Imuno_Diagnostico2013

Prévia do material em texto

1 
PRINCIPAIS MÉTODOS 
IMUNOLÓGICOS DE 
DIAGNÓSTICO 
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO 
(quantificação de precipitados formados 
pela reação antígeno-anticorpo) 
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO 
2 
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO 
 Em meio líquido ou em gel; 
 
 Coloca-se a amostra (soro); 
 
 A precipitação pode determinar-se pelo 
aparecimento de sedimento ou linhas (gel); 
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO 
Adição de anticorpo 
contra 
Proteína de interesse 
Anticorpo liga a 
Proteína de 
interesse 
Adição de Proteína A 
ou G formando 
complexo insolúvel 
Centrifugação, formação 
de sedimento, remoção 
do sobrenadante 
3 
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO 
Imunodifusão simples  Ou o Antígeno ou 
o anticorpo é fixo  o outro se move para 
formar o complexo. 
 
 
Imunodifusão dupla  ambos movem-se. 
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO 
 Imunoeletroforese: 
 Migração de partículas em um solvente 
condutor sob influência de um campo 
elétrico. 
 As proteínas possuem cargas elétricas 
positivas e negativas e, portanto podem 
caminhar para o pólo positivo se tiver carga 
negativa e vice-versa. 
 Na imunoeletroforese há primeiro a 
separação das proteínas através de 
eletroforese e depois há imunodifusão. 
4 
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO 
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO: 
 
 Formação de agregados visíveis como 
resultado da interação de anticorpos e 
anticorpos. 
 Uso de partículas antigênicas 
insolúveis. 
 Ex: tipagem de grupos sanguíneos. 
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO 
hemácia 
5 
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO 
REAÇÃO DE FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO: 
 
 A ligação antígeno-anticorpo promove a 
fixação do complemento, cujo consumo, in vitro 
pode ser empregado para detectar a presença de 
anticorpos, de antígenos ou de ambos. 
 
 Atualmente não é muito utilizado, pois há 
outros testes mais sensíveis e menos trabalhosos. 
REAÇÃO DE FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO 
6 
REAÇÃO DE FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO 
IMUNOFLUORESCÊNCIA 
IMUNOFLUORESCÊNCIA: 
 
 DIRETA: é usada para a detecção de 
antígenos em tecidos usando anticorpo com 
substância fluorescente. 
 
7 
 INDIRETA: é a detecção de anticorpos 
contra alvo antigênico específico fixado em 
uma lâmina. Utiliza também um anti-
anticorpo marcado com substância 
fluorescente. 
IMUNOFLUORESCÊNCIA 
Esquema mostra a técnica indireta (se fosse a 
direta teria apenas um anticorpo). 
IMUNOFLUORESCÊNCIA 
8 
 Tem como limitação a necessidade de 
uso de microscópio de fluorescência. 
IMUNOFLUORESCÊNCIA 
IMUNOFLUORESCÊNCIA 
Exemplos da técnica para detecção de Chlamydia . 
9 
Teste ELISA (Enzyme-Linked 
Immunosorbent assay): 
 Usado para quantificar antígenos ou 
anticorpos fixados numa fase sólida. 
 Teste tem muitas vantagens: 
 sensível; 
 relativamente barato; 
 várias amostras podem ser analisadas 
simultaneamente. 
ELISA 
ELISA 
Há variações deste teste, mas a técnica mais 
utilizada segue as seguintes etapas: 
 
1º - Antígeno conhecido fixado na fase sólida; 
2º - Introdução do anticorpo de captura (liga ao 
antígeno); 
3º - Introdução do anticorpo de detecção (é um 
antianticorpo que se liga ao anticorpo de captura) + 
enzima; 
4º - Introdução de um substrato da enzima (que 
permite a reação) 
10 
 
 
 
 
 
ANTÍGENO 
ANTICORPO DE CAPTURA 
ANTICORPO DE DETECÇÃO 
 
ELISA 
ELISA 
11 
ELISA 
-Resultado: a intensidade do produto corado é 
então determinada por espectrofotômetro. 
ELISA 
ELISA SANDUÍCHE 
Antígeno 
Anticorpo 
de captura 
Anticorpo de 
detecção + 
enzima