resumo

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Exames Parasitológico de Fezes
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Exame parasitológico de fezes
Barato, de fácil execução e de grande aplicabilidade clínica.
Segundo a OMS, mais de 2 bilhões de pessoas estão infectadas com algum tipo de parasita.
Tipos de exame de fezes 
  Parasitológico de fezes   Cultura de fezes   Pesquisa de sangue oculto nas fezes   Pesquisa de rotavírus nas fezes
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ei
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EPF: etapas
Exame macroscópico:
Consistência das fezes
Odor
Restos alimentares
Presença de elementos anormais (muco ou sangue e vermes adultos).
Saginata 
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Coleta
Defecar em local limpo e seco. Retirar do início, meio e fim da amostra. Pode ser colhida qualquer evacuação do dia. 
Se houver eliminação de muco, pus ou sangue, colocar amostras que os contenham. 
Não usar laxante. 
 Se houver eliminação de outro material (por ex. vermes ou parte destes), deve ser colocado em outro recipiente limpo.
 
Leve imediatamente a amostra ao laboratório. Caso a coleta tenha sido à noite, guardar o material na geladeira e não congelar. As mulheres devem evitar colher as fezes no período menstrual.
Etiquetar adequadamente
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Coleta e conservação
Utilizar um recipiente limpo e seco 
Frasco próprio, de boca larga, bem fechado e identificado. 
Identificação 
nome do paciente, 
idade, 
Data, 
hora da coleta.
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Coloração
Lugol
Cistos de protozoários e as larvas de helmintos
Hematoxilina férrica
Trofozoitos e cistos de amebas e Giardia.
Henriksen e Pohlenz (Ziehl-Neelsen) e Safranina modificada
Oocistos de coccídeos intestinais (Cryptosporidium parvum, Isospora belli e Ciclospora cayetanensis).
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Importante
Não usar:
Laxantes, antiácidos, bismuto, sulfato ferroso, óleos minerais, contrastes contendo bário, iodo.
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Escolha do Método
Algumas espécies de parasitos só são evidenciadas por técnicas especiais; 
Um exame isolado, onde o resultado é negativo, não deve ser conclusivo, sendo recomendável a sua repetição com outra amostra; 
A produção de cistos, ovos ou larvas não é uniforme ao longo do dia ou do ciclo do parasito.
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EPF:
Exame a fresco: análise do sedimento
Métodos quantitativos: Stoll-Hausheer, Kato-Katz 
Métodos qualitativos: 
Lutz 
MIFC
Willis
Faust
Baermann Moraes
Método da fita gomada.
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Métodos qualitativos 
SEDIMENTAÇÃO ESPONTÂNEA 
	Método de Hoffmann, Pons & Janer (HPJ) ou Lutz
SEDIMENTAÇÃO POR CENTRIFUGAÇÃO 
	Método de Blagg ou MIFC e método de Richie, Coprotest
FLUTUAÇÃO ESPONTÂNEA 
	Método de Willis
CENTRIFUGOFLUTUAÇÃO 
	 Método de Faust
CONCENTRAÇÃO DE LARVAS DE HELMINTOS
	 Método de Baermann-Moraes e método de Rugai. 
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Fezes: armazenamento
Em geladeira: até 3 dias
Adicionando conservantes:
Formol a 10%;
MIF: Merthiolate-Iodo-Formol
SAF: acetato de sódio, ácido acético e formol para protozoários
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Conservantes
Formol 10 %
Ovos e larvas de helmintos
Cistos e oocistos de protozoários
MIF(Mertiolato, iodo e formol)
Ovos e larvas de helmintos
Cistos e oocistos de protozoários
SAF (Acetato de sódio, ácido acético e formol)
Cistos e trofozoítos
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Armazenamento em MIF
As amostras de fezes são colhidas durante 3 dias consecutivos ou não (emissões diferentes) em líquido conservante-MIF.
Colocar pequenas porções das fezes das 3 emissões mergulhadas no MIF e manter em local fresco.
Contra-indicações: laxantes e enemas com utilização de contrastes.
