(bactérias, protozoários, fungos e leveduras) em suspensão do material biológico entre 
lâminas e lamínulas, onde se pode observar as formas e os movimentos dos mesmos. 
 As bactérias se observa em formas de bacilos, cocos ou espirilos, com ou sem 
movimento. Os fungos se observa as hifas filamentosas com ou sem septos. As 
leveduras são esferas maiores com ou sem brotamento. Os protozoários se observa em 
forma de cistos ou trofozoítos, com ou sem movimento. Dependendo do material, pode-
se observar algumas células (células epiteliais, leucócitos, hemácias, etc., ), fibras, 
cristais, ovos de helmintos, etc., 
 
Material: Material biológico em suspensão, lâminas, lamínulas, microscópio, pipeta 
Pasteur (ou conta-gotas) 
 
Método: Coletar uma gota do material biológico, colocar no centro da lâmina e 
sobrepor cuidadosamente (sem formar bolhas) uma lamínula. Levar ao microscópio e 
observar em objetiva de 40 vezes. Após a observação, desprezar a lâmina e lamínula em 
um frasco contendo detergente. 
 
Interpretação: Anotar o tipo de microrganismo (bactérias, protozoários, fungos ou 
leveduras), as formas e a motilidade. 
 
Comentários: 
 
O Exame a fresco é um método de observação que preserva a forma natural dos 
microrganismos e reduzem as distorções que somente ocorrem quando as preparações 
são secas e fixadas. Em vista da semi-transparência das células, estas preparações não 
são satisfatoriamente visualizadas a microscópio ótico de campo luminoso. Assim, se 
examinados pequenos organismos, como bactérias, vivas e suspensas em fluidos, 
veremos que a observação é precária, e quase impossível discernir claramente sobre 
qualquer de suas estruturas internas. É como se estivéssemos vendo um fragmento de 
vidro claro imerso em água cristalina. 
 As preparações a fresco exigem um manuseio completo do microscópio de 
campo luminoso. Assim é necessário que se façam ajustes na intensidade da luz que 
ilumina os objetos a serem observados, bem como uma regulagem adequada do 
condensador. Se possível, é conveniente o emprego de filtros, de modo a melhorar a 
qualidade da imagem, em fase da iluminação deste sistema ótico. Pode-se lançar mão de 
outros instrumentos. Uma das alternativas é a microscopia de contraste de fase. A outra 
forma é o emprego da microscopia de campo escuro. 
 Uma preparação a fresco de uma dada espécie bacteriana mostrará, por certo, 
que ela é incolor, mesmo a despeito de vir produzir um pigmento quando cultivada em 
caldo ou ágar. Esta circunstância levou a utilização, em microbiologia, de vários 
corantes que, ao tingir a célula com uma certa coloração, permitiu a visualização de 
detalhes quanto a arranjo, forma, estruturas, etc., 
 
Questões: 
1. Porque as dimensões dos vários tipos morfológicos de microrganismos 
podem ser melhor aferidas através de preparações a fresco? 
 
A finalidade desse método é permitir a observação de estruturas “in vivo”, de 
modo a poder observar manifestações funcionais 
 
2. Para que serve uma preparação em gota pendente? Ela oferece alguma 
indicação sobre a viabilidade de uma cultura 
 
Técnica entre lâmina e lamínula e gota pendente, utiliza uma suspensão de 
microrganismos vivos em uma gota ou uma camada líquida. Estas 
preparações (a fresco) são especialmente úteis quando a estrutura de um 
microrganismo pode ser distorcida pelo calor ou agentes químicos, ou 
quando o microrganismo não se cora facilmente. 
 
3. Citar alguns cuidados, a serem tomados para execução satisfatória do exame 
a fresco? 
 
Sempre deve-se ter o cuidado de esterelizar os materiais usando o bico de 
bulsen evitando assim a contaminação, Cuidado para não expor os líquidos 
biológicos (amostras) com a pele e mucosa, utilizar equipamentos de 
proteção individual, tais como luvas, mascaras, aventais, gorro, etc., 
 
 
4. Quais as limitações do exame a fresco? 
 
Não se observa detalhes das estruturas celulares. 
 
