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HEMATOLOGIA CLÍNICA COMPOSIÇÃO DO SANGUE • Eritrócitos – glóbulos vermelhos - hemácias • Leucócitos - Polimorfonucleares ** Neutrófilos ** Eosinófilos ** Basófilos - Mononucleares ** Linfócitos ** Monócitos • Plaquetas SANGUE: é um tecido conjuntivo líquido que circula pelo sistema vascular sanguíneo. Responsável pela manutenção da vida do organismo. Dividido em 02 componentes: I. Líquido – 60% volume – plasma II. Celular - 40% volume - glóbulos vermelhos, brancos e plaquetas PLASMA • 92% água • 08% proteínas, sais, glicose, hormônios, vitaminas, aminoácidos, imunoglobulinas, etc... FUNÇÃO: • Transportar as substâncias para o organismo todo. • Eliminar produtos provenientes do metabolismo. • Glóbulos vermelhos ou eritrócitos • Glóbulos brancos ou leucócitos • Plaquetas PORÇÃO CELULAR HEMATOPOIESE HEMATOPOIESE • Formação e desenvolvimento das células sanguíneas • Ocorre a partir de um precursor comum pluripotente ( UFC – unidade formadora de colônia; Stem-cell ou célula-tronco) Célula tronco: são células primitivas, produzidas durante o desenvolvimento do organismo e que dão origem à outros tipos celulares. • A célula mãe dá origem a duas células filhas. • Uma substitui a célula mãe (auto-renovação) MEDULA ÓSSEA MEDULA VERMELHA: medula óssea com atividade hematopoiética. MEDULA AMARELA: rica em células gordurosas (tecido adiposo) HEMATOPOIESE Compreende 03 processos: Formação de Eritrócitos ( Eritropoiese ) Formação de Leucócitos ( Leucopoiese) Formação de Plaquetas ( Megacariopoiese) CONSTITUINTES MEDULARES • Célula pluripotente (Stem Cell) • Células em diferenciação/maturação • Microambiente medular INDUTORES DE CRESCIMENTO E DE DIFERENCIAÇÃO • Controlam os processos de proliferação e diferenciação das células-tronco. • Todos os componentes celulares do sangue são originados a partir de uma única CÉLULA-TRONCO, indiferenciada. CÉLULA-TRONCO PLURIPOTENCIAL (CD34+) Progenitor LINFÓIDE LT, LB e LNK Progenitor MIELÓIDE Neutrófilos, Eosinófilos, Basófilos, Monócitos, Hemácias e Plaquetas ESTIMULADORES DA HEMATOPOIESE CITOCINAS Interleucina – 3 : estimula a produção de TODAS as linhagens celulares Interleucina – 1 : produzida por MONÓCITOS e MACRÓFAGOS da medula óssea Estimula Stem Cells e precursores linfóides. STEM CELLS FACTOR REGULAÇÃO Fatores de crescimento Citocinas e Interleucinas Idade Sexo Etnia Fatores Nutricionais Vitaminas Ferro ProteínasFatores Hormonais Estrógenos Andrógenos Tireoidianos Corticosteróides Adrenalina Estímulos Patológicos Hipóxia Inflamação Infecção Sangramento Integridade do Tecido medular HEMATOPOIESE SÉRIE VERMELHA São anucleadas Formato bicôncavo Flexíveis, adaptando-se à forma dos capilares 1/3 do volume ocupado pela Hb. ERITROPOIESE • As células eritróides constituem 10-30% das células hematopoiéticas da medula óssea. • A eritropoiese inicia-se na medula óssea a partir das células tronco da UFC-E • Estímulo hormonal específico------------ERITROPOETINA (EPO) • Perda diária = 10% do pool circulante Componentes essenciais à produção e maturação dos eritrócitos • Microambiente medular íntegro • Precursores • Eritropoetina – EPO • Ferro • Vitaminas - Vitamina B12 • Folatos (B9) • Carboidratos • Lipídios • Aminoácidos – síntese das proteínas • Sais minerais Síntese de Hb Divisão Celular Síntese de DNA Proteínas estruturais IMPORTÂNCIA DA VITAMINA B12 E ÁCIDO FÓLICO • Na ausência de vitamina B12 ou Ácido fólico ( B9)diminui a síntese de DNA, afetando a maturação nuclear e a divisão celular dos precursores das hemácias, na medula óssea. Fator intrínseco – produzido no estômago – é essencial para a absorção da vitamina B12 FATORES DE CRESCIMENTO QUE ESTIMULAM A ERITROPOIESE • Fator estimulante das células “stem cells” (células tronco) • Eritropoetina – produzida pelos rins. • Interleucina 3 – todas as linhagens • Fator estimulante de colônias de macrófagos e granulócitos. • Andrógenos – testosterona • Potencializa a produção de fatores de crescimento da eritropoiese – aumenta a síntese da ERITROPOETINA. • Tiroxinas – aumenta a secreção de eritropoetina. REGULAÇÃO ERITROPOIESE CONTROLE CLÁSSICO ( feedback negativo) • Diminuição taxa de Hemoglobina • Hipóxia a nível renal o Estímulo para produção renal e hepática de EPO o EPO estimula a produção medular de eritrócitos o Aumento do número eritrócitos e da taxa de Hb em 3 a 4 dias. ESTÍMULOS PARA ERITROPOIESE • Tensão de O² • Hemorragias • Exercício físico intenso. HIPÓXIA ERITROPOETINA Produção Liberação 90% REGULAÇÃO DA ERITROPOIESE • ERITROPOETINA (EPO) - Estimula BFU-E e CFU-E • TESTOSTERONA - Estimula a produção de EPO - Potencializa o efeito da EPO • FATORES NUTRICIONAIS - Vitamina B12 - Ácido fólico - Ferro ERITROPOETINA (EPO) • Hormônio glicoproteico • Estímulo: tensão de O² • Produção Renal (90%) e Hepática (10%) • Regulador humoral da produção de eritrócitos • Estimula a proliferação e amadurecimento das células indiferenciadas. ** CFU-E, proeritroblastos e eritroblastos basófilos. • Estimula o número de mitoses das células indiferenciadas. • Estimula a síntese de hemoglobina OBS: 2,3-difosfoglicerato produto do metabolismo da glicólise anaeróbica pelas hemácias. Promove a diminuição da afinidade da hemoglobina pelo Oxigênio METABOLISMO DOS ERITRÓCITOS • Obtenção de energia ATP Glicólise anaeróbica ATP MANUTENÇÃO DA FORMA E DEFORMIDADE FOSFORILAÇÃO DE FOSFOLIPÍDEOS E PROTEÍNAS DE MEMBRANA MANUTENÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE 2,3 - DPG TRANSPORTE ATIVO DE VÁRIAS MOLÉCULAS ATRAVÉS DA MEMBRANA DESTRUIÇÃO DO ERITRÓCITO Macrófagos no baço • Digerem a membrana celular • Separam o grumo heme da hemoglobina • Hidrolisam a globina (liberação de aminoácidos) • Removem o FERRO do grupo heme • Convertem o heme em biliverdina • Convertem a biliverdina em bilirrubina indireta DESTRUIÇÃO DO ERITRÓCITO Destino dos constituintes • Aminoácidos – reutilizados • Ferro – retorna à circulação (forma reserva ou é reutilizado na formação de hemoglobina) • Grupo Heme Bilirrubina Indireta - conjugada no fígado e eliminada. PRÓ-ERITROBLASTO • Núcleo volumoso • Alta relação núcleo-citoplasma • Cromatina frouxa, avermelhada. • Membrana nuclear fina e delicada. • Possui de 01 a 04 nucléolos. • Citoplasma intensamente basófilo (azul-marinho) • Contorno celular irregular. Proeminências frequentes. • Sofre mitose originando 02 eritroblastos basófilos. ERITROBLASTO BASÓFILO • Menor que o pró-eritroblasto • Cromatina mais grosseira, parcialmente aglomerada. • Núcleo menor. • Citoplasma basófilo. • Nucléolos não são visíveis. • Sofre 03 mitoses originando 16 eritroblastos policromáticos. ERITROBLASTO POLICROMÁTICO • Ligeiramente menor que o eritroblasto basófilo. • Núcleo menor. • Cromatina condensada ( cora em roxo) • Início produção de hemoglobina. • Citoplasma policromático (áreas coradas em vermelho, início da produção de hemoglobina e outras coradas em azul). • Por diferenciação, origina eritroblastos ortocromáticos. NOTA Gradativamente, a quantidade de hemoglobina vai aumentando e de RNA diminuindo, mudando a coloração do citoplasma ERITROBLASTO ORTOCROMÁTICO • Núcleo menor, intensamente corado (roxo), central ou excêntrico. • Citoplasma