Estudo dirigido de Biologia Molecular Respondido

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Como podemos obter um DNA recombinante? Descreva cada passo. 
Por meio de Biblioteca genômica
Síntese por mRNA
Síntese por adição de nucleotídeos
B
D
G
A
C
F
E
4. Cite 3 vetores tipos de clonagem usados na Engenharia Genética 
vetores de substituição, EMBL3 e vetores de inserção 
6. Quais os passos realizados na Clonagem molecular em bactérias?
Na bactéria, além do DNA, existe também o plasmídeo, que é uma molécula de DNA circular encontrada em bactérias que podem ser utilizadas para levar DNA de um organismo para outro de uma espécie diferente.
O plasmídeo é retirado da bactéria e cortado pela enzima de restrição. 
Depois, um fragmento do plasmídeo, se une ao outro fragmento de DNA de um organismo diferente, que fica sujeito a outra ação de tal enzima de restrição, a enzima DNA-ligase está comprometida neste processo.
Ao final deste processo, resulta-se um plasmídeo com o nome de vetor, que é inserido na célula bacteriana para se replicar.
 
7. Cite 3 razões que justificam estudar genética em bactérias? 
Por que se replicam facilmente, têm a mesma facilidade de se manipular e tem um ciclo curto, onde podem ser observadas mudanças em um período de tempo menor.
9. Cite três aplicações das técnicas da PCR.
Estudo do padrão de expressão gênica
Seleção de clones recombinantes
Sequenciamento direto de produtos amplificados
Detecção de mutações em genes específicos
Diagnóstico de câncer e doenças genéticas
Determinação do mecanismo de ação de substâncias mutagênicas
10. Explique as três etapas da PCR?
Um ciclo de PCR começa com a desnaturação por calor (95°C), que promove a
separação da fita dupla de DNA. A reação é resfriada na presença de um excesso dos dois oligonucleotídeos, possibilitando a hibridização dos dois iniciadores com a sequência complementar presente no DNA alvo. Em seguida, a reação é incubada para atividade da DNA polimerase, produzindo novas fitas de DNAs a partir dos iniciadores e utilizando o quatro desoxirribonucleotídios (dATP, dCTP, dGTP e dTTP).
A cada novo ciclo da reação inicia-se com o aquecimento para desnaturação da dupla fita de DNA, seguido de resfriamento para hibridação dos iniciadores e síntese de uma nova fita pela DNA polimerase a partir dos iniciadores, sendo que as fitas de DNA recém sintetizadas servem de molde no ciclo seguinte. Portanto, em cada ciclo é sintetizado o dobro do DNA produzido no ciclo anterior. Usualmente, são realizados de 20 a 30 ciclos para amplificação de um segmento de DNA específico dentro de um genoma. Nas primeiras iniciativas para amplificar fragmentos de DNA utilizava-se a enzima DNA polimerase da Escherichi coli, que possui atividade máxima a 37°C. Esta enzima deveria ser adicionada a cada ciclo pois o passo de desnaturação inativa a enzima. Um importante avanço ocorreu com a descoberta da enzima Taq DNA polimerase oriunda da bactéria Thermus aquaticus. A Taq DNA polimerase possui atividade ótima a 72°C e permanece razoavelmente estável mesmo a 95°C e com isto, a enzima é adicionada somente no inicio do processo .
	Resposta da coluna 8: 
Sequência: F E B C G A D H
	Resposta da coluna 11:
Sequência: D F E C A B H G