5. Em que circunstâncias, no diagnóstico laboratorial de doenças infecciosas, o 
exame a fresco deve ser aplicado? 
 
É utilizado no diagnóstico de doenças causadas por protozoários, tais como 
MALÁRIA, DOENÇAS DE CHAGAS, LEISHMANIOSE, e por fungos 
(micoses). 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXO: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
1.Objetivo: 
Observar formas, disposição e comportamento tintorial das bactérias. Distinguir 
bactérias Gram-positivas das Gram-negativas. 
2.Princípio: 
O método de Gram permite classificar as bactérias em dois grandes grupos: as que 
retêm Violeta de genciana ( Gram-positiva ) e as que não retém o violeta genciana 
(Gram-negativa). Além do mais, é útil para determinar a forma ( cocos e bacilos ), e o 
arranjo das células após a divisão celular (em forma de cacho, cadeias, sarcina etc., ). 
As células bacterianas são caracterizadas morfologicamente: 
Comportamento tintorial: Gram-positiva ou Gram-negativa 
Forma: cocos (esféricos), bacilos (cilíndricos) e espirilos (espiralados) 
Arranjo: Disposição das células entre si. Os cocos podem estar isolados, aos pares 
(diplococos), agrupados em cachos (estafilococos), em cadeia (estreptococos). Os 
bacilos e espirilos se apresentam em geral como células isoladas porém, 
ocasionalmente, pode-se observar bacilos aos pares (diplobacilos) ou em cadeia ( 
estreptobacilos ). 
Quanto ao tamanho, as células bacterianas são sempre de dimensões microscópicas, o 
diâmetro da maioria delas varia de 0,2 a 1,5 mm e comprimento de 1 a 6 mm. 
3.Materiais utilizados: 
Reagentes de Gram: sol. cristal-violeta 2%; sol. aquosa de iodo (Lugol); mistura álcool-
acetona; solução alcoólica de safranina ou fucsina 
 Lâminas 
 Suporte para lâminas; 
Alça deplatina; 
Bico de Bunsen; 
Microscópio; 
 Óleo de Imersão 
4. Procedimentos: 
Preparar o esfregaço e fixar ao calor 
Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de 1min 
Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água 
Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto 
Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor 
Cobrir o esfregaço com a solução de safranina1 por cerca de 30 segundos 
Lavar com água corrente; 
Deixar secar ao ar 
 
5. Resultados: 
 As bactérias Gram-positivas retêm o cristal-violeta e se apresentam com coloração 
violeta, enquanto as Gram-negativas são descoradas pelo álcool-acetona, sendo, 
portanto, coradas pela safranina e se apresentam rósea. 
6. Comentários: 
Quando as estruturas celulares são cobertas pelo corante violeta-de-metila, todas se 
coram em roxo. Com a adição do mordente (Soluto de Lugol), ocorre à formação do 
complexo iodo-pararosanilina, que tem como propriedade fixar o corante primário nas 
estruturas coradas. 
 
Algumas estruturas perdem a cor violeta rapidamente, quando ocorre a lavagem, com 
ácool etílico, enquanto outras perdem sua coloração mais devagar ou a perdem 
completamente. O corante safranina colore novamente as estruturas que foram 
descoradas. 
 
As bactérias Gram-positivas, que têm a parede celular composta por mureína 
(peptídeoglicano – peptídeo de ácido n-acetil murâmico), durante o processo de 
descoloração com álcool etílico, retém o corante, permanecendo com a coloração 
conferida pelo corante primário (roxo). Já as bactérias Gram-negativas com parede 
celular composta predominantemente por ácidos graxos (lipopolissacarídeos e 
lipoproteínas), perdem o complexo iodo-pararosanilina, são incapazes de reter o violeta 
de Genciana, assumindo a cor do corante de fundo (vermelha). 
 
São as diferenças da estrutura da parede bacteriana, principalmente com relação à 
espessura da camada de peptidoglicano, que é responsável pelo diferente 
comportamento das bactérias diante da coloração de Gram. 
 
7. Anexos: 
 
Gram-negativo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Gram Positivo 
 
 
 
Questões: 
1. Os meios de cultivo e a idade da colônia exercem alguma influência na 
morfologia de células em coloração simples? 
SIM, pois a forma das bactérias depende das condições fisiológicas dentro de 
um certo limite de viabilidade celular 
2. A coloração simples se presta a identificação de uma cultura mista de 
microrganismos? Que observações poderiam ser obtidas? 
Na coloração simples observa-se apenas algumas formas e estruturas, não serve 
para identificar as bactérias, sendo necessários outras informações 
3. Qual a aplicação da coloração simples no Diagnóstico Laboratorial de doenças 
infecciosas? 
É utilizado no diagnóstico de doenças causadas por protozoários, tais como 
MALÁRIA, DOENÇAS DE CHAGAS, LEISHMANIOSE, e por fungos 
(micoses) 
4. Cite exemplos de Doenças Infecciosas e seu agente infecioso que são 
diagnosticados seguramente pela uma coloração simples? 
MALÁRIA (Plasmodium sp) , DOENÇAS DE CHAGAS (Trypanosoma cruzi) , 
LEISHMANIOSE (Leishmania donovani) , e por fungos (Trichophyton, 
Epidermophyton e Microsporum) 
 
5. Cite alguns cuidados, a serem tomados para a execução satisfatória da coloração 
simples. 
Seguir as normas de biossegurança 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ANEXOS: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Prática 02 = Meios de Cultura 
 
Objetivo: Familiarizar o aluno com o preparo dos meios de cultura mais 
usados em microbiologia; Discutir a aplicação de meios específicos para o cultivo de 
microrganismos distintos 
 
Princípio: Os microrganismos, para um crescimento adequado, necessitam de 
nutrientes (fontes de carbono, nitrogênio, enxofre, fosfato, etc., ) e condições ambientais 
favoráveis (pH, pressão osmótica, temperatura, umidade, etc., ). 
Meios de cultura são associação qualitativa e quantitativa de substâncias que 
permitem o cultivo de microrganismos fora do meio natural. Em condições naturais, nos 
diversos “habitats”, os microrganismos ocorrem em populações mistas. Os meios de 
cultura permitem isolar os microrganismos para estudo e pesquisa. 
 