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Método quantitativo:
Análise microscópica
Contagem da quantitativa de ovos e cistos por campos visuais ou por lâmina.
Classificação utilizada por cruzes (+\++++)
Pouco usado na prática
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Método direto
método fácil e barato.
permite visualizar protozoários (trofozoítos e cistos) e helmintos (ovos, larvas e proglotes).
fezes recém-emitidas (no máximo 30 minutos) e normalmente diarreicas.
Método:
Colocar 60/70 mg de fezes em uma lâmina de microscopia. (diluir em salina se necessário)
Cobrir as fezes com lamínula (embebida em solução aquosa de verde de malaquita a 3% ou lugol). 
Examinar ao microscópio
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1- Colocar duas a três gotas de salina 0.85% em um lâmina
2- Com o auxílio de um palito, tocar em vários pontos das fezes, transferindo uma pequena porção destas para a lâmina.
3- Espalhar as fezes, fazendo um esfregaço e examinar com as objetivas de 10x e/ou 40x. A espessura do esfregaço não deve impedir a passagem de luz. 
4- Para a identificação de cistos de protozoários e larvas de helmintos, corar a preparação com lugol. O uso de lamínula é facultativo.
Método direto
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Método qualitativo: 
HPJ: Hoffman, Pons e Janer
Método de sedimentação espontânea;
Permite o encontro de larvas, helmintos e cistos e protozoários;
Material: cálice, bastão de vidro, fezes, água tratada; funil, gaze cirúrgica dobrada em 4, lâmina e lamínula, Lugol, canudinho ou pipeta
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SEDIMENTAÇÃO ESPONTÂNEA - Método de Hoffman, Pons e Janer ( Método de Lutz)
Fundamenta-se na sedimentação espontânea em água, sendo indicado para recuperação de ovos considerados pesados como os de Taenia spp, S. mansoni e ovos inférteis de A. lumbricoides.
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MÉTODO DE HOFFMANN
 ( Sedimentação espontânea)
1. Colocar aproximadamente 2g de fezes em um frasco Borrel, com cerca de 5mL de água, e triturar bem com bastão de vidro.
2. Acrescentar mais 20mL de água.
3. Filtrar a suspensão para um cálice cônico de 200 mL de capacidade, por intermédio de tela metálica ou de náilon, ou gaze cirúrgica dobrada em quatro; os detritos retidos são lavados com mais 20mL de água, agitando-se constantemente com o bastão de vidro, devendo o líquido da lavagem ser recolhido no mesmo cálice.
4. Completar o volume do cálice com água.
5. Deixar essa suspensão em repouso durante duas a 24 horas
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6. Findo esse tempo, observar o aspecto do líquido sobrenadante, tomando uma das duas condutas: 
 	se o líquido estiver turvo, descartá-lo cuidadosamente sem levantar ou perder o sedimento, adicionar mais água até o volume anterior e deixar em repouso por mais 60 minutos; 
se o líquido estiver límpido e o sedimento bom, colher uma amostra do sedimento para exame.
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7. Existem duas técnicas para se colher o sedimento para exame:
a. introduzir uma pipeta
b. desprezar o liquido sobrenadante, homogeneizar o sedimento e colher uma gota do mesmo (esse procedimento é melhor, pois a gota colhida é mais representativa do sedimento).
8. Colocar parte do sedimento numa lâmina e fazer um esfregaço. O uso de lamínulas é facultativo. Examinar com as objetivas de 10x elou 40x. Deve-se examinar, no mínimo, duas lâminas de cada amostra.
9. Para a identificação de cistos de protozoários e larvas de helmintos, corar a preparação com lugol.
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MÉTODO DE MIFC OU DE BLAGG
1. Colher as fezes recém-emitidas em liquido conservador de MIF. 
2. Homogeneizar bem.
3. Filtrar a suspensão de fezes em gaze cirúrgica dobradas em quatro, num copo plástico descartável.
4. Transferir 1 a 2mL do filtrado para um tubo cônico de centrifugação, com capacidade para 15mL.
5. Acrescentar 4 a 5mL de éter sulfúrico e agitar
6. Centrifugar por um minuto a 1.500rpm
7. Com o auxílio de um bastão, descolar a camada de detritos da parede do tubo.
Tempo de centrifugação 10 min.: oocistos de Cryptosporidium parvum e Cyclospora cayetanensis
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MÉTODO DE MIFC OU DE BLAGG
8. Inverter o tubo para desprezar o liquido, mantendo-o com a boca voltada para baixo, até limpar a parede do mesmo, utilizando um bastão de vidro (ou palito de picolé) contendo algodão na extremidade.
