Métodos de Estudo da Célula
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Métodos de Estudo da Célula


DisciplinaTópicos de Biologia Celular e Histologia8 materiais115 seguidores
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é marcado por um marcador (sonda), ex.: enzima, proteína.
 	\uf03fIMUNOCITOQUÍMICA INDIRETA - O anticorpo é marcado por um segundo anticorpo (anticorpo secundário), ao qual será inserido um marcador (sonda).
 
IMUNOCITOQUÍMICA ou IMUNOHISTOQUÍMICA
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IMUNOFLUORESCÊNCIA
 
\u201cQUANDO O COMPOSTO UTILIZADO NA MARCAÇÃO DO ANTICORPO É UM FLUOROCROMO\u201d
 
	\uf03f Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) \u2013 Emite fluorescência VERDE.
 
	\uf03f Isotiocianato de Tetrametilrodamina (TRITC) - Emite fluorescência VERMELHA.
 
EQUIPAMENTO UTILIZADO: MICROSCÓPIO DE FLUORESCÊNCIA.
Marcação por fluorescência. Em vermelho: actina; em verde: microtúbulos; em azul: núcleo 
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Aplicações:
 Identificar subpopulações de linfócitos;
 Identificar espécies bacterianas;
 localização de hormônios;
 Detecção complexos ag-ac em doenças auto-imunes
Detecção anticorpos anti-DNA
 Teste qualitativo;
Fc
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 Método cada vez mais utilizado que consiste em cultivar células isoladas fora do organismo onde existe.
 Há dois tipos de cultura celular:
Cultura primária: cultura preparada directamente de tecidos de um organismo, com ou sem passo inicial de fracionamento das células.
Cultura secundária: as células cultivadas foram retiradas de uma cultura primária, elas podem ser repetidamente subcultivadas desta forma, por semanas ou meses.
CULTIVO DE CÉLULAS IN VITRO
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 Exemplos de cultura de células
 Fig. 4 \u2013 Células em cultura
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 Placa de cultura
Ao contrário das bactérias, a maior parte das células de tecidos não estão adaptadas para viverem em suspensão e necessitam de uma superfície sólida para crescerem e dividirem-se, que é agora usualmente a superfície plástica de uma placa de cultura de tecidos; 
Certas culturas celulares incluem:
 
 Factores de crescimento + Transferrina
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estimulam a proliferação celular transporta ferro para a célula
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Composição de um Meio Típico Adequado para o Cultivo de Células de Mamíferos
Fig.9 \u2013 Tabela de componentes de um meio típico
 Algumas células não crescem nem se diferenciam se a placa não estiver coberta com componentes específicos da matriz extracelular 
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Vantagens da Cultura Celular
Possibilidade de estudar fenómenos,inacessíveis em tecidos intactos; 
Controlo das condições ambientais (pH, temperatura, concentração de O2 e CO2, etc);
Obtenção de células com boa homogeneidade e bem caracterizadas;
Economia de reagentes, tempo, etc.
Conhecimento de comportamento e função de uma população isolada de células;
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Desvantagens da Cultura Celular
Gasto elevado de material; 
Condição de crescimento da cultura; 
Instabilidade de cultura celular;
Perda de características;
Dificuldade de extrapolação para o modelo de organismo intacto.
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Limitações
Necessidade de operadores experientes (com conhecimentos da técnica em condições assépticas, etc);
Perda de características fenotípicas;
Necessidade do uso de marcadores devido à perda de características fenotípicas;
Instabilidade das células (sobretudo em linhas celulares imortais).
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Aplicações gerais da cultura celular
Estudos funcionais;
Ensaio toxicológico;
Desenvolvimento de novos fármacos;
Citogenética (determinação do cariótipo);
Produção de vacinas anti-virais;
Compreensão de fenómenos de neoplasia;
Estudo da Imunologia;
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As células apresentam as propriedades associadas à sua origem com por exemplo células nervosas estabelecem sinapse com outras, células derivadas do musculo esquelético contraem espontaneamente na placa de cultura Citar exemplos:
células derivadas do músculo esquelético embrionário fundem-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são electricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa;
células epiteliais que formam extensas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto.
Dadas as condições apropriadas a maior parte das células animais e vegetais poderão viver, multiplicar-se até mesmo expressar propriedades diferenciadas numa placa de cultura de tecidos. As células podem ser observadas num microscópio ou analisadas bioquimicamente e os efeitos da adição ou remoção de moléculas específicas, tais como hormonas ou factores d crescimento, podem ser explorados
Células da pele humana, por exemplo, duram por vários meses em cultura, dividindo-se apenas 50 a 100 vezes antes de morrerem. Tem sido sugerido que este limite de tempo de vida está relacionado com o limite de tempo de vida do animal do qual a célula se derivou.
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A- fibroblastos em cultura
B- mioblastos
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Por foto da placa
Tais células apresentam frequentemente muitas propriedades diferenciadas apropriadas à sua origem:
ex.: fibroblastos que continuam a segregar colagénio; 
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Tabela..dos requerimentos
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