Material: Ágar-agar, ágar Mueller-Hinton, Caldo BHI, tubos contendo 10ml 
de ágar-base, placas de Petri estéreis, pipetas de 1ml estéril, balança, provetas. 
 
Caldo BHI (Brain Heart Infusion) 
Composição (g/litro) 
Infuso de cérebro de carneiro...200g 
Infuso de coração bovino ...... 250g 
Peptona proteosa, Difco ......... 10g 
Dextrose ................................... 2g 
Cloreto de sódio ...................... 5g 
Fosfato disódico .................... 2,5g 
 
 
Modo de preparação
 Dissolver 3,7 gramas
completa dissolução. Distribui
a 1 atm. Depois o meio foi para a geladeira.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
QUESTÕES: 
 
QUESTÕES 
1. O que são meios de cultura e qual a
É uma mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano que deve 
conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindíveis à vida das 
células. Sua formulação deve levar em conta o tipo nutritivo ao qual o
microorganismo pertence, considerando 
doador de elétrons e a fonte de carbono. Também é imprescindível acrescentar 
ao meio vitaminas, cofatores e aminoácidos quando estes compostos não são 
sintetizados pelo microorganis
Modo de preparação 
7 gramas do caldo BHI em 100 ml de água destilada. Agitar até 
Distribui-se 3 ml por tubo e levar ao autoclave durante 15 minutos 
Depois o meio foi para a geladeira. 
 
meios de cultura e qual a sua aplicação na prática médica?
É uma mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano que deve 
conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindíveis à vida das 
células. Sua formulação deve levar em conta o tipo nutritivo ao qual o
microorganismo pertence, considerando –se a fonte de energia, o substrato 
doador de elétrons e a fonte de carbono. Também é imprescindível acrescentar 
ao meio vitaminas, cofatores e aminoácidos quando estes compostos não são 
sintetizados pelo microorganismo que se deseja cultivar. 
de água destilada. Agitar até 
utoclave durante 15 minutos 
sua aplicação na prática médica? 
É uma mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano que deve 
conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindíveis à vida das 
células. Sua formulação deve levar em conta o tipo nutritivo ao qual o 
se a fonte de energia, o substrato 
doador de elétrons e a fonte de carbono. Também é imprescindível acrescentar 
ao meio vitaminas, cofatores e aminoácidos quando estes compostos não são 
2. Alguns microrganismos, como Micobacterium leprae, ainda não se conseguiu 
cultivar em meios de cultura. Quais as possíveis dificuldades e qual a 
importância desta técnica? 
A falta de conhecimento do requerimento nutricional dessas bactérias, dificulta a 
elaboração de uma formulação apropriada. O meio de cultura é importante para 
isolamento e identificação das bactérias (diagnóstico) bem como os mecanismos 
de patogenicidade e ação dos agentes antimicrobianos. 
3. O que são macronutrientes e micronutrientes ? Cite os principais exemplos 
São os nutrientes requeridos em grandes quantidades por serem os principais 
constituintes dos compostos orgânicos celulares e/ou serem utilizados como 
combustíveis. São formados por carbono, oxigênio, hidrogênio, nitrogênio, 
enxofre e fósforo. 
 São nutrientes necessários ao desenvolvimento microbiano em pequenas 
quantidades consideráveis,dependendo do elemento e do microorganismo 
considerados. Eles são encontrados sempre na forma inorgânica, fazendo parte 
dos minerais. Os principais exemplos são ferro, magnésio, manganês,cálcio, 
zinco, cobre, potássio, sódio, cloro, cobalto, molibdênio, selênio e níquel. 
 
4. Qual a função do ágar-ágar na formulação dos meios de cultura? 
 
5. Quais as influências da temperatura e tempo de incubação no crescimento 
bacteriano 
Bactérias têm uma temperatura ótima de crescimento específica para cada tipo 
em torno da qual observa-se um intervalo dentro do qual o crescimento também 
ocorre,porém, sem atingir o seu máximo. Se a temperatura ótima é ultrapassada 
têm-se a desnaturação do material celular com conseqüente morte da célula. Se a 
célula for colocada numa temperatura inferior à temperatura ótima há uma 
desaceleração das atividades metabólicas, levando à morte após um longo 
tempo. 
6. Como se classificam os microrganismos quanto ao D.B.O (Demanda 
Bioquimica de Oxigênio)? 
corresponde à quantidade de oxigênio necessária para ocorrer a oxidação da 
matéria orgânica biodegradável sob condições aeróbicas. 
- Aeróbias estritas: exigem a presença de oxigênio, como as do gênero 
Acinetobacter. 
- Microaerófilas: necessitam de baixos teores de oxigênio, como o 
Campylobacter jejuni. 
 
