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ÁCIDOS NUCLEICOS SERVIÇO PÚBLICO FEDERAL MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DO PARÁ – CAMPUS CASTANHAL CURSO: AGRONOMIA CASTANHAL – PA 2015 ÁCIDOS NUCLÉICOS INTRODUÇÃO Os ácidos nucléicos são as biomoléculas mais importantes do controle celular, pois contém a informação genética. São encontrados em todas as células, possuindo importantes funções. São responsáveis pela Transferência de informações genéticas e por direcionar a síntese de proteínas. Existem dois tipos de ácidos nucléicos: - Ácido desoxirribonucléico (DNA) e - Ácido ribonucléico (RNA) CONSTITUIÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS Uma base nitrogenada (2) Uma pentose (3) Um fosfato Ácidos nucléicos polímeros de nucleotídeos ligações fosfodiéster. Nucleotídeos Estrutura do Nucléotídeo são basicamente constituído por: fostato Base Nitrogenada Pentose Base Nitrogenada Pentose Nucleotídeo Nucleosídeo 3 Bases nitrogenadas Púricas Apresentam dois anéis Pirimidicas Apresentam um ánel CONSTITUIÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS 4 REPRESENTAÇÃO DAS BASES NITROGENADAS Na formação dos ácidos nucléicos as bases púricas se combinam com as bases pirimídicas da seguinte forma: DNA: RNA: PÚRICAS PIRIMÍDICAS ADENINA (A) TIMINA (T) GUANINA (G) CITOSINA (C) PÚRICAS PIRIMÍDICAS ADENINA (A) URACILA (U) GUANINA (G) CITOSINA(C) CONSTITUIÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS PONTES DE HIDROGÊNIO CONSTITUIÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS As pentoses → São monossacarídeos de cinco carbonos na cadeia. RIBOSE RNA DESOXIRRIBOSE DNA CONSTITUIÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS GRUPO FÓSFATO O Grupo Fosfato (PO4) É derivado do ácido fosfórico (H3PO4) - é comum tanto ao DNA como ao RNA. CONSTITUIÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS 8 DNA – ácido desoxirribonucléico DNA – Desoxirribo Nucleic Acid (do inglês) ESTRUTURA MOLECULAR DO DNA Modelo da dupla hélice (cadeias de nucleotídeos enrolados formando uma escada espiral) Ligados por Pontes de Hidrogênio Proposta por James Watson e Francis Crick em 1953 DNA – ácido desoxirribonucléico ESTRUTURA MOLECULAR DO DNA DNA – ácido desoxirribonucléico DUPLICAÇÃO DO DNA AUTO DUPLICAÇÃO ou REPLICAÇÃO – Capacidade do DNA de originar cópias exatas de si mesmo IMPORTÂNCIA: Permite que após a divisão celular, as células filhas recebam a mesma quantidade de moléculas de DNA da célula-mãe O processo é dividido em 4 etapas: DNA – ácido desoxirribonucléico DUPLICAÇÃO DO DNA Pareamento de fitas de DNA OH O H2C P O O O O O H2C P O O O O O H2C P O O O O O H2C P O O O O O H2C P O O O O O H2C OH P O O O O 3´ 3´ 5´ 5´ Invertido e Complementar G T C G A C = DNA – ácido desoxirribonucléico DUPLICAÇÃO SEMICONSERVATIVA DNA-GIRASE HELICASE DNA-POLIMERASE DNA- LIGASE RNA – ácido ribonucléico ESTRUTURA MOLECULAR DO RNA Formado por vários nucleotídeos (moléculas grandes) Precisa do DNA para ser formado O açúcar do RNA é uma pentose (RIBOSE) URACILA no lugar de TIMINA NÃO POSSUI DUPLA HÉLICE (única camada) FUNÇÃO: síntese de Proteínas RNA – ácido ribonucléico TRANSCRIÇÃO DO RNA A molécula de DNA abre-se por ação da enzima RNA POLIMERASE Em seguida começa o pareamento de novos nucleotídeos Depois de pareado, o RNA pronto irá soltar-se e vai para o citoplasma A molécula de DNA se recompõe e volta ao normal RNA – ácido ribonucléico O RNAt carrega os aminoácidos, levando - os até o Ribossomo, onde penetram através do sitio A. O RNAt possui um anticódon e junto com o ribossomo percorrem a fita de RNA para encontrar o códon de iniciação RNA – ácido ribonucléico Tradução É o processo pelo qual haverá a leitura da mensagem contida na molécula de RNA pelo ribossomo, decodificando a linguagem de acido nucléico para linguagem de proteína. Sitio P: formação de polipeptidio Sitio A: entrada de Amino- Acido Sitio onde se liga o RNA RNA – ácido ribonucléico Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura 1 21 21 A descoberta das leis da hereditariedade; Natureza química do material genético; Decifração do código genético; Biotecnologia moderna ou Tecnologia do ácido desoxirribonucléico (DNA) recombinante ou engenharia genética, que permitiram a manipulação do material genético (OLIVEIRA et. al., 2012). Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura 22 Os primeiros experimentos com cultivos geneticamente modificados (GM) foram feitos em 1986, nos Estados Unidos e na França; A primeira variedade comercializada de uma espécie vegetal produzida pela engenharia genética foi o "Tomate Flavr Savr", no ano de 1994 (BORÉM & SANTOS, 2001); Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura 23 As culturas mais frequentemente testadas foram, milho, tomate, soja, canola, batata e algodão, Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura 24 As características genéticas introduzidas foram tolerância a herbicidas, resistência a insetos, qualidade do produto e resistência a vírus (BORÉM & SANTOS, 2001). Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura 25 VÍRUS DO BRONZEAMENTO HELCOVERPA ARMIGERA Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Base Legal para Manipulação do Material Genético Lei nº 11.105 de 24 de Março de 2005 – Lei dos Organismos Geneticamente Modificados (OGM) Art. 1o Esta Lei estabelece normas de segurança e mecanismos de fiscalização sobre a construção, o cultivo, a produção, a manipulação, o transporte, a transferência, a importação, a exportação, o armazenamento, a pesquisa, ... de organismos geneticamente modificados – OGM Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Base Legal para Manipulação do Material Genético Art. 3o Para os efeitos desta Lei, considera-se: I – organismo: toda entidade biológica capaz de reproduzir ou transferir material genético, inclusive vírus e outras classes que venham a ser conhecidas; II – ácido desoxirribonucléico - ADN, ácido ribonucléico - ARN: material genético que contém informações determinantes dos caracteres hereditários transmissíveis à descendência; Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Base Legal para Manipulação do Material Genético III – moléculas de ADN/ARN recombinante: as moléculas manipuladas fora das células vivas mediante a modificação de segmentos de ADN/ARN natural ou sintético e que possam multiplicar-se em uma célula viva ... ; V – organismo geneticamente modificado - OGM: organismo cujo material genético – ADN/ARN tenha sido modificado por qualquer técnica de engenharia genética; Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Objetivos da Manipulação do Material Genético O surgimento da biotecnologia moderna marca o início de um novo estágio para a agricultura e reserva um papel de destaque a genética molecular. Os avanços no campo da genética vegetal têm como efeito: Reduzir a dependência excessiva da agricultura das inovações mecânicas e químicas, que foram os pilares da revolução verde, Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Objetivos da Manipulação do Material Genético O surgimento da biotecnologia moderna marca o início de um novo estágio para a agricultura e reserva um papel de destaque a genética molecular. Os avanços no campo da genética vegetal têm como efeito: Aumento da produtividade, Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Objetivos da Manipulação do Material Genético O surgimento da biotecnologia moderna marca o início de um novo estágio para a agricultura e reserva um papel de destaque a genética molecular. Os avanços no campo da genética vegetal têm como efeito: Redução dos custos, Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Objetivos da Manipulação do Material Genético O surgimento da biotecnologia moderna marca o início de um novo estágio para a agricultura e reserva um papel de destaque a genética molecular. Os avanços no campo da genética vegetal têm como efeito: Produção de alimentos com melhor qualidade e o desenvolvimento de Práticas menos agressivas ao meio ambiente. Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Objetivos da Manipulação do Material Genético O surgimento da biotecnologia moderna marca o início de um novo estágio para a agricultura e reserva um papel de destaque a genética molecular. Os avanços no campo da genética vegetal têm como efeito: A possibilidade de criar novas espécies a partir da transferência de genes entre duas outras distintas. Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Métodos de manipulação – Tecnologia do DNA Recombinante Localização do DNA na célula Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Molécula de DNA A Tecnologia do DNA Recombinante é um conjunto de técnicas para localizar, isolar, preparar e estudar pequenos segmentos de DNA, são conhecidas como clonagem do DNA.(Lehninger et al., 2011) citado por (OLIVEIRA et al.,2012) Métodos de manipulação – Tecnologia do DNA Recombinante O DNA Recombinante, permite combinar na mesma molécula de DNA genes provenientes de fontes diferentes, mas não necessariamente de espécies diferentes, dando origem a uma molécula de DNA recombinante (DNAr). Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Molécula de DNA Qualquer fragmento de DNA que contenha um gene de interesse pode ser clonado (Alberts et al., 2004). Métodos de manipulação – Tecnologia do DNA Recombinante Gene é a sequência de nucleotídeos do DNA que pode ser transcrita em uma versão de RNA. Baseia-se na utilização de ferramentas moleculares como as enzimas de restrição, as ligases do DNA e os vetores (Plasmídeos e bacteriófagos). Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Transmissão da informação hereditária Métodos de manipulação – Tecnologia do DNA Recombinante Uma serie de enzimas estão envolvidas no sistema de replicação do DNA. Temos por exemplo: Proteínas Iniciadoras - ligam-se a origem de replicação (complexo proteína-DNA); DNA helicase -Separação da dupla hélice de DNA- Liga-se ao complexo proteína-DNA . Ácidos nucleicos aplicado na Agricultura Métodos de manipulação – Tecnologia do DNA Recombinante Processo do DNA-Recombinante Enzimas de restrição Ligase do DNA Plasmídeos e os bacteriófagos Há uma gama de aplicações das ferramentas utilizadas em biologia molecular que estão diretamente relacionadas com a pecuária, entre elas, estão as técnicas: Reação de polimerização em cadeia (PCR) Polimorfismo no Comprimento do Fragmento de Restrição (RFLP) Minissatélites/Microssatélites ou VNTR Sequenciamento de DNA APLICAÇÃO DA BIOLOGIA MOLECULAR NA PECUÁRIA Reação em cadeia da polimerase (PCR) O que é? Do que necessita? Solução tampão* Deoxinucleosídeos trifosfatos (dATP, dGTP, dCTP, dTTP)* Os primers* A Taq-polimerase* H2O O DNA extraído da amostra OBS. - O fato central que faz com que essa técnica seja tão útil é que todo organismo vivo possui sequência de nucleotídeos no DNA que são únicas específicas para cada espécie APLICAÇÃO DA BIOLOGIA MOLECULAR NA PECUÁRIA Como funciona? Primeira etapa: Desnaturação do DNA APLICAÇÃO DA BIOLOGIA MOLECULAR NA PECUÁRIA Segunda etapa: Anelamento Terceira etapa: Extenção APLICAÇÃO DA BIOLOGIA MOLECULAR NA PECUÁRIA Onde atua? Em embriões bovinos, as principais aplicações das técnicas de biologia molecular são para: Sexagem (indentificação e seleção de embriões machos e embrioes femeas) Detecção rápida de patógenos Determinação da viabilidade embrionária Seleção assistida por marcadores moleculares Detecção de mutações Testes de paternidade Transferência gênica APLICAÇÃO DA BIOLOGIA MOLECULAR NA PECUÁRIA Vantagens Alta sensibilidade da técnica Requer menos tempo Aumento exponencial da quantidade de DNA Aplicável em organismos mortos. Permite trabalhar com material não-puro Desvantagens Facilidade de contaminação Demanda de mão de obra especializada Limite do tamanho do fragmento amplificado APLICAÇÃO DA BIOLOGIA MOLECULAR NA PECUÁRIA REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS NICIURA, S. C. M. Aplicação de ferramentas de biologia molecular em embriões bovinos. Disponível em: <http://www.bioembryo.com.br/noticias.php?cat=1&subcat=2&id=105>. Acesso em: 18/08/2016 OLIVEIRA, A. M.X de; SANTOS, R. da S; BARBOSA, M.S. A biotecnologia aplicada ao melhoramento genético vegetal: controvérsias e discussões. Ano, 2012. <http://www.sobiologia.com.br>, disponível em http://www.sobiologia.com.br/conteudos/quimica_vida/quimica14.php. Acessado em 20/06/2016 às 9:45. NICIURA, S. C. M. Aplicação de ferramentas de biologia molecular em embriões bovinos. Disponível em: <http://www.bioembryo.com.br/noticias.php?cat=1&subcat=2&id=105>. Acesso em: 18/08/2016 1 46 Obrigado pela atenção ! Equipe Ácidos Nucleicos
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