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BIOLOGIA MOLECULAR
LABORATÓRIOS INTEGRADOS II
CARUARU-PE, 2016
DISCENTES: 
ATHAYNNÁ REBECA
EDMAGDA BARROS
GESSYLLANE LIMA
JOYCE MAYNNA
JULIANA MEIRIELE
MARCIA PERRIER
NIWZABELLY RENATHA
DOCENTE: WALKYRIA SANTANNA
CARUARU-PE,2016
BIOLOGIA MOLECULAR
Baseia-se em Bioquímica, Microbiologia, Genética, Biologia Celular
Investiga interação entre os sistemas celulares e DNA/RNA
Síntese proteica
Clonagem = processo de difusão DNA idênticas e síntese de nova célula
A clonagem se dá em duas etapas:
BIOLOGIA MOLECULAR
ENZIMAS MODIFICADORAS DE DNA:
1 - NUCLEASES E RIBONUCLEASES (Cliva ligação fosfodiéster do RNA e DNA; Exo e Endonucleásica);
2 – LIGASE (Une mol de DNA fita dupla, forma DNA recombinante);
3 – POLIMERASE (Síntese nova fita de DNA)
4 – MODIFICADORAS (Modifica mol de DNA por fostato na ext. 5’);
5 – TOPOISOMERASE (Modifica por superenrolamento)
EXTRAÇÃO DE DNA
Sangue
Tecidos
Células de cultura
Extração plasmídeos de células bacterianas
Purificação de DNA de gel
EXTRAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO DNA
EXTRAÇÃO DO DNA- Lise Membranas
DNA é Liberado
Lise mecânica/ física
Lise Alcalina
Lise Enzimática
PURIFICAÇÃO DO ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO 
- DNA
Remoção dos componentes celulares
Proteinase K, Fenol, Clorofórmio, Nacl
PRECIPITAÇÃO DO DNA
Álcool ( Etanol ou Isopropanol)
Formação do Pellet
REIDRATAÇÃO DO DNA
Água ou Tampão 
Armazenamento
DNA E RNA
EXTRAÇÃO DO DNA
ELETROFORESE
Técnica de separação de partículas de acordo com sua carga elétrica e peso molecular.
ELETROFORESE
Principais reagentes 
Solução tampão
Polímeros
Gel de agarose
Gel de poliacrilamida
Corantes 
ELETROFORESE
APLICAÇÕES 
	A eletroforese é utilizada em inúmeros processos de biologia molecular, entre eles:
Ciência forense
Genética  
Microbiologia.   
Bioquímica 
PCR- REAÇÃO EM CADEIA POLIMERASE
PCR- REAÇÃO EM CADEIA POLIMERASE
PCR- REAÇÃO EM CADEIA POLIMERASE
PCR
VETORES DE CLONAGEM
VETORES DE CLONAGEM
Marca de seleção
Origem da replicação
Sítios múltiplos
Bacteriófagos, Cosmídeos, leveduras, plasmídeos, 
Bac e Yac
CLONAGEM MOLECULAR
CLONAGEM MOLECULAR
TRANSFORMAÇÃO CELULAR
DNA exógeno em células hospedeiras
Escherichia coli
Ocorre in vitro
Transformação bacteriana  DNA plasmidial em larga escala
Atração do DNA pelas células bacterianas é raro
TRANSFORMAÇÃO CELULAR
TRANSFORMAÇÃO CELULAR
Métodos para transformação bacteriana:
Choque térmico (transformação com cloreto de cálcio;
 Eletroporação ( capacitância, itensidade e duração do pulso elétrica.)
SOUTHERN BLOTTING (DNA)
NORTHERN BLOTTING (RNA)
WESTERN BLOTTING (PROTEÍNAS)
MÉTODO FISH
DIAGNÓSTICOS POR FISH
MICROARRAY – CHIP DE DNA
SEQUENCIAMENTO DE DNA
SEQUENCIAMENTO DE DNA
SEQUENCIAMENTO DE DNA
REFERÊNCIAS
AZEVEDO et al. Técnicas básicas em Biologia Molecular. Brasília: UnB, 2003.
 ALBERTS B., BRAY D.; JOHNSON A., LEWIS J., RAFF M., ROBERTS K., WALTER P. Fundamentos da Biologia Celular. 2. ed. Porto Alegre: Artmed, 2006. BROWN, T. A. Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction 5th Ed. Blackwell Scientific, 2006.
 FIELDS, S.; SONG, O. A novel genetic system to detect protein-protein interactions. Nature, v. 340, n. 6230, p. 245-246, 1989 Griffiths, A. J.; Wessler, S. R.; Lewontin, R.C. & Carroll, S. B. Introduction to Genetic Analysis. 9 ed., USA, New York, W.H. Freeman and Company, 2008. 
LEHNINGER, Albert L. NELSON, David L. COX, Michael. Princípios da bioquímica. 3. ed. São Paulo: Sarvier, 2002. LEWIN, B. Genes IX. Porto Alegre, Editora Artes Médicas, 2009. Morales, M.M. Terapias avançadas: células-tronco, terapia gênica e nanotecnologia aplicada á saúde. s/l Atheneu, 2007.