 
-Facultativas: apresentam mecanismos que as capacitam a utilizar o oxigênio 
quando disponível, mas desenvolver-se também em sua ausência. Escherichia 
coli e várias bactérias entéricas tem esta característica. 
- Anaeróbias estritas: não toleram o oxigênio. Ex.: Clostridium tetani, bactéria 
produtora de potente toxina que só se desenvolve em tecidosnecrosados carentes 
de oxigênio. 
7. O que significa “crescimento”, quando aplicado a organismos celulares como as 
bactérias, e qual o processo de reprodução comumente encontrado nas mesmas? 
É o aumento do número de indivíduo e não oaumento de tamanho de uma 
determinada célula 
8. Descreva as fases do crescimento de uma célula bacteriana ao se desenvolver em 
um meio de cultura adequado 
Fase lag (A): esta fase de crescimento ocorre quando as células são transferidas 
de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta é a fase de ajuste e 
representa o período necessário para adaptação das células ao novo ambiente. As 
células nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, 
mas não se dividem. Tais células estão sintetizando DNA, novas proteínas e 
enzimas, que são um pré-requisito para divisão. 
Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as células estão se dividindo a uma 
taxa geométrica constante até atingir um máximo de crescimento. Os 
componentes celulares como RNA, proteínas, peso seco e polímeros da parede 
celular estão também aumentando a uma taxa constante. Como as células na fase 
exponencial estão se dividindo a uma taxa máxima, elas são muito menores em 
diâmetro que as células na fase Lag. A fase de crescimento exponencial 
normalmente chega ao final devido à depleção de nutrientes essenciais, 
diminuição de oxigênio em cultura aeróbia ou acúmulo de produtos tóxicos. 
Fase estacionária (C): durante esta fase, há rápido decréscimo na taxa de 
divisão celular. Eventualmente, o número total de células em divisão será igual 
ao número de células mortas, resultando na verdadeira população celular 
estacionária. A energia necessária para manter as células na fase estacionária é 
denominada energia de manutenção e é obtida a partir da degradação de 
produtos de armazenamento celular, ou seja, glicogênio, amido e lipídeos. 
Fase de morte ou declínio (D): quando as condições se tornam fortemente 
impróprias para o crescimento, as células se reproduzem mais lentamente e as 
células mortas aumentam em números elevados. Nesta fase o meio se encontra 
deficiente em nutrientes e rico em toxinas produzidas pelos próprios 
microrganismos. 
 
9. Descreva sobre os principais fatores que interferem no crescimento bacteriano 
São compostos orgânicos essenciais para o metabolismo bacteriano que não são 
sintetizados pelo microorganismo e devem ser obtidos do meio natural ou 
artificial em que vivem. Eles podem ser vitaminas, aminoácidos e nucleotídeos. 
10. Qual a relação que existe entre o requerimento nutricional de um microrganismo 
e a formulação de meios de cultura? 
Cada microrganismo possui um requerimento nutricional próprio que deve ser 
suprimido pelos nutrientes constituintes dos meios de cultura 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Prática 03 = TÉCNICAS DE SEMEADURA 
 
 
Objetivo: Desenvolver as técnicas básicas de semeadura de material para 
isolamento de germes. 
 
Princípio: Uma população microbiana, sob condições naturais, contém muitas 
espécies diferentes. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e 
identificar os microrganismos em uma amostra, para então classificá-los e caracterizá-
los. Os microrganismos na natureza normalmente existem em culturas mistas, com 
muitas espécies diferentes ocupando o mesmo ambiente. Ao determinar as 
características de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura, ou seja, em que 
todas as células na população são idênticas no sentido de que elas se originaram de uma 
mesma célula parental. Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou 
desenvolvidos em material nutriente denominado meio de cultura. O tipo de meio 
utilizado depende de vários fatores. 
 
Materiais: 5 tubos de ensaio, solução salina tamponada, swab estéril, bico de 
Bunsen, galeria para tubos de ensaio, placas de Petri estéreis, becker de 100ml com 
álcool, estufa a 37ºC, banho-maria a 100ºC, material biológico (saliva, sec. nasal, 
sec.ouvido, sec.orofaringe, fezes, urina, etc.) 
 
