01.Técnicas e célula vegetal

Prévia do material em texto

BO360-Anatomia Vegetal
Docente responsável
Profa Dra Emilia Arruda
Monitoras
Luana Maria Cavalcanti Teixeira
Maryana Roberta Pedrosa Dias
Silvia Roberta Santos Silva
Site da disciplina
http://anatoveg.webnode.com.br/
O site
1. Objetivos do curso
Caracterizar anatomicamente os órgãos vegetativos e reprodutivos das
plantas, destacando aspectos ontogenéticos (desenvolvimento vegetal), ecológicos
e evolutivos, além de entender algumas das principais metodologias utilizadas na
preparação de material botânico para análises de células e tecidos vegetais.
2. Da estrutura do curso
2.1. Das aulas
Sextas-feiras das 8h às 12h
Teóricas (T) sala 03 das 8:00 às 10:00
Práticas (P) Laboratórios de aulas práticas das 10:00 às 12:00
Nas aulas práticas o aluno terá a oportunidade de analisar lâminas
histológicas prontas para observação de estruturas que deverão ser representadas
por meio de desenhos e descrições auxiliando na sua capacidade de observação
bem como na identificação de caracteres específicos de cada tecido/órgão/planta.
2 momentos
Observação e desenhos de lâminas prontas
Cortes anatômicos e análise do material do aluno
Aulas práticas: Esquemas e desenhos detalhados
Aulas práticas: Esquemas e desenhos detalhados
2.2. Material necessário para realização das aulas práticas
Cada aluno deverá possuir, individualmente, os seguintes materiais
1 Pinça histológica de ponta fina
2 Pincéis com pêlo macio (ex. Tigre 266)
2 Estiletes de ponta fina (ou agulha de seringa colada em palitos de churrasco)
1 Caixa de giletes (tipo lâmina de barbear)
1 Lápis ou grafite para desenho
1 Borracha para desenho
1 Caderno para desenho e anotações
1 Jaleco
2 Recipientes de vidro/plástico com tampa plástica (ex. Pote de maionese, 
nescafé, etc.)
2.3. Avaliações e nota
3 Avaliações teórico-práticas:
2 provas
1 Trabalho = texto + apresentação oral
Média Final = [(AT1 + AP1).P4 + (AT2 + AP2).P3 + A3.P3]
10
Legendas
AT1=Avaliação teórica 1; AP1=Avaliação prática 1;
AT2=Avaliação teórica 2; AP2=Avaliação prática 2;
A3=Trabalho;
P3=Peso 3;
P4=Peso 4.
2.3. Do trabalho
Trabalho teórico-prático
Em grupo (5 grupos de 9 pessoas)
Parte escrita referente ao material analisado pelo grupo, incluindo: introdução,
material e métodos, resultados, discussão e referências bibliográficas
Parte prática a ser feita nos laboratórios de aula prática ao longo das aulas
Apresentação oral: 15 a 20min
Sites de busca (links de interesse)
Portal da Capes de Periódicos (www.periodicos.capes.gov.br/)
Web of Science (http://apps.webofknowledge.com/)
Google Acadêmico (http://scholar.google.com.br/)
APGWeb (http://www.mobot.org/mobot/research/APweb/)
Alguns temas sugeridos
Aquáticas (raiz, caule e folha)
Eudicotiledôneas arbóreas (caule e folha)
Eudicoteiledôneas herbáceas (raiz, caule e folha)
Monocotiledôneas (raiz, caule e folha)
Epífitas (raiz, caule e folha)
Coletar no mínimo duas espécies
Portal Capes de Periódicos
ISI Web of Knowledge – Web of Science
Google Acadêmico
Paper modelo
Paper modelo
3. Bibliografia Básica
Raven, Evert & Eichorn
3.1. Apostila
4. Cronograma
O Lab. de Anatomia Vegetal da UFPE
A CÉLULA VEGETAL
PROFa. EMILIA ARRUDA
Aula 01
Técnicas usuais em anatomia vegetal
A célula vegetal
Estrutura e características principais
O MICROSCÓPIO
O MICROSCÓPIO
Lamínula
Lâmina
Lamínula
Lâmina
Corados e 
Lavados
Vidro de relógio
Desidratação
Preparações
semi-permanentes
Preparações
permanentes
TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
Infiltração
e emblocamento
Seccionamento
e montagem
Seccionamento
Montagem de 
lâminas
Micrótomo rotativoMaterial 
Fresco
Cortes
+
Fixação
Coloração
e montagem
Gilete
Coleta
ANÁLISES
Microscópio de Luz
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Lâminas histológicas Resolução: 500-700x
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TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
Microscópio
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Microscópio
