DOSAGEM DE BILIRRUBINA

Prévia do material em texto

BIOQUÍMICA-2M 
 
 
 
BILIRRUBINA 
 
Józimo Neto-106 
A bilirrubina é uma molécula tetrapirrólica linear, de caráter fortemente apolar. Essa 
substância é obtida por meio do catabolismo do grupo heme das hemeproteínas. Sendo 
cerca de 85% da bilirrubina total é derivada da hemoglobina, presente nas hemácias, 
pela degradação destas no sistema retículoendotelial. Os 15% restantes advém do 
metabolismo das outras hemeproteínas, como a mioglobina, os citocromos e as 
peroxidases. 
-Existem duas classes de bilirrubina: 
1.Bilirrubina Direta – É a bilirrubina conjugada ao ácido glicurônico, é denominada 
direta, pois, durante a dosagem bioquímica, colore a amostra diretamente sem a 
necessidade de um acelerador (metanol). 
2.Bilirrubina Indireta- É a bilirrubina ainda não conjugada ao ácido glicurônico, chamada 
de indireta, por não corar a amostra imediatamente, fazendo-se necessária a 
administração do acelerador para a coloração do sistema. 
-Metabolismo da bilirrubina no organismo humano:(tomaremos como base o 
catabolismo da Hb) 
No sistema retículoendotelial, o grupamento heme das Hemoglobinas são degradadas 
por macrófagos. Nessa degradação, forma-se a biliverdina, com ação catalítica de 
enzimas hemeoxigenáses microssomias. Esssa biliverdina, por sua vez é reduzida à 
bilirrubina não conjugada, através da catálise da biliverdina redutase. Essa Bilirrubina 
não conjugada é lipossolúvel e viaja no sangue ligada à albumina até que chega aos 
hepatócitos. Já no fígado, a enzima UDPglicuraniltransferase realiza a catálise da 
conjugação do ácido glicurônico e da bilirrubina indireta, formando a bilirrubina direta. 
A bilirrubina direta é secretada na bile por um processo de transporte ativo e no 
intestino, sofre a ação de bactérias dando origem ao urobilinogênio, que possui 3 
caminhos possíveis: é absorvido e de novo excretado na bile (ciclo entero-hepático do 
urobilinogênio) ou é oxidado a urobilina ou estercobilina, que dão a coloração castanha 
às fezes. Ademais, a urobilina também é excretada em baixas concentrações na urina. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Fonte: https://www.youtube.com/watch?v=cdVh8l2U6gY. 
 
Página2 
Significado clínico: 
Hiperbilirubiniemia indireta: 
-Anemia Hemolítica: 
Em virtude da grande taxa de hemólise, haverá a também grande conversão do grupo 
heme da hemoglobina em biliverdina e, por conseguinte, o aumento da bilirubnemia. A 
anemia hemolítica é prevalente em portadores de malária, anemia falciforme e das 
doenças hemolíticas em geral. Além da deficiência de G6PD que gera um estresse 
oxidativo muito grande e a hemácia, portanto, não resiste e acaba rompendo-se. 
**todas essas doenças que aumentam a destruição de hemácias vão aumentar a 
quantidade de bilirrubina no sangue. 
-Icterícia neonatal: 
Ocorre por consequência da Imaturidade dos sistemas hepáticos. A Icterícia neonatal 
consiste no depósito de bilirrubina pele do RN. Essa bilirrubina pode ser quebrada pela 
luz ultravioleta. 
O Kernicterus é uma complicação da icterícia neonatal e correspondente à penetração 
da bilirrubina na barreira hematocefálica, o que provoca a destruição das células 
neurais, sobretudo astrócitos. Isso provoca a degeneração de algumas áreas do sistema 
nervoso central. 
Como a bilirrubina tem muita afinidade aos núcleos auditivos do troco cerebral, ao 
globo pálido e ao núcleo do nervo oculomotor, a sintomatologia do kernicterus consiste 
em: surdez ou redução nervosa drástica na audição, perda ou déficit de coordenação 
motora e paralisação do globo ocular. 
Os RN classificados como PIGs (Pequenos para Idade Gestacional) são muito mais 
afetados pela icterícia, pela prematuridade das estruturas hepáticas e pela pouca 
quantidade de tecido adiposo. Isso ocorre em virtude de o tecido adiposo funcionar com 
uma bomba de infusão: quando do excesso de quantidade de substâncias apolares, 
como a bilirrubina, a gordura atrai essas substâncias e as deposita até que seus níveis 
sanguíneos se normalizem e o adipócito libere-as gradativamente. 
-Síndrome de Crigler Najjar tipo1 e 2: 
Consiste na deficiência da enzima UDPglicuroniltransferase. A diferença da 1 para a 2 
é que na doença genética do tipo 1 ocorre a ausência da UDPglicuroniltransferase, já 
na segunda o funcionamento da enzima é de cerca de 10%. 
-Síndrome de Gilbert: 
Semelhante à Crigler Najjar tipo 2, entretanto a UDPGlicuroniltransferase terá uma 
atividade de cerca de 30%, sendo ainda mais branda. 
-Hiperbilirubinemia tóxica: 
Resultante da disfunção hepática induzida por fármacos e outras substâncias como 
paracetamol, clorofórmio e acetominofeno. 
-Hepatites Virais 
-Cirroses tóxicas e fúngicas. 
 