 
TÉCNICAS 
 
Técnica de Esgotamento: A mais utilizada para isolamento de germes em 
meio sólido (ágar sangue, ágar EMB, etc ), onde se utiliza uma alça de platina, 
previamente flambada e esfriada 
• Com a alça de platina, tocar suavemente na amostra. 
• Passar a alça sobre o meio de cultura em movimento de zigue-zague sem 
sobrepor as linha e sem recarregar a Alça. 
• Incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 horas 
• Foi usada material humano para a técnica 
 
 
 
 
Espalhamento “Pour Plate”:
amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e depois derramar o meio sobre a 
amostra e agitar para homogeneizar a amostra diluída com o meio de cultura. Técnica:
• Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10, 1/100 e 1/1000.
• Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de Petri estéril
• Fundir 10 ml de meio sólido e refriar a 65ºC
• Derramar sobre a amostra na placa e aplicar movimentos suaves na placa 
para misturar a amostra com o meio;
• Esperar o meio solidificar novamente e incubar
a 48 horas 
 
 Recomendações Para Semeadura de Material Biológico
 Para execução de uma boa semeadura, certas precauções especiais devem ser 
observadas pelo manipulador
os riscos de infecção ou intoxicação no Laboratório:
 
• Todo processo deve ser feito em ambiente limpo e desinfetado, próximo 
de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de uma câmara de
laminar; 
• Alça de platina utilizada para semear, deve ser flambada antes e depois 
da semeadura; 
• As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não 
haver transpiração do meio sobre a tampa
• Regular a entrada de ar do bico de Bunsen, pa
zona de esterilidade ); 
• Os tubos ou recipientes com meios de cultura, estéreis ou com material a 
ser inoculado, deverão ser abertos ou manipulados, somente na proximidade da chama 
do bico de Bunsen (zona estéril);
• As manipulações 
do bico de Bunsen. 
• As alças ou agulhas, de platina ou níquel
imediatamente antes e depois de qualquer transferência. Elas devem ser flambadas emEspalhamento “Pour Plate”: Consiste em fazer uma prévia diluição da 
amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e depois derramar o meio sobre a 
amostra e agitar para homogeneizar a amostra diluída com o meio de cultura. Técnica:
Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10, 1/100 e 1/1000.
Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de Petri estéril
Fundir 10 ml de meio sólido e refriar a 65ºC 
Derramar sobre a amostra na placa e aplicar movimentos suaves na placa 
stra com o meio; 
Esperar o meio solidificar novamente e incubar as placas a 37ºC por
Recomendações Para Semeadura de Material Biológico 
Para execução de uma boa semeadura, certas precauções especiais devem ser 
observadas pelo manipulador, com o fim de preservar a pureza do cultivo e minimizar 
os riscos de infecção ou intoxicação no Laboratório: 
Todo processo deve ser feito em ambiente limpo e desinfetado, próximo 
de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de uma câmara de
Alça de platina utilizada para semear, deve ser flambada antes e depois 
As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não 
haver transpiração do meio sobre a tampa 
Regular a entrada de ar do bico de Bunsen, para obter uma chama azul ( 
Os tubos ou recipientes com meios de cultura, estéreis ou com material a 
ser inoculado, deverão ser abertos ou manipulados, somente na proximidade da chama 
do bico de Bunsen (zona estéril); 
As manipulações devem ser feitas, preferencialmente, por trás da chama 
As alças ou agulhas, de platina ou níquel-cromo, devem ser flambadas 
imediatamente antes e depois de qualquer transferência. Elas devem ser flambadas em 
Consiste em fazer uma prévia diluição da 
amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e depois derramar o meio sobre a 
amostra e agitar para homogeneizar a amostra diluída com o meio de cultura. Técnica: 
Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10, 1/100 e 1/1000. 
Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de Petri estéril 
Derramar sobre a amostra na placa e aplicar movimentos suaves na placa 
as placas a 37ºC por 24 
Para execução de uma boa semeadura, certas precauções especiais devem ser 
, com o fim de preservar a pureza do cultivo e minimizar 
Todo processo deve ser feito em ambiente limpo e desinfetado, próximo 
de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de uma câmara de fluxo 
Alça de platina utilizada para semear, deve ser flambada antes e depois 
As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não 
ra obter uma chama azul ( 
Os tubos ou recipientes com meios de cultura, estéreis ou com material a 
ser inoculado, deverão ser abertos ou manipulados, somente na proximidade da chama 
devem ser feitas, preferencialmente, por trás da chama 
cromo, devem ser flambadas 
imediatamente antes e depois de qualquer transferência. Elas devem ser flambadas em 
todo seu comprimento, a parti
mantendo-as em posição vertical à chama do bico de Bunsen. Nunca iniciar a 
flambagem pela extremidade livre da alça ou agulha. Deixar esfriar nas proximidades da 
chama; 
• Passar, ligeiramente, dentro da
antes e depois da transferência, pipetas graduadas estéreis, pipeta Pasteur, ou alça de 
Drigalsky; 
• Nunca abrir ou deixar aberto verticalmente os tubos ou frascos com 
culturas, incliná-los a aproximadamente em ângulo 
• No caso de tubo com ágar inclinado, este deve ficar de preferência na 
horizontal. Flambar também a boca dos tubos ou frascos contendo culturas e meios, 
imediatamente antes e depois da transferência;
• Nunca depositar a tampa ou tampão de algodão dos 
sobre a bancada ou mesa de trabalho;
• Descartar pipetas usadas em recipientes contendo soluções detergentes 
ou desinfetantes; 
• Tratar de dispor o material de trabalho em posição adequada à fácil 
manipulação, sem riscos de acidentes ou trocas
na posição vertical, em suportes e estantes apropriadas;
• Identificar adequadamente o material de trabalho.
 