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Preparações
específicas
Resolução: até 300.000x
Resolução: 40.000x > 
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ANÁLISES
TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
Lamínula
Lâmina
DISSOCIAÇÃO/ MACERAÇÃO
Utilizada para análise de células e outras estruturas isoladas
Ácido acético + peróxido de hidrogênio 1:1 (Franklin 1945) ou água sanitária
Elemento de vaso
+
Lavagem
Coloração e 
Montagem de 
lâminas
Estufa à 60°C
Material + 
solução de 
dissociação
+
Material 
fresco ou
fixado
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TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
FIXADORES
FAA50 ou FAA70 = Formaldeído, Ácido acético, Álcool 50% ou 70% (mais
utilizado)
Karnovisky = Paraformaldeído, glutaraldeído, solução tampão (Ruzin
1999). Para materiais delicados, custo elevado, altamente cancerígeno
Allen-Bouin = Ácido crômico, ácido acético glacial, ácido pícrico, 
formaldeído, água destilada
CRAF = Ácido crômico, ácido acético glacial, formaldeído, água destilada
TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
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CAPELA
TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
PRESERVAÇÃO
Etanol 70%
SÉRIE DE DESIDRATAÇÃO
Etanol: sequência gradual de 50 a 100%
Etanol – butanol: sequência gradual de 50 a 100%
BOMBA À VÁCUO
Remoção de ar dos tecidos, melhor penetração do
fixador nos tecidos
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TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
MEIOS DE INCLUSÃO
Parafina
Paraplast
Historresina
Polietilenoglicol
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TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
COLORAÇÃO
Permanentes
Azul de astra + safranina = azul + vermelho
Azul de Toluidina = preparações em historresina (azul-roxo)
Violeta cristal (violeta)
Semi-permanentes e temporárias
(reagentes): detecção de substâncias
Cloreto férrico = compostos fenólicos
Cloreto de zinco iodado = amido
Lugol = amido
Floroglucinol = lignina
Sudan III e IV = lipídeos (ex. Cutina
presente na cutícula epidérmica)
Lugol: amido
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TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
Lamínula
Lâmina histológica
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MEIOS DE MONTAGEM
Semipermanentes
Glicerina 50%
Vantagem = rápidas obtenção de material para análise
Desvantagem = baixa durabilidade
Permanentes
Entellan ou Bálsamo do Canadá
Vantagem = alta durabilidade
Desvantagem = tempo de obtenção
TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
Microscópio de Luz
Corte à mão
(com gilete) 
ou em micrótomo rotativo
Microscopia
Eletrônica
de Varredura
(MEV)
Microscopia
Eletrônica
de Transmissão
(MET)
Microscópio
de Luz
Dissociação
TÉCNICAS USUAIS EM ANATOMIA VEGETAL
A CÉLULA VEGETAL
Um breve histórico
A CÉLULA
Um breve histórico
A CÉLULA
Um breve histórico
A CÉLULA
CÉLULA PROCARIÓTICA X CÉLULA EUCARIÓTICA
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Célula procariótica Célula eucariótica
Envoltório nuclear Ausente Presente
DNA Circular no nucleóide Linear no núcleo
Organelas Ausentes Presentes
Citoesqueleto Ausente Presente
PROCARIÓTICA EUCARIÓTICA
Um breve histórico
Célula eucariótica se diversificou a partir de uma célula procariótica
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A CÉLULA
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Um breve histórico
Célula eucariótica se diversificou a partir de uma célula procariótica
Teoria da endossimbiose
A CÉLULA
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Um breve histórico
Célula eucariótica se diversificou a partir de uma célula procariótica
Teoria da endossimbiose
A CÉLULA
Um breve histórico
Teoria da
Endossimbiose
A CÉLULA
PARTES FUNDAMENTAIS DA CÉLULA
Membrana celular
Citoplasma
Núcleo
A CÉLULA
COMPONENTES QUÍMICOS
Água
Sais minerais
Lipídios
Proteínas
Ácidos nucléicos (DNA e RNA)
Adenosina trifostafo (ATP), etc.