9. Acrescentar ao sedimento gotas de salina e/ou lugol.
10. Inverter o tubo em uma lâmina, deixando escoar todo o sedimento. Se a quantidade de sedimento for excessiva, utilizar uma pipeta para colhê-lo e preparar as lâminas.
11. Cobrir com lamínula e examinar com as objetivas de 10x elou 40 x.
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Método de Faust
1. Diluir 10g de fezes em 20mL de água filtrada.
2. Homogeneizar bem.
3. Filtrar através de gaze dobrada em quatro, num copo plástico, e transferir para um tubo de Wasserman (tubo de hemólise).
4. Centrifugar por um minuto a 2.500rpm.
5. Desprezar o líquido sobrenadante e ressuspender o sedimento em água.
6. Repetir as operações 4 e 5 mais duas ou três vezes, até que o líquido sobrenadante fique claro.
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Método qualitativo: 
Faust
Método de centrífugo-flutuação;
Usado para a pesquisa de cistos de protozoários e ovos leves;
Material: solução de fezes e água,
 sulfato de zinco a 33%, 
 tubos de centrífuga, 
 alça de platina,
 lâmina e lamínula, 
 centrífuga, 
 lugol
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Método de Faust
7. Desprezar a água sobrenadante e ressuspender o sedimento com uma solução de sulfato de zinco a 33%, densidade de 1,18g/mL .
8. Centrifugar novamente por um minuto a 2.500rpm.
9. Os cistos e alguns oocistos de protozoários e os ovos leves, presentes na amostra fecal, estarão na película superficial. Recolher a película com alça de platina, colocar numa lâmina, acrescentar uma gota de lugol e cobrir com lamínula. 
10. Examinar com as objetivas de 10x elou 40 x.
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Método qualitativo: 
Baermann-Moraes
Método de concentração para identificação de larvas de helmintos (Strongyloides stercoralis) por migração ativa.
Propriedades de hidrotropismo e termotropismo positivos.
Material: fezes em trouxa de gaze, peneira, água a 45ºC, funil ligado a borracha, pinça de Mohr, centrífuga, microscópio.
Pré-analítico: as fezes tem que ser recém emitidas e não se pode colher em frasco contendo MIF ou outro conservante.
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Métodos de Baermann-Moraes
1. Tomar 8 a 10g de fezes.
2. Colocar numa gaze dobrada em quatro ou em uma peneira.
3. Colocar o material assim preparado sobre um funil de vidro, contendo um tubo de borracha conectado a extremidade inferior de sua haste.
4. Obliterar o tubo de borracha com uma pinça de Hoffman e adicionar, ao funil, água aquecida (45°C) em quantidade suficiente para entrar em contato com as fezes.
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Métodos de Baermann-Moraes
5. Deixar uma hora em repouso.
6. Findo esse tempo, colher 5 a 7mL da água, em um tubo de centrífuga, abrindo-se a pinça.
7. Centrifugar a 1.000rpm por um minuto.
8. Colher o sedimento, sem desprezar o liquido sobrenadante e examinar ao microscópio (10x). Caso se detecte a presença de larvas, essas deverão ser coradas com lugol e observadas com a objetiva de 40x, para identificação.
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Método de Rugai
1. Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e envolvê-lo em uma gaze dobrada em quatro, fazendo uma pequena "trouxa".
2. Colocar o material assim preparado, com a abertura voltada para baixo, num cálice de sedimentação, contendo água aquecida (45°C), em quantidade suficiente para entrar em contato com as fezes.
3. Deixar 1h em repouso.
4. Colher o sedimento no fundo do cálice, com 
a ajuda de uma pipeta.