 
ANEXOS: 
 
 
 
todo seu comprimento, a partir de alguns centímetros do cabo de Kolle, até ao rubro, 
as em posição vertical à chama do bico de Bunsen. Nunca iniciar a 
flambagem pela extremidade livre da alça ou agulha. Deixar esfriar nas proximidades da 
Passar, ligeiramente, dentro da chama do Bico de Bunsen, imediatamente 
antes e depois da transferência, pipetas graduadas estéreis, pipeta Pasteur, ou alça de 
Nunca abrir ou deixar aberto verticalmente os tubos ou frascos com 
los a aproximadamente em ângulo de 30º; 
No caso de tubo com ágar inclinado, este deve ficar de preferência na 
horizontal. Flambar também a boca dos tubos ou frascos contendo culturas e meios, 
imediatamente antes e depois da transferência; 
Nunca depositar a tampa ou tampão de algodão dos tubos ou frascos 
sobre a bancada ou mesa de trabalho; 
Descartar pipetas usadas em recipientes contendo soluções detergentes 
Tratar de dispor o material de trabalho em posição adequada à fácil 
manipulação, sem riscos de acidentes ou trocas. Manter os tubos, alças e agulhas sempre 
na posição vertical, em suportes e estantes apropriadas; 
Identificar adequadamente o material de trabalho. 
 
 
 
 
 
 
 
r de alguns centímetros do cabo de Kolle, até ao rubro, 
as em posição vertical à chama do bico de Bunsen. Nunca iniciar a 
flambagem pela extremidade livre da alça ou agulha. Deixar esfriar nas proximidades da 
chama do Bico de Bunsen, imediatamente 
antes e depois da transferência, pipetas graduadas estéreis, pipeta Pasteur, ou alça de 
Nunca abrir ou deixar aberto verticalmente os tubos ou frascos com 
No caso de tubo com ágar inclinado, este deve ficar de preferência na 
horizontal. Flambar também a boca dos tubos ou frascos contendo culturas e meios, 
tubos ou frascos 
Descartar pipetas usadas em recipientes contendo soluções detergentes 
Tratar de dispor o material de trabalho em posição adequada à fácil 
. Manter os tubos, alças e agulhas sempre 
QUESTÕES 
1. O que significa repicar uma cultura? 
Consiste na transferência de um microrganismo de um meio de cultura para 
outro. 
2. Como se obtém uma cultura pura. 
A cultura pura de um dado microrganismo é uma cultura de células genética e 
morfologicamente idênticas. A imobilização das células num meio sólido torna 
possível a visualização do crescimento em massas celulares isoladas 
denominadas colônias 
3. Qual importância da cultura pura no diagnóstico de doenças infecciosas? 
Ao determinar as características de um microrganismo, ele deve estar em 
cultura pura, ou seja, em que todas as células na população são idênticas no 
sentido de que elas se originaram de uma mesma célula parental. 
4. Para se identificar uma bactéria é necessário se obter uma cultura pura. 
Por que uma cultura mista conduz a erros de identificação? 
 
5. Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em 
material nutriente denominado meio de cultura. O tipo de meio utilizado depende de 
vários fatores. Cite-os. 
 
Considerações sobre a origem do material a ser analisado; a espécie que se 
imagina estar presente nesta amostra; as necessidades nutricionais dos 
organismos 
6. Por que todo processo de semeadura deve ser feito em ambiente limpo e 
desinfetado, próximo de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de 
uma câmara de fluxo laminar; 
 
7. As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não 
haver transpiração do meio sobre a tampa. O que pode ocorrer com as colônias se as 
placas forem incubadas com a tampa para cima? 
As colônias poderão ser contaminadas por outros do ambiente 
 
 
Prática 04 = 
Microbiota do corpo humano
 Objetivo: Observar a presença de bactérias em diversas partes do corpo 
humano 
 Princípio: Cultivo dos microrganismos isolados das diversas partes do corpohumano, através da semeadura em meios 
Gram-positivas (ágar sangue), Gram
sabourand) 
Material: Placas com os meios de cultura: ágar sangue, ágar Mac Conkey e 
ágar sabourand; tubos com 2ml de soro
 Métodos: 
1. Escolha uma parte do corpo humano ( mãos, axilas, pés, tórax, boca, etc., 
) e colete amostra passando um swab estéril umedecido com soro fisiológico
2. Semeie a amostra nos meios ágar sangue, agar mac Conkey e ágar 
Sabourand 
3. Incubar a 37 ºC por
das colônias. Se possível, contar o número de colônias
Resultados: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
= Observação da Microbiota normal
 