róseo, indicando síntese de hemoglobina em toda a célula.O núcleo vai ficando cada vez mais condensado, os nucléolos desaparecem (Picnose) O núcleo condensado é expulso da célula e ingerido por macrófagos. • Por contrações e ondulações do citoplasma o núcleo é ejetado da célula. RETICULÓCITOS • São maiores que as hemácias. • Primeira fase ANUCLEAR dos eritrócitos. • Permanecem 1 a 2 dias na medula óssea antes de serem liberados para o sangue. • Coram-se em azul-acinzentado pelo azul de cresil brilhante. • Marcador de atividade medular eritropoiética no sangue periférico. • Apresenta certa quantidade de ribossomos (RNA) • Apresentam um retículo filamentoso citoplasmático (remanescentes do aparelho de Golgi, mitocôndrias e algumas outras organelas. PRO-ERITROBLASTO ERITROBLASTO BASÓFILO POLICROMÁTICO ORTOCROMÁTICO HEMÁCIAS • Tem a forma de um disco bicôncavo. • Tem grande plasticidade, são dobráveis. • Coram em róseo, devido ao seu conteúdo de Hemoglobina. • Mantêm-se na circulação por 100-120 dias. CONTAGEM DE HEMÁCIAS • Câmara de Neubauer Contagem de hemácias na câmara de Neubauer • Os métodos para contagem global das células sanguíneas consistem geralmente em diluir o sangue, em proporção conhecida, com um líquido diluidor chamado Hayem, permitindo a conservação das células em estudo. 1.Pipetar 4 ml do líquido diluidor em um tubo de ensaio. 2.Com a pipeta transferir 0,02 ml (20µL) de sangue. Limpar a parede externa da ponteira com auxílio de papel absorvente. 3.Transferir os 0,02 ml de sangue para o tubo com o líquido diluidor, lavando com ele o interior da ponteira por aspiração e expulsão do líquido. A diluição é de 1:200. • O volume utilizado pode ser reduzido à metade: 2ml do diluidor para 10 µL de sangue 4.Agitar suavemente por inversão para uma correta homogeneização. 5.Com uma pipeta preencher os retículos da câmara de contagem, evitando excesso de líquido e bolhas de ar sob a lamínula aderida firmemente à câmara. 6. Deixar repousar por dois minutos para sedimentação dos glóbulos. Cálculos: Hemácias por μl de sangue = H.c. x 5 x 10 x 200 = mm³ • Volume da câmara: 0,1 mm³ • Nº de campos contados: 05 • Nº de células em 01 mm³: 10 células • Diluição: 1:200 Determinação do hematócrito pelo método do microhematócrito Hematócrito é o volume de hemácias expresso como percentagem do volume de uma amostra de sangue total, ou seja, mililitros de hemácias por decilitro de sangue (mL/dL) DETERMINAÇÃO DO MICROHEMATÓCRITO 1.Encher com o sangue o tubo para microhematócrito, até dois terços do seu volume. Para tubos heparinizados o sangue capilar pode ser usado. 2.Selar o tubo, introduzido a extremidade vazia na massa própria, com movimentos de rotação, até aproximadamente 5mm de profundidade. 3.Encher os demais tubos de modo idêntico. 4.Coloca-os na microcentrífuga em posição diametralmente opostas com a parte selada voltada para fora. Observar a numeração evitando a troca de resultados. 5.Após tampar convenientemente a microcentrífuga, coloca-a em movimento por cinco minutos. Tempo superior a este não altera a sedimentação dos glóbulos. 6.Desligar o aparelho. Retirar os tubos e fazer a leitura usando a escala própria. LEITURA DOS RESULTADOS: 1.Colocar o tubo sobre a escala, fazendo coincidir a extremidade inferior das células centrifugadas com a linha zero. 2.Deslocar o tubo paralelamente às linhas verticais fazendo coincidir o menisco superior do plasma com a linha 100. 3.Ler a percentagem do volume hematócrito na escala graduada ao nível da superfície das hemácias no tubo BOA NOITE!!
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