 
 
 
Página3 
Hiperbilirrubinemia direta: 
-Obstrução da árvore biliar- icterícia biliar. 
-Síndrome de Dubin Jonson- desordem autossômica benigna. 
-Síndrome de Rotor-condição benigna rara. 
 
 
**Clinicamente, vemos a hiperbilirrubinemia como a icterícia: a esclera, pele e 
mucosas amareadas. 
 
 
Fonte: https://www.youtube.com/watch?v=cdVh8l2U6gY. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Página4 
 
Parte do manual de bioquímica MF2 que trata da dosagem de Bilirrubina: 
**Os números à mostra no manual se encontram um tanto desatualizados, hoje já é 
possível dosar a bilirrubina com quantidades consideravelmente menores de soro ou 
plasma. 
 
DOSAGEM DE BILIRRUBINA 
 
 
PRINCÍPIO: 
A bilirrubina é dosada por diazotização e formação de azobilirrubina vermelha com 
absorção máxima em 525 nm. A bilirrubina direta (conjugada ou diglicurônide) é dosada em 
meio aquoso, enquanto a total (direta e indireta) é dosada por ação de potente solubilizador 
de ação catalisadora. A bilirrubina indireta ou não-conjugada é ligada à albumina sérica. 
Em condições normais, a maior parte da bilirrubina plasmática está em estado não-
conjugado. 
 
REAGENTES: 
a. Acelerador: contém cafeína, benzoato de sódio, acetato de sódio e 
surfactante . 
b. Ácido sulfamílico 
c. Nitrito de sódio 
d. Diazo reagente: nitrito de sódio e ácido sulfamílico (preparar no dia do uso). 
 
Amostra: Usar soro ou plasma (Heparina, EDTA). 
 
TÉCNICA: 
 Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir: 
 
 
 
Misturar bem e esperar 5 minutos. Determinar as absorbâncias das bilirrubinas direta e total 
em 525 nm (500 – 540), acertando o zero com o branco. A cor é estável por 30 minutos. 
 
4. CÁLCULOS 
 Bilirrubina (mg/dL) = Absorbância do teste X 10 
 Absorbância do padrão 
 
5. VALORES DE REFERÊNCIA: Bilirrubina direta até 0,4 mg/dL 
 Bilirrubina total: até 1,2 mg/dL 
 Branco Direta Total 
Água destilada 4,5 mL 4,5 mL - 
Acelerador - - 4,5 mL 
Ácido sulfamílico 0,5 mL - - 
Diazo reagente - 0,5 0,5 mL 
Amostra 0,3 mL 0,3 mL 0,3 mL