5. Examinar no microscópio, com a objetiva de 10x.
6. Corar as larvas com o lugol e observá-las com
 o maior aumento, para identificação.
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CONCENTRAÇÃO DE OVOS ATRAVÉS DE FILTRAÇÃO DAS FEZES EM TELA METÁLICA OU DE NÁILON - Método de Kato-Katz - ovos de alguns helmintos
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Método de Kato-Katz
1. Preparar uma solução de verde malaquita (essa solução tem a finalidade de conservar as fezes e clarificar as formas parasitárias), de acordo com a seguinte fórmula:
Glicerina 100mL
Água destilada
Verde-malaquita a 3%
2. Cortar papel celofane semipermeável em pedaços de 24mm por 30mm e deixá-los mergulhados na solução de verde malaquita por pelo menos 24 horas. 
3. Colocar, sobre um papel higiênico, uma porção da amostra de fezes a ser examinada.
4. Comprimir as fezes com um pedaço de tela metálica ou similar de náilon. Nesta malha passam ovos de helmintos e detritos menores do que eles. 
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Método de Kato-Katz
5. Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e transferi-las, com o auxílio de um palito, para o orifício (6mm de diâmetro) de um cartão retangular de plástico, colocado sobre uma lâmina de microscopia.
6. Após encher completamente o orifício, retirar o cartão, cuidadosamente, deixando as fezes sobre a lâmina de vidro. 
7. Cobrir as fezes com a lamínula de papel celofane embebida na solução de verde malaquita, inverter a lâmina, sobre uma folha de papel absorvente e comprimi-la. 
8. Aguardar uma a duas horas e examinar ao microscópio, contando todos os ovos presentes na preparação. 
9. O número de ovos encontrados no esfregaço fecal, multiplicado por 23, corresponderá ao número de ovos por grama de fezes.
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Fita gomada: Grahan
Técnica deve ser realizada ao amanhecer, antes do paciente fazer higiene anal e repetida em dias sucessivos, caso dê negativo e a clínica for fortemente sugestiva.
Material: abaixador de língua ou tubo de ensaio, fita durex, microscópio.
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Técnica: Fita gomada: Grahan
Colocar uma fita adesiva transparente sobre o fundo de um tubo de ensaio, com o lado adesivo para fora.
Abrir a prega anal e encostar a face adesiva várias vezes na região perianal.
Fixar a fita em lâmina
 Observar ao MO.
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Oxiúrius fêmeas na pele peri anal
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Fita gomada
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MIFc
Trata-se de técnica de concentração por centrifugação;
Material: fezes em suspensão com água ou MIF; tubo cônico, éter, centrífuga, gaze montada em pinça, lâmina e lamínula, lugol
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Laudo: como redigir??
Descrever separadamente ovos de helmintos;
Cistos de protozoários
Larvas
Nome científico correto em itálico
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Conclusão
EPF apresenta grande aplicabilidade clínica.
Quando realizado em amostras seriadas tem alta sensibilidade, principalmente em se tratando de populações de alto risco epidemiológico para doenças parasitárias. 
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Indicações X tipo de exame a ser pedido
D. Maria, procura o pediatra e diz que o seu filho de 5 anos não dorme bem devido a prurido anal intenso. Informa que seu marido está com sintomas semelhantes.
Fita adesiva
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JFV 21 anos queixa de dor epigástrica intensa. Dor melhora com a alimentação. Há dois meses fez EDA que foi normal. É escoteiro e adora acampar.
Método geral (Sedimentação e Centrifugação)
Especifico para larvas (Baermann-Morais ou Rugai)
Cistos (Faust) 
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PPO, 7 anos, estudante foi levado a consulta devido a quadro pneumônico, dipnéia do tipo asmatiforme.
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EFA 26 anos, cozinheira, refere diarreia aguda. Afebril. Fezes com restos alimentares.
Método geral (Sedimentação e Centrifugação)
Especifico para larvas (Baermann-Morais ou Rugai)
Cistos (Faust) 
e uma gota de lugol na metade direita da lâmina;
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