A CÉLULA
CÉLULA VEGETAL X CÉLULA ANIMAL
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CÉLULAS EUCARIÓTICAS
CÉLULA VEGETAL X CÉLULA ANIMAL
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CÉLULAS EUCARIÓTICAS
A CÉLULA VEGETAL
COMPONENTES
Componentes protoplásmicos
Citoplasma
Núcleo
Componentes não protoplásmicos
Parede celular
Vacúolos
Susbtânicas ergásticas
A CÉLULA VEGETAL
COMPONENTES
Parede celular
Núcleo
Citoplasma
(Organelas)
Componentes 
protoplásmicos
Vacúolo
Componentes 
não protoplásmicos
A CÉLULA VEGETAL
Parede celular: proteção
Citoplasma
Organelas
Retículo endoplasmático: síntese de lipídios e proteínas
Ribossomos: síntese de proteínas, RNA
Complexo de Golgi: síntese, armazenamento e metabolismo de
substâncias
Mitocôndrias: respiração celular
Lisossomos: digestão celular
Peroxissomos: fotorrespiração e degradação de lipídios
Plastídeos: síntese e armazenamento de substâncias
Vacúolo: metabolismo celular
Núcleo: regular as reações químicas e armazenar a informação genética
A CÉLULA VEGETAL
COMPONENTES
Vacúolo
Plastídeos
Parede celular
PLASTÍDEOS
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CLOROPLASTOS
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CARACTERÍSTICAS GERAIS
Fotossíntese
Dupla membrana
Estroma = matriz homogênea
Sistema de membranas = tilacóides
Grana = conjunto de tilacóides
Pigmentos: clorofilas
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CLOROPLASTOS
LEUCOPLASTOS
Amiloplastos – reserva amido
 Elaioplastos – reserva óleo
 Proteoplastos ou proteínoplastos – reserva proteína
AMILOPLASTOS
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©Raven et al. (2005)
LEUCOPLASTOS
Estatólitos (amiloplastos)
Gravitropismo
TROPISMOS
Estatólitos (amiloplastos)
Gravitropismo
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CROMOPLASTOS
Pequenos 
Contém outros 
pigmentos além das 
clorofilas como ex. 
carotenóides
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VACÚOLO
CARACTERÍSTICAS GERAIS
Originado a partir da fusão de pequenos vacúolos
Única membrana denominada tonoplasto
Contém inúmeras substâncias dissolvidas
Função: processos metabólicos, armazenamento de substâncias (ergásticas: amido, 
cristais, óleos, ceras, proteínas etc.)
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VACÚOLO
A CÉLULA VEGETAL
COMPONENTES
Vacúolo
Plastídeos
Parede celular
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FORMAÇÃO
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Interfase Prófase Metáfase Anáfase Telófase
Mitose na célula vegetal
Telófase
Citocinese
Fragmoplasto
Placa celular
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FORMAÇÃO
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Interfase Prófase Metáfase Anáfase Telófase
Mitose na célula vegetal
Telófase
Citocinese
Fragmoplasto
Placa celular
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Divisão celular
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Telófase
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Divisão celular
Placa celular
Telófase
PAREDE CELULAR
FORMAÇÃO
Placa celular
Telófase
Fragmoplasto: microtúbulos + vesículas de Golgi
Lamela média/mediana
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PAREDE CELULAR
FORMAÇÃO
PAREDE CELULAR
FORMAÇÃO
Síntese dos componentes estruturais no interior da célula e deposição sobre a 
membrana plasmática: celulose, hemicelulose, pectinas…
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PAREDE CELULAR
Estrutura Geral
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PAREDE PRIMÁRIA
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primária
Campo primário
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PAREDE PRIMÁRIA
 Externa 
 Permite crescimento
 Composição
 65% Água
 31,5% Polissacarídeos
Celulose
Hemicelulose
Pectina
 3,5% Proteínas
Ocorrência: parênquima, colênquima, 
floema, etc.
Parênquima
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Características Gerais
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Deposição de parede secundária
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Pontoação
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PAREDE SECUNDÁRIA
Deposição de parede secundária
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Membrana de 
pontoação
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Pontoação
Parede 
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Célula2
PAREDE SECUNDÁRIA
Deposição de parede secundária
PONTOAÇÕES
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PAREDE SECUNDÁRIA
PONTOAÇÕES
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 Mais interna
 Forma-se em células que já cessaramseu 
crescimento
 Composição
 Água
 65 a 85% Polissacarídeos
50 a 80% Celulose
5 a 30% Hemicelulose
 15 a 35% Lignina
Ocorrência: esclerênquima (fibras, esclereídes), 
xilema (elementos de vaso, fibras), etc.
Esclereídes
Características Gerais
PAREDE SECUNDÁRIA
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Estrutura Geral
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PAREDE SECUNDÁRIA
Hormônios vegetais: etileno e giberelinas
Desenvolvimento vegetal
Orientação das microfibrilas
Expansão celular
Etileno: órgãos mais curtos
Giberilinas: órgãos mais alongados
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PAREDE SECUNDÁRIA
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A CÉLULA VEGETAL
A CÉLULA VEGETAL