Dosagem da Bilirrubina

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Dosagem da Bilirrubina
Introdução 
 
 O grupo heme da hemoglobina é a fonte predominante de bilirrubina originando 85 % da bilirrubina total produzida (normalmente 250 -300 mg de bilirrubina são formadas por dia). Os 15% restantes originam-se do catabolismo de outras proteínas hemínicas, como a mioglobina, citocromos e as peroxidases. 
 A bilirrubina é produzida nas células reticuloendoteliais do fígado, baço e medula óssea. Essas células engolfam as hemáceas senescentes, fazendo com que elas sejam l isadas e liberem a hemoglobina para ser catabolizada. A onversão de heme em bilirrubina consiste de duas etapas: 1) a heme oxigenase do retículo endoplasmático converte heme em biliverdina; 2) a biliverdina é convertida a bilirrubina por uma enzima citosólica dependente de NADPH, a biliverdina redutase. Após a sua produção nos tecidos, a bilirrubina é transportada ao fígado conjugada com a albumina. A bilirrubina é captada pelos hepatócitos por transporte ativo e é ligada à proteína Z e à li gandina. Dentro dos hepatócitos, a bilirrubina é conjugada com o ácido glicurônico f ormando a bilirrubina monoglicuronídeo ou diglicuronídeo, que são a seguir excretadas na bile. Uma vez secretados no intestino delgado proximal, os glicuronídeos de bilirrubina têm uma reabsorção m ínima. A seguir, ainda no intestino proximal, os glicuronídeos de bilirrubina são hidrolisados ao pigmento não-conjugado pela β-glucuronidase proveniente do fígado, das células epiteliais intestinais e das bactérias intestinais. A bilirrubina não conjugada é reduzida pela flora bacteriana intestinal para formar estercobilinogênio, mesobilinogênio e urobilinogênio, que são pigmentos sem cor conhecidos coletivamente como urobilinogênios. Cerca de 20% dos urobilinogênios são reabsorvidos pelo fígado através da circulação entero -hepática, sendo que a maior parte é reexcretada na bile e somente 2 a 5% entram na circulação geral e apare cem na urina. No intestino di stal, os três urobilinogênios oxidam -se espontaneamente, produzindo os pigmentos estercobilina, mesobilina e urobilina, que são castanho-alaranjados e constituem os pigmentos das fezes. 
 A bilirrubina é um pigmento amarelo, solúvel em lipídeos e em solventes orgânicos, e, por isso pode difundir-se através das membranas celulares. Dentro das células a bilirrubina interfere com muitas reações metabólicas cruciais e a maioria dessas interações não é compreendida até o momento. 
A bilirrubina não conjugada (livre) é também conhecida como bilirrubina de reação i ndireta. A bilirrubina conjugada (glicuronídeo de bilirrubina) é solúvel em água e é conhecida como bilirrubina direta.
A metodologia de dosagem da bilirrubina é baseada nas estruturas polar da bilirrubina conjugada e apolar da bilirrubina não conjugada. 
O método mais empregado é o da diazotização, o qual utiliza o ácido sulfanílico ou diazo-reagente. Este reage diretamente com a bilirrubina conjugada. Entretanto, para que a bilirrubina não conjugada reaja com o ácido sulfanílico, a adição de compostos como a cafeína, o metanol, o etanol ou a ureia a 6 mol/L se faz necessária. 
Provavelmente, esses compostos promovem a quebra das pontes de hidrogênio da molécula de bilirrubina não conjugada, tornando-a solúvel em água. 
Portanto, é possível realizar a dosagem total da bilirrubina com o uso da diazotização. Em uma primeira etapa, dosa-se a quantidade de bilirrubina direta, pela quantificação das moléculas que reagem diretamente com o diazoreagente.
A segunda etapa consiste na adição dos compostos aceleradores da reação do ácido sulfanílico à bilirrubina indireta. E, por fim, dosa-se o valor total obtido. O valor da bilirrubina indireta é obtido pela subtração do valor da bilirrubina direta do valor total.