Microbiota do corpo humano 
 
: Observar a presença de bactérias em diversas partes do corpo 
Cultivo dos microrganismos isolados das diversas partes do corpo 
humano, através da semeadura em meios de cultura enriquecido e seletivo para bactérias 
positivas (ágar sangue), Gram-negativas ( ágar Mac Conkey) e para fungos ( ágar 
Placas com os meios de cultura: ágar sangue, ágar Mac Conkey e 
ágar sabourand; tubos com 2ml de soro fisiológico; swab estéril 
Escolha uma parte do corpo humano ( mãos, axilas, pés, tórax, boca, etc., 
) e colete amostra passando um swab estéril umedecido com soro fisiológico
Semeie a amostra nos meios ágar sangue, agar mac Conkey e ágar 
Incubar a 37 ºC por 24 a 48 horas e observar as características fenotípicas 
das colônias. Se possível, contar o número de colônias 
Observação da Microbiota normal 
: Observar a presença de bactérias em diversas partes do corpo 
Cultivo dos microrganismos isolados das diversas partes do corpo 
de cultura enriquecido e seletivo para bactérias 
negativas ( ágar Mac Conkey) e para fungos ( ágar 
Placas com os meios de cultura: ágar sangue, ágar Mac Conkey e 
Escolha uma parte do corpo humano ( mãos, axilas, pés, tórax, boca, etc., 
) e colete amostra passando um swab estéril umedecido com soro fisiológico 
Semeie a amostra nos meios ágar sangue, agar mac Conkey e ágar 
48 horas e observar as características fenotípicas 
Microbiota do meio ambiente 
 
Objetivo: Observar a presença de bactérias em diversas áreas do meio ambiente 
Princípio: Cultivo dos microrganismos isolados das diversas áreas do meio 
ambiente, através da semeadura em meios de cultura enriquecido e seletivo para 
bactérias Gram-positivas (ágar sangue), Gram-negativas ( ágar Mac Conkey) e para 
fungos ( ágar sabourand) 
Material: Placas com os meios de cultura: ágar sangue, ágar Mac Conkey e ágar 
sabourand; tubos com 2ml de soro fisiológico; swab estéril 
Métodos: 
1. Escolha uma área do meio ambiente colete amostra passando um swab 
estéril umedecido com soro fisiológico sobre o piso. 
2. Semeie a amostra nos meios ágar sangue, ágar Mac Conkey e ágar 
Sabourand 
3. Incubar a 37 ºC por 24 a 48 horas e observar as características fenotípicas 
das colônias. Se possível, contar o número de colônias 
 Resultados: 
Selecionar um local onde foi feita uma desinfecção com detergente comercial: 
 
 
 
E duas placas foram feitas um com antes e outra com depois e foi colocada na 
estufa so que devido a um erro a prática foi refeita e tivemos o seguinte resultado: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
QUESTÕES 
1. De que forma a flora normal dificulta o desenvolvimento de 
possíveis patógenos.
 
De que forma a flora normal dificulta o desenvolvimento de 
possíveis patógenos. 
De que forma a flora normal dificulta o desenvolvimento de 
Através da competição biológica, onde algumas espécies bacterianas 
além de consumir mais rapidamente os nutrientes, produzem metabólitos 
que inibem o crescimento de outras espécies bacterianas 
2. Em que período do desenvolvimento humano se inicia o 
desenvolvimento da microbiota normal? 
A formação da microbiota normal, com a qual o homem convive por toda 
a vida, tem inicio no momento do nascimento, pois, ao passar pelo canal 
do parto, ele recebe os primeiros componentes de sua microbiota. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Prática 05 = Ação de Agentes Químicos e Físicos Sobre os 
microrganismos. 
 
 
Princípio: Eliminação parcial dos microrganismos na superfície corpórea pela 
ação de agentes químicos que 
etc) e ação mecânica da escovação.
 
Material: Sabão ou sabonete, escova de unhas, álcool iodado, alcool a 70%, 
ágar Mueller-Hinton em placas, caldo BHI em tubos, galeria para tubos, salina estéril, 
swab esteril. 
 
Método: 
1º Etapa: Estudo da microbiota das mãos antes da lavagem e assepsia
Selecionar 1 voluntário
salina estéril nas mãos, principalmente entre os dedos e nas unhas. Passar o
a superfície da placa de ágar Mueller
em seguida colocar o swab
a 37ºC por 24 a 48 horas. 
 
 2º Etapa: Lavagem 
Após lavagem o mesmo voluntário colocou as mãos na placa e obteve
seguinte resultado: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Questões 
 
1. Defina os termos: Assepsia, Desinfecção, Esterilização
Eliminação parcial dos microrganismos na superfície corpórea pela 
ação de agentes químicos que não agridem o tecido ( detergentes, sabão, álcool, iodo, 
etc) e ação mecânica da escovação. 
Sabão ou sabonete, escova de unhas, álcool iodado, alcool a 70%, 
Hinton em placas, caldo BHI em tubos, galeria para tubos, salina estéril, 
Estudo da microbiota das mãos antes da lavagem e assepsia
Selecionar 1 voluntário da equipe e passar um swab estéril um
salina estéril nas mãos, principalmente entre os dedos e nas unhas. Passar o
superfície da placa de ágar Mueller-Hinton, espalhando bem sobre toda a superfície
swab dentro do tubo com caldo BHI. Incubar as placas e os tubos 
 e assepsia das mãos 
mesmo voluntário colocou as mãos na placa e obteve
Defina os termos: Assepsia, Desinfecção, Esterilização 
Eliminação parcial dos microrganismos na superfície corpórea pela 
não agridem o tecido ( detergentes, sabão, álcool, iodo, 
Sabão ou sabonete, escova de unhas, álcool iodado, alcool a 70%, 
Hinton em placas, caldo BHI em tubos, galeria para tubos, salina estéril, 
Estudo da microbiota das mãos antes da lavagem e assepsia 
estéril um edecido com 
salina estéril nas mãos, principalmente entre os dedos e nas unhas. Passar o swab sobre 
Hinton, espalhando bem sobre toda a superfície e 
dentro do tubo com caldo BHI. Incubar as placas e os tubos 
mesmo voluntário colocou as mãos na placa e obteve-se o 
Assepsia: Redução da microbiota em superfície animada, tais como mãos, pele, 
etc.. Ausência de microrganismos em uma área. Anti-sepsia: Prevenção de 
possíveis contaminantes na superfície animada, tais como pele, mucosas e 
tecidos vivos. Desinfecção: Redução da microbiota em superfície inanimada. 
Morte de microrganismos potencialmente patogênicos em objetos, materiais e 
em ambientes (os esporos bacterianos podem continuar viáveis). Esterilização: 
destruição ou remoção completa de TODOS os microrganismos. 
Descontaminação: Tirar a contaminação. Termo impreciso para desinfecção ou 
esterilização de um material contaminado. 
2. O álcool a 70% utilizado na limpeza das mãos e na limpeza da bancada, são 
respectivamente: ( x ) Antisséptico e Desinfetante; ( ) Desinfetante e 
Antisséptico; ( ) Somente antisséptico; ( ) Somente Desinfetante. 
JUSTIFIQUE A SUA RESPOSTA 
Redução da microbiota em superfície animada, tais como pele, mucosa e tecido 
vvo. Ausência de microrganismos em uma área. Desinfecção: morte de 
microrganismos potencialmente patogênicos em objetos, materiais e em 
ambientes (os esporos bacterianos podem continuar viáveis). 
 
3. É possível o médico eliminar todos os microrganismos das mãos antes de fazer 
uma cirurgia? Justifique a sua resposta 
Não, pois os processos de assepsia pormais eficiente que seja sempre fica as 
bactérias da microbiota residente. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Prática 06 = ANTIBIOGRAMA (TESTE DE 
SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS). 
 
 
1. Objetivos: 
 Determinar a susceptibilidade de microrganismos a diferentes antibióticos por 
meio da técnica de difusão em ágar. Interpretar um antibiograma em função do diâmetro 
do halo de inibição de diferentes antibióticos. 
2. Princípios: 
 Os antibióticos impregnados nos discos difundem no ágar e formam um halo de 
inibição ao seu redor quando encontram bactérias sensíveis. As bactérias resistentes 
crescem próximo ao disco, não ocorrendo a formação de halo. 
3. Materiais utilizados: 
 Placa contendo ágar Mueller-Hinton, microrganismo isolado em cultura pura 
(E.coli ou S.aureus) e suspenso em salina (inóculo,), 
Discos de papel impregnados com antibióticos calculados e sintetizados, 
 Alça de platina 
Swab estéril 
Tubo de ensaio contendo soro fisiológico 
Bico de Bunsen 
4. Procedimentos: 
 Fez-se o isolamento do microrganismo S. aureus (Gram positivo). Logo após 
foi feita a suspensão da bactéria, para isso, utilizou-se uma alça de platina para retirar o 
material da placa contendo o microrganismo e colocou-se em um tubo contendo soro 
fisiológico. Procedeu-se com a semeadura por espalhamento confluente, utilizando um 
swab estéril, retirou-se o material que estava contido no tubo que foi transferido para a 
placa em movimentos de zig zag. Em seguida, depositou-se os discos de antibióticos na 
placa, de forma eqüidistante. O material foi incubado em estufa a 37°C num período de 
24 a 48 horas 
 
 
 
 
 
5. Resultado: 
Antibiótico Halo de 
inibição (mm) 
 
Susceptibilidade 
AN (Ácido 
naldízico) – 30 mg 
SFT (Sulfazalrim) 
– 25 mg 
NET (Netilmicina) 
– 30 mg 
KN (Kanamicina)-
30mg 
CZ (Cefalzolina) –
30 mg 
 
 
6. Anexos: 
 
 
 0 
SFT (Sulfazalrim) 25 
NET (Netilmicina) 28 
- 20 
– 37 
 
 
 
 
 Resistente 
 Sensível 
 Sensível 
 Sensível